Yöntem makalesi

Crohn Hastalığında Mekanik Stresin Patojenik Rolünü İncelemek için TNBS Kaynaklı Bir Kemirgen Modeli

DOI:

10.3791/63499

⸱

1 Mart 2022

 ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine, the University of Texas Medical Branch, 2Department of Pathology, the University of Texas Medical Branch

* These authors contributed equally

Bu makalede

Düzeltme bildirimi

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mevcut protokol, kemirgenlerde Crohn benzeri bir kolit modelinin gelişimini açıklamaktadır. Transmural inflamasyon TNBS damlatma bölgesinde darlığa yol açar ve darlığa yakın segmentte mekanik genişleme gözlenir. Bu değişiklikler kolitte mekanik stresin incelenmesine izin verir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Crohn hastalığı (CD) gibi inflamatuar bağırsak hastalıkları (IBD), Avrupa ve ABD'de 1.00.000'de yaklaşık 20'yi etkileyen gastrointestinal sistemin kronik enflamatuar hastalıklarıdır. ÇH transmural inflamasyon, intestinal fibroz ve luminal stenoz ile karakterizedir. Anti-inflamatuar tedaviler inflamasyonu kontrol etmeye yardımcı olsa da, CD'de fibroz ve darlık üzerinde hiçbir etkinliği yoktur. ÇH'nin patogenezi tam olarak anlaşılamamıştır. Mevcut çalışmalar esas olarak düzensiz bağırsak immün yanıt mekanizmalarını tanımlamaya odaklanmaktadır. CD ile ilişkili transmural inflamasyon, intestinal fibroz ve luminal stenozun hepsi bağırsak duvarına mekanik stresi temsil ederken, mekanik stresin CD'deki rolü iyi tanımlanmamıştır. Mekanik stresin CD'de bağımsız bir patojenik rol oynayıp oynamadığını belirlemek için, kemirgenlerde TNBS kaynaklı CD benzeri kolit modelinin bir protokolü geliştirilmiştir. TNBS ile indüklenen bu transmural inflamasyon ve fibroz modeli, kolondaki ÇH'nin patolojik özelliklerine benzemektedir. TNBS'nin yetişkin Sprague-Dawley sıçanlarının distal kolonuna intrakolonik damlatılması ile indüklenir. Bu modelde transmural inflamasyon TNBS damlatma bölgesinde darlığa yol açar (Site I). Mekanik distansiyon, damlatma bölgesine (Site P) proksimal kısımda gözlenir, mekanik stresi temsil eder, ancak görünür inflamasyonu temsil etmez. Enflamasyona distal kolonik kısım (Site D) ne inflamasyon ne de mekanik stres göstermez. Farklı bölgelerde (P, I ve D) gen ekspresyonu, immün yanıt, fibroz ve düz kas büyümesinde belirgin değişiklikler gözlendi ve mekanik stresin derin bir etkisi vurgulandı. Bu nedenle, bu CD benzeri kolit modeli, CD'nin patojenik mekanizmalarını, özellikle mekanik stresin ve mekanik strese bağlı gen ekspresyonunun immün disregülasyon, bağırsak fibrozu ve CD'deki doku yeniden şekillenmesindeki rolünü daha iyi anlamamıza yardımcı olacaktır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ülseratif kolit (UC) ve Crohn hastalığı (CD) dahil olmak üzere inflamatuar barsak hastalığı (IBD), gastrointestinal (GI) sistemde kronik inflamasyon ile karakterizedir. ~ 1-2 milyon Amerikalıyı etkiler1. ABD'de IBD bakımı için tahmini yıllık maliyetler 11,8 milyar dolardır. UC'den farklı olarak, CD transmural inflamasyon ve striktür oluşumu 2,3 ile karakterizedir. Darlık oluşumu (darlık) ÇH hastalarının %70'inde görülür 3 ve transmural inflamasyondan (inflamatuar stenoz) veya intestinalfibrozdan (fibrotik stenoz) kaynaklanabilir4,5. İntestinal fibrozis, aşırı kollajen birikimi ve proseste yer alan ana mezenkimal hücre tiplerinden biri olarak düz kas hücreleri (SMC) ile diğer hücre dışı matrisler (ECM) ile karakterizedir 3,4. Hipertrofi ile ilişkili düz kas hiperplazisi, CD6'da fibrotik stenozda bir diğer önemli histolojik değişikliktir. ÇH'de darlık oluşumu kronik inflamasyon ile ilişkili olmasına rağmen, cerrahi tedavi dışında hiçbir antienflamatuar tedavi etkili değildir 2,6. Ancak ameliyat sonrası nüksler yeterli süre verildiğinde neredeyse %100'dür 2,7. Enflamatuar bir yanıt olarak, fibroz ve SMC hiperplazisi bağırsakta enflamatuar olmayan durumlarda (yani bağırsak tıkanıklığı) da gelişebilir 8,9; striktür oluşumunda hem inflamasyona bağımlı hem de bağımsız mekanizmaların rol oynadığı düşünülmektedir 3,4. Enflamasyona bağımlı mekanizmalara yönelik kapsamlı araştırmaların striktür oluşumu için etkili bir tedaviye dönüşmediği göz önüne alındığında, bağırsak fibrozisinde inflamasyondan bağımsız mekanizmaların olası rolüne ilişkin çalışmalara ihtiyaç vardır.

