Bu protokolün amacı, subakut oküler hipertansiyonu indükleyen limbal vasküler pleksusun 360° termik koterizasyonuna dayanan yeni bir glokomatöz nörodejenerasyon modelini karakterize etmektir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kemirgenlerde Cerrahi Olarak İndüklenen Glokom için Limbal Vasküler Pleksusun Tam Daire Koterizasyonu
Bu makalede
Özet
Özet
Dünya çapında körlüğün ikinci önde gelen nedeni olan glokom, optik sinirde yapısal hasar ve retina ganglion hücresi (RGC) dejenerasyonu ile karakterize, gözden beyne görsel bilgi iletimini kesintiye uğratarak görsel işlev bozukluğuna neden olan heterojen bir oküler bozukluk grubudur. Göz içi basıncının yükselmesi en önemli risk faktörüdür; Bu nedenle, hastalığın nedenlerini ve etkilerini araştırmak için genetik veya deneysel yaklaşımlarla kemirgenlerde çeşitli oküler hipertansiyon modelleri geliştirilmiştir. Bunlar arasında cerrahi invazivlik, yetersiz fonksiyonel değerlendirme, kapsamlı eğitim gereksinimi ve retina hasarının oldukça değişken uzantısı gibi bazı sınırlamalar bildirilmiştir. Bu çalışma, sulu mizah drenajının önemli bir bileşeni olan limbal vasküler pleksusun düşük sıcaklıkta, tam daire koterizasyonuna dayalı olarak kemirgenlerde oküler hipertansiyonu indüklemek için basit, düşük maliyetli ve etkili bir yöntemi karakterize etmektedir. Yeni model, ilerleyici RGC ve optik sinir dejenerasyonu ile ilişkili, teknik olarak kolay, noninvaziv ve tekrarlanabilir bir subakut oküler hipertansiyon ve hem elektrofizyolojik hem de davranışsal yöntemlerle in vivo fonksiyonel çalışmalara izin veren benzersiz bir postoperatif klinik iyileşme oranı sağlar.
Giriş
Tıp literatürü glokomu, retinal ganglion hücrelerinin (RGC'ler), dendritlerin, soma ve aksonların ilerleyici dejenerasyonu ile karakterize heterojen bir optik nöropati grubu olarak anlamaktadır, bu da optik diskin yapısal çukurluğu (kazısı) ve optik sinirin fonksiyonel bozulması ile sonuçlanan, kontrolsüz vakalarda gözden beyne görsel bilgi iletimini kesintiye uğratarak amaurozise yol açmaktadır1. Glokom şu anda dünya çapında geri dönüşü olmayan körlüğün en yaygın nedenidir ve 2040 yılında yaklaşık 111,8 milyon kişiye ulaşacağı tahmin edilmektedir2, bu nedenle hastaların yaşam kalitesini (YK) derinden etkilemekte ve önem....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm prosedürler, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin (ARVO) Oftalmik ve Görsel Araştırmalarında Hayvanların Kullanımına İlişkin Bildiri'ye uygun olarak gerçekleştirildi ve Rio de Janeiro Federal Üniversitesi Sağlık Bilimleri Merkezi'nden Bilimsel Deneylerde Hayvanların Kullanımına İlişkin Etik Komite tarafından onaylandı (protokol 083/17). Bu çalışmada, her iki cinsiyetten 2-3 aylık ve 180-320 g ağırlığındaki Lister Hooded sıçanlar kullanıldı. Bununla birlikte, prosedür çeşitli yaş aralıklarındaki farklı sıçan suşlarına uyarlanabilir.
1. Oküler hipertansiyon cerrahisi ve klinik takibi
- Ev hayvanları, kon....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Kantitatif değişkenler ortalama ± ortalamanın standart hatası (SEM) olarak ifade edilir. OHT ve kontrol grupları arasındaki GİB dinamiklerinin karşılaştırılması dışında (Şekil 1F), istatistiksel analiz iki yönlü ANOVA ve ardından Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi kullanılarak yapıldı. p değerinin 0.05< olması istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi.