Non-inflamatuar bir faktör olarak ödem, inflamatuar hücre infiltrasyonu, doku deformasyonu, fibrozis ve darlık ile ilişkili mekanik stres (MS)10,11,12,13 İBH'de, özellikle transmural inflamasyon ile karakterize ÇH'de sık rastlanmaktadır. Mekanik stres en çok inflamasyon bölgesindeki darlığın (inflamatuar veya fibrotik) lokal dokuda mekanik stres oluşturduğu ve obstrüksiyon bölgesine yakın segmentte lümen distansiyonuna yol açtığı stenotik CD'de dikkat çekicidir10,14. Önceki in vitro çalışmalar, mekanik stresin gastrointestinal dokularda, özellikle bağırsak düz kas hücrelerinde (SMC) spesifik inflamatuar mediatörlerin (yani, COX-2, IL-6) 8,14,15 ve büyüme faktörlerinin (yani TGF-β) gen ekspresyonunu değiştirdiğini göstermiştir. Son zamanlarda yapılan çalışmalar ayrıca, bağ dokusu büyüme faktörü (CTGF) gibi spesifik pro-fibrotik mediatörlerin ekspresyonunun mekanik strese karşı oldukça duyarlı olduğunu bulmuştur17,18. Mekanik stresin CD ile ilişkili inflamasyon, fibroz ve doku yeniden şekillenmesinde bağımsız bir patojenik rol oynayabileceği varsayılmıştır. Bununla birlikte, bağırsak iltihabı, fibroz ve CD'deki düz kas hiperplazisinde mekanik stresin patojenik önemi büyük ölçüde keşfedilmemiştir. Bunun nedeni kısmen inflamasyonun mekanik stresten daha görünür ve daha iyi çalışılmış bir süreç olması olabilir. Daha da önemlisi, mekanik stresin etkisini inflamasyonunkinden ayırt etmek için iyi tanımlanmış bir hayvan modeli yoktur.

Mevcut çalışma, CD'deki mekanik stresin rolünü incelemek amacıyla hizmet edebilecek hapten reaktifi 2,4,6-trinitrobenzen sülfonik asit (TNBS)19,20'nin intrakolonik enjeksiyonu ile indüklenen Crohn benzeri kolitin kemirgen modelini tanımlamaktadır. TNBS instilasyonunun distal kolonda lümen daralması (darlık) ile lokalize (~2 cm uzunluğunda) transmural inflamasyona neden olduğu bulundu. Darlık, belirgin barsak distansiyonuna (mekanik stres) yol açar14,15 ancak damlatma bölgesine proksimal kolon segmentinde gözle görülmeyen inflamasyona yol açar. Aksine, darlık bölgesine distal olan kolon segmenti ne inflamasyon ne de mekanik stres göstermez. Üç farklı bölgede gen ekspresyonu, inflamasyon, fibroz ve SMC hiperplazisinde bölgeye özgü önemli değişiklikler gözlendi. Sonuçlar, mekanik stresin, özellikle mekanik strese bağlı gen ekspresyonunun, Crohn kolitinde fibroz ve hiperplazi gelişiminde kritik bir rol oynayabileceğini düşündürmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan deneyleri, Teksas Üniversitesi Tıp Şubesi'nin (#0907051C) kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesine göre yürütülmüştür. Çalışma için ~ 8-9 haftalık erkek veya dişi Sprague-Dawley sıçanları kullanıldı.