Şekil 1 , limbal damarların 360° termal kaynaklı kaybolması ve prosedürün sonund.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Limbal pleksus koterizasyonu (LPC), konjonktival veya zıvana diseksiyonu gerektirmeyen, kolay erişilebilir vasküler yapıları hedefleme avantajına sahip yeni bir trabeküler modeldir17,28. Koroid venöz drenajın cerrahi bozukluğuna dayanan ünlü bir OHT modeli olan vorteks venler koterizasyon modelinden farklı olarak, limbal venler sulu mizah çıkışında yukarı akışta yer aldığından, venöz tıkanıklığın LPC modelinde GİB artışını etkilemesi beklenmemektedir. Ayrıca, tek.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Laboratuvar teknisyenlerimiz José'ye; Nilson dos Santos, Daianne Mandarino Torres, José Francisco Tibúrcio, Gildo Brito de Souza ve Luciano Cavalcante Ferreira. Bu araştırma FAPERJ, CNPq ve CAPES tarafından finanse edilmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Aseton | Isofar | 201 | Elektron mikroskobu doku hazırlığı için kullanılır (adım 5) |
| Elektroretinografi için aktif elektrot | Hansol Medical | Co-Paslanmaz | çelik iğne 0,25 mm ve kez; 15 mm |
| Anestalcon | Novartis Biociê ncias S / A | MS-1.0068.1087 | Proxymetakain hidroklorür% 0.5 |
| Kalsiyum klorür | Vetec | 560 | Elektron mikroskobu doku hazırlığı için kullanılır (adım 5) |
| Koter Düşük Sıcaklık İnce Uç 10 / bx | Bovie Medical Corporation | AA00 | Düşük sıcaklıkta oftalmik koter |
| Cetamin | Syntec do Brasil Ltda | 000200-3-000003 | Ketamin hidroklorür% 10 |
| DAKO | Dako Kuzey Amerika | S3023 | Antifade montaj ortamı |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific | 28718-90-3 | diamidino-2-fenilindol; mavi floresan nükleer karşı boya; 452 & plusmn'de emisyon; 3 nm |
| Ekofilm | Kristali; lia Produtos Quí micos Farmaç ve Çevre; uticos Ltda | MS-1.0298.0487 | Karmeloz sodyum %0.5 |
| EPON Reçine | Polysciences, Inc. | - | Elektron mikroskobu için kullanılan, dört reaktifin karışımından oluşan epoksi reçine: Poli/Yatak 812 Reçinesi (CAT#08791); DDSA - Dodecensilsüksinik Anhidrit (CAT#00563); NMA - Nadik Metil Anhidrit (CAT#00886); DMP-30 - 2,4,6-tris (dimetilaminometil) fenol (CAT # 00553) |
| Glutaraldehit | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 16110 | Elektron mikroskobu doku hazırlığı için kullanılır (adım 5) |
| Hyabak | Uniã o Quí mika Farmaç & ecirc; utica Nacional S/A | MS-8042140002 | Sodyum hyaluronat %0.15 |
| Icare Tonolab | Icare Finlandiya Oy | TV02 (model numarası) | Ribaund el tonometresi |
| IgG eşek anti-fare antikoru + Alexa Fluor 555 | Thermo Fisher Scientific | A31570 | İkincil antikor çözeltisi |
| LCD monitör 23 inç | Samsung Electronics Co., Ltd. | S23B550 | Model LS23B550, elektroretinogram kaydı için |
| LSM 510 Meta | Carl Zeiss-Konfokal | epifloresan mikroskobu | |
| Maxiflox | Cristá lia Produtos Quí micos Farmaç ve Çevre; uticos Ltda | MS-1.0298.0489 | Siprofloksasin 3.5 mg / g |
| MEB-9400K | Nihon Kohden | Corporation-Elektroretinogram kaydı için | |
| sistem monoklonal IgG1 fare anti-Brn3a | MilliporeSigma | MAB-1585 | Brn3a birincil antikor çözeltisi |
| Neuropack Manager v08.33 | Nihon Kohden | Corporation-Elektroretinogram sinyal işleme yazılımı | |
| Optomotri | Serebral Mekanik | Optomotor tepki analizi için sistem | |
| Osmiyum tetroksit | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 19100 | Elektron mikroskobu doku hazırlığı için kullanılır (adım 5) |
| Potasyum ferrosiyanür | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 20150 | Elektron mikroskobu doku hazırlığı için kullanılır (adım 5) |
| Elektroretinografi için referans ve toprak elektrotları | Chalgren Enterprises | 110-63 | Paslanmaz çelik iğneler 0,4 mm ve kez; 37 mm |
| Sodyum kakodilat tamponu | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 12300 | Elektron mikroskobu doku hazırlığı için kullanılır (adım 5) |
| Ster MD | Uniã o Quí mika Farmaç & ecirc; utica Nacional S / A | MS-1.0497.1287 | Prednizolon asetat% 0.12 |
| Terolac | Crist á lia Produtos Quí micos Farmaç ve Çevre; uticos Ltda | MS-1.0497.1286 | Ketorolak trometamol %0.5 |
| Terramicina | Laboratuvarı&oakut; rios Pfizer Ltda | MS-1.0216.0024 | Oksitetrasiklin hidroklorür 30 mg/g + polimiksin B 10.000 U/g |
| Tono-Pen XL | Reichert Technologies | 230635 | Dijital aplanasyon el tipi tonometre |
| TO-PRO-3 | Thermo Fisher Scientific | T3605 | Uzak kırmızı floresan nükleer karşı boya; 661 nm'de emisyon |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | 9036-19-5 | İyonik olmayan yüzey aktif madde |
| Uranil asetat | Elektron Mikroskobu Bilimleri | 22400 | Elektron mikroskobu doku hazırlığı için kullanılır (adım 5) |
| Xilazin | Syntec do Brasil Ltda | 7899 | Ksilazin hidroklorür % |
| Carl Zeiss-Cerrahi | ve retina diseksiyonu için stereo mikroskop |
Kaynaklar
- Weinreb, R. N., Aung, T., Medeiros, F. A. The Pathophysiology and Treatment of Glaucoma A Review. JAMA. 311 (8), 1901-1911 (2014).
- Tham, Y. C., et al. Global prevalence of glaucoma and projections of glaucoma burden through 2040: A systematic ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