1. Hayvan hazırlığı

  1. Hızlı sıçanlar 24 saat boyunca ve gece boyunca müshil (bağırsak temizleyici, Malzeme Tablosuna bakınız) ile tedavi edin.
  2. Ertesi gün, TNBS uygulaması sırasında 1 L / dak oksijen ile birlikte% 2 izoflurana maruz bırakarak bir anestezi sistemi kullanarak sıçanları anestezi altına alın ( Malzeme Tablosuna bakınız). Anesteziyi onaylamak için refleksleri kontrol edin veya ayak parmaklarını sıkıştırın.
  3. Vücut ağırlıklarına göre taze TNBS çözeltisi hazırlayın.
    NOT: TNBS - 65 mg / kg vücut ağırlığında 250 μL% 40 etanol kullanıldı.
  4. Sıçanları anestezi masasında sırtüstü pozisyonda koyun. Koliti indüklemek için, anüs içinden anal köşeden ~ 7-8 cm boyunca tıbbi sınıf açık uçlu bir poliüretan kateter yerleştirin ve TNBS'yi (adım 1.3'te hazırlanan) kolon19'a nazikçe damlatın. Sahte kontrol sıçanlarını sadece 250 μL salin ile uygulayın.
  5. TNBS veya salin damlattıktan sonra, TNBS dağılımına yardımcı olmak ve dökülmeleri önlemek için sıçanları sırtüstü ve hafif baş aşağı pozisyonda (~ 30 °) tutun, anüs 2 dakika kapalı tutun.
  6. Sıçanlara 7 gün boyunca yiyecek ve su ad libitum sağlayın ve sıçanları vücut ağırlığı, yiyecek alımları, dışkı ve genel sağlık durumu için günlük olarak gözlemleyin.

2. Doku preparatları

  1. Ötanazi gününde, CO2 inhalasyonunu kullanarak sıçanları ötenazi yapın ve servikal çıkık ile ötenaziyi onaylayın.
  2. Cerrahi sınıf makas ve forseps kullanarak sıçan karnını açın.
  3. Tüm kolonu (anal kanalın üstünde) dikkatlice çıkarın ve kolonu hemen buz gibi soğuk 1x HBSS tamponuna aktarın.
  4. Tampondaki iki noktayı düzeltin ve bir cetvel kullanarak iki nokta üst üste uzunluğunu ölçün. Naylon ipliği alın ve kontroldeki kolon segmentlerinin ve TNBS ile tedavi edilen sıçanların dış çevresini ölçmek için kolonun etrafında daire çizin. Histoloji için tam kalınlıkta dokular alın.
  5. Kolonu mezenterik tahta boyunca kesin ve kolonu HBSS tamponu ile iyice temizleyin. Makroskopik inflamasyon skoru için kolonu, daha önce tarif edildiği gibi kriterlere göre değerlendirin19 minimal modifikasyonlarla.
    NOT: 0 = normal mukoza; 1 = lokalize hiperemi ancak erozyon veya ülser yok; 2 = ülser ve darlık (etkilenen bölge < 5 mm); 3 = şiddetli ülser, yara izi ve darlık (etkilenen bölge > 5 mm).
  6. TNBS ile tedavi edilen sıçanlardan sırasıyla P bölgesinden (inflamasyon bölgesinin oral marjından 2-3 cm önceki kısım), bölge I'den (inflamasyon bölgesi, tipik olarak TNBS'nin aşılandığı kolonun ucundan 4-6 cm) ve D bölgesinden (inflamasyon bölgesinin aboral marjına 1-2 cm distal kısım) kolon dokusu örnekleri toplayın.
    NOT: Her segmentten ~1-2 cm uzunluğunda kolon dokusu alındı. Ayrıca salin ile tedavi edilen sıçanların 2 cm uzunluğundaki (kolonun ucundan ~4-6 cm) kolon dokuları sahte kontrol (S) olarak alınmıştır (Şekil 1).
  7. Tam kalınlıkta preparasyon için her bölgeden doku örnekleri alın ve istenirse sırasıyla mukoza / submukoza ve muscularis eksterna katmanları ve21,22.
  8. Doku örneklerini bir yıla kadar ve gelecekteki amaçlar için (yani, RNA preparatları) depolamak için -80 ° C'de saklamadan önce sıvı azotta dondurun.

3. Bağırsak iltihabı ve fibrozisin histopatolojik değerlendirmesi

  1. Tam kalınlıktaki kolon dokularını 48 saat boyunca% 10 formalin içinde sabitleyin, ardından 24-48 saat boyunca% 70 etanol'e aktarın.
  2. Hematoksilin ve eozin (H & E) ve Masson'un Trikrom boyaları 6,19,23 için sırasıyla 5 μm kalınlığında parafin kesitlerini kesmek için bir mikrotom kullanın (bkz.
  3. Uyumlu yazılıma sahip yüksek çözünürlüklü bir kamerayla donatılmış dik bir mikroskopla görüntüleri elde edin ve görüntüleyin (bkz.
  4. Dereceli inflamasyon ve fibrozis indeksleri, daha önce tarif edilen kriterlere göre bir gastrointestinal cerrahi patolog da dahil olmak üzere iki bağımsız araştırmacı tarafından 6,23 modifikasyonlarla birlikte. Puanlar için Ek Dosya 1'e bakın.
  5. Her H&E boyalı numunenin dört görünümünde kesit başına dairesel ve uzunlamasına kas katmanlarının kalınlığını ve hücre numaralarını ölçün ve her örnek için dört ölçümün ortalamasını alın.

4. RNA ekstraksiyonu ve kantitatif RT-PCR

  1. Sahte kontrolden ve TNBS kolit sıçanlarının üç bölgesinden (P, I, D) elde edilen eksize kolon dokularını, bir RNA ekstraksiyon kitinin ekstraksiyon reaktifinde homojenize edin (bakınız Malzeme Tablosu).
  2. Kiti kullanarak RNA'yı her numuneden izole edin. RNA peletini 30 μL RNaz içermeyen suda süzün.
  3. RNA konsantrasyonunu ölçün ve bir mikro hacimli UV-Vis spektrofotometresi kullanarak saflığı kontrol edin (bkz.
  4. RNA sentez kitini kullanarak cDNA21,22'yi sentezlemek için 1 μg toplam RNA kullanın (bkz.
  5. Gerçek zamanlı PCR sistemi için ticari bir PCR kiti kullanarak şablon olarak 50 ng cDNA, IL-6 probları ve CTGF ile gerçek zamanlı PCR gerçekleştirerek gen ekspresyon seviyelerini analiz edin ve ölçün (bkz.
  6. Örnekleri normalleştirmek ve elde edilen Cq değerlerini kullanarak göreceli gen ekspresyonunu ölçmek için kontrol geni 18S rRNA'yı kullanın.

5. İstatistiksel analiz

  1. Sahte kontrol ve TNBS kolit sıçanlarını karşılaştırmak için istatistiksel analiz yazılımını kullanın (bakınız Malzeme Tablosu).
  2. 0.05 < p değerinin istatistiksel olarak anlamlı15,19 olduğunu düşünün.
  3. İki grup arasındaki farkları test etmek için, Student'ın t-testi analizini kullanın ve karşılaştırmalar ikiden fazla grup15,19 ise bir ANOVA testi yapın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

TNBS'nin intrakolonik instilasyonu ile indüklenen Crohn benzeri kolitin makroskopik görünümü
Şekil 1'de gösterildiği gibi, sıçanlarda TNBS'nin intrakolonik damlatılması, distal kolonda damlatma bölgesinde kalınlaşmış bağırsak duvarı ve daralmış lümen (stenoz) ile lokalize bir transmural inflamasyona (~ 2 cm uzunluğunda) neden olmuştur (Şekil 1A). TNBS damlatma yeri site I olarak adlandırılır. Transmural inflamasyon ve darlığın bir sonucu olar...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

TNBS kaynaklı kolit 1989 yılında tanıtıldı ve o zamandan beri Crohn hastalığının deneysel bir modeli olarak kullanıldı 19,20,23. Kemirgenlerde bu modelin önemli özellikleri, insan Crohn hastalığında geliştirilen histopatolojik lezyonlara çok benzeyen bir transmural inflamasyonun gelişmesini içerir19,20. Model üzerinde yapılan önceki çalışmalar, esas olarak görünür inflam...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar çıkar çatışması olmadığını ve açıklayacak hiçbir şeyleri olmadığını bildirmektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma kısmen NIH (R01 DK124611'den XZS'ye) ve ABD Savunma Bakanlığı'ndan (W81XWH-20-1-0681'den XZS'ye) gelen hibelerle desteklenmektedir. Histoloji çalışmaları UTMB Cerrahi Patoloji Laboratuvarı yardımıyla yapıldı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ACT-1 Kontrol Yazılımı Ver2.63NikonDXM1200F
C1000 96 Kuyulu Hızlı Reaksiyon Modüllü Dokunmatik Termal DöngüleyiciBIO-RAD1851196
CFX96 Optik Reaksiyon ModülüBIO-RAD1845097
Dako Agilent Artisan Link Pro Özel boyayıcıDakoAR310
Dako-Agilent Masson's Trikrom Kiti ref# AR173DakoAR173
DXM1200 Dijital Renkli HR KameraNikonDXM1200
Ökaryotik 18S rRNA Endojen KontrolThermoFisher Scientific4352930E
EZ AnesteziEZ Sistemleri A.Ş.EZ-155
GraphPad Prism 9GraphPad9.0.2 (161)
Sert Kabuklu 96 Kuyulu PCR Plakaları, düşük profilli, ince duvarlı, etekli, beyaz/şeffafBIO-RADHSP9601
HBSS (Corning Hank'in Dengeli Tuz Çözeltisi, 1x kalsiyum ve magnezyum içermez)CORNING21-021-CV
HM 325Mikrotom Termo Bilimsel23-900-667
IsofluranPiramalNDC 66794-017-10
LI-COR Odyssey Dijital Görüntüleme SistemiLI-COR9120
Mastercycler epGradient Kontrol Panelli Termal Döngüleyici 5340 Termal DöngüleyiciEppendorf5341
Tıbbi sınıf açık uçlu poliüretan kateterCovidien8890703013
NanoDrop 2000/2000c SpektrofotometrelerThermo Fisher ScientificND2000CLAPTOP
Nikon Eclipse E800 Dik MikroskopNikonE800
Nitroselüloz/Filtre Kağıdı Sandviçler 50, 0.45 & mu; m, 7 x 8,5 cmBIO-RAD1620215
Polietilen Glikol 3350, Ozmotik MüshilMiralaxC8175Doz: 226 mL su içinde 17g
RNeasy Mini Kit (250)
250 RNeasy Mini Spin Kolonları, Toplama Tüpleri (1,5 mL ve 2 mL), RNaz İçermeyen Reaktifler ve Tamponlar		QIAGEN74106
SuperScript III Birinci İplikli Sentez SistemiThermoFisher Scientific18080051
CTGF ProbuThermoFisher ScientificRn00573960_g1
TaqMan Gen Ekspresyon Testleri Rn99999011_m1 IL6 ProbuThermoFisher Scientific4331182
TaqMan Fast Advanced Master MixThermoFisher Scientific4444557
Tissue-Tek Prisma H& E Leke Seti #1Sakura6190
Tissue-Tek Prizma Plus Otomatik Slayt BoyayıcıSakura6171
TNBS (Pikrilsülfonik asit çözeltisi)SIGMA-ALDRICH92822
Gerçek Zamanlı PCR Sistemleri için TaqMan Gen Ekspresyon Testleri 4331182

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kappelman, M. D., et al. The prevalence and geographic distribution of Crohn's disease and ulcerative colitis in the United States. Clinical Gastroenterology and Hepatology. 5 (12), 1424-1429 (2007).
  2. Hwang, J. M., Varma, M. G. Surgery for inflammatory bowel disease. World Journal of Gastroenterology. 14 (17), 2678-2690 (2008).
  3. Latella, G., Rieder, F. Intestinal fibrosis: Ready to be reversed. Current Opinion in Gastroenterology. 33 (4), 239-245 (2017).
  4. Rieder, F., Fiocchi, C., Rogler, G. Mechanisms, management, and treatment of fibrosis in patients with inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 152 (2), 340-350 (2017).
  5. Bettenworth, D., et al. Assessment of Crohn's disease-associated small bowel strictures and fibrosis on cross-sectional imaging: A systematic review. Gut. 68 (6), 1115-1126 (2019).
  6. Chen, W., Lu, C., Hirota, C., Iacucci, M., Ghosh, S., Gui, X. Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme. Journal of Crohn's and Colitis. 11 (1), 92-104 (2017).
  7. Olaison, G., Smedh, K., Sjödahl, R. Natural course of Crohn's disease after ileocolic resection: Endoscopically visualised ileal ulcers preceding symptoms. Gut. 33 (3), 331-335 (1992).
  8. Lin, Y. M., Li, F., Shi, X. Z. Mechanical stress is a pro-inflammatory stimulus in the gut: In vitro, in vivo and ex vivo evidence. PLoS One. 9, 106242(2014).
  9. Gabella, G., Yamey, A. Synthesis of collagen by smooth muscle in the hyertrophic intestine. Experimental Physiology. 62 (3), 257-264 (1977).
  10. Katsanos, K. H., Tsianos, V. E., Maliouki, M., Adamidi, M., Vagias, I., Tsianos, E. V. Obstruction and pseudo-obstruction in inflammatory bowel disease. Annals of Gastroenterology. 23 (4), 243-256 (2010).
  11. Johnson, L. A., et al. Matrix stiffness corresponding to strictured bowel induces a fibrogenic response in human colonic fibroblasts. Inflammatory Bowel Disease. 19 (5), 891-903 (2013).
  12. Gayer, C. P., Basson, M. D. The effects of mechanical forces on intestinal physiology and pathology. Cell Signalling. 21 (8), 1237-1244 (2009).
  13. Cox, C. S., et al. Hypertonic saline modulation of intestinal tissue stress and fluid balance. Shock. 29 (5), 598-602 (2008).
  14. Shi, X. Z. Mechanical regulation of gene expression in gut smooth muscle cells. Frontiers in Physiology. 8, 1000(2017).
  15. Shi, X. Z., Lin, Y. M., Powell, D. W., Sarna, S. K. Pathophysiology of motility dysfunction in bowel obstruction: Role of stretch-induced COX-2. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 99-108 (2011).
  16. Gutierrez, J. A., Perr, H. A. Mechanical stretch modulates TGF-beta1 and alpha1(I) collagen expression in fetal human intestinal smooth muscle cells. American Journal of Physiology. 277 (5), 1074-1080 (1999).
  17. Lipson, K. E., Wong, C., Teng, Y., Spong, S. CTGF is a central mediator of tissue remodeling and fibrosis and its inhibition can reverse the process of fibrosis. Fibrogenesis Tissue Repair. 5, Supp 1 24(2012).
  18. Chaqour, B., Goppelt-Struebe, M. Mechanical regulation of the Cyr61/CCN1 and CTGF/CCN2 proteins. The FEBS Journal. 273 (16), 3639-3649 (2006).
  19. Shi, X. Z., Winston, J. H., Sarna, S. K. Differential immune and genetic responses in rat models of Crohn's colitis and ulcerative colitis. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 41-51 (2011).
  20. Antoniou, E., et al. The TNBS-induced colitis animal model: An overview. Annals of Medicine and Surgery (London). 11, 9-15 (2016).
  21. Shi, X. Z., Sarna, S. K. Gene therapy of Cav1.2 channel with VIP and VIP receptor agonists and antagonists: A novel approach to designing promotility and antimotility agents. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 295 (1), 187-196 (2008).
  22. Lin, Y. M., Sarna, S. K., Shi, X. Z. Prophylactic and therapeutic benefits of COX-2 inhibitor on motility dysfunction in bowel obstruction: Roles of PGE2 and EP receptors. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 302 (2), 267-275 (2012).
  23. Morris, G. P., Beck, P. L., Herridge, M. S., Depew, W. T., Szewczuk, M. R., Wallace, J. L. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon. Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).
  24. Mudter, J., Neurath, M. F. Il-6 signaling in inflammatory bowel disease: Pathophysiological role and clinical relevance. Inflammatory Bowel Disease. 13 (8), 1016-1023 (2007).
  25. Geesala, R., Lin, Y. M., Zhang, K., Shi, X. Z. Targeting mechano-transcription process as therapeutic intervention in gastrointestinal disorders. Frontiers in Pharmacology. 12, 809350(2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Düzeltme

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease
Posted by JoVE Editors on 5/20/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease. The Introduction and Protocol were updated.

The first sentence of the Introduction was updated from:

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn's disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,00,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis.

to:

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn's disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,000,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis.

Step 1.3 in the Protocol was updated from:

Prepare fresh TNBS solution according to body weights.
NOTE: TNBS - 65 mg/kg of body weight in 250 µL of 40% ethanol was used.

to:

Prepare fresh TNBS solution according to body weights.
NOTE: TNBS - 65 mg/kg of body weight in 250 µL of 40% ethanol/saline was used.

Etiketler

TNBS Kolit ModeliTransmural nflamasyonntestinal FibrozisL minal StenozKolonik DistansiyonDoku Yeniden ekillenmesiGen Ekspresyonu

İlgili makaleler