Trombosit lizatları, oküler yüzey hastalıklarının tedavisinde ortaya çıkan bir araçtır. Burada, trombosit donörlerinden toplanan trombosit lizatının hazırlanması, dağıtılması, depolanması ve karakterizasyonu için bir yöntem öneriyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Trombosit lizatları, oküler yüzey hastalıklarının tedavisinde ortaya çıkan bir araçtır. Burada, trombosit donörlerinden toplanan trombosit lizatının hazırlanması, dağıtılması, depolanması ve karakterizasyonu için bir yöntem öneriyoruz.
Çeşitli oküler yüzey hastalıkları kan kaynaklı göz damlaları ile tedavi edilir. Göz yüzeyi yenilenmesini destekleyen metabolit ve büyüme faktörü içeriği nedeniyle kullanımları klinik pratikte tanıtılmıştır. Kan bazlı göz damlaları, farklı kaynaklardan (yani, tam kan veya trombosit aferez bağışı) ve farklı protokollerle (örneğin, farklı seyreltmeler ve donma / çözülme döngüleri) hazırlanabilir. Bu değişkenlik, klinik protokollerin standardizasyonunu ve dolayısıyla klinik etkinliklerinin değerlendirilmesini engellemektedir. Metodolojik prosedürlerin detaylandırılması ve paylaşılması, ortak kılavuzların tanımlanmasına katkıda bulunabilir. Son yıllarda, allojenik ürünler, daha yüksek etkinlik standartlarını garanti ettikleri için otolog tedavilere alternatif olarak yayılmaktadır; Bunlar arasında, trombositten zengin plazma lizat (PRP-L) göz damlaları basit üretim prosedürleri ile hazırlanır. İtalya'nın AUSL-IRCCS di Reggio Emilia kentindeki transfüzyon tıbbı ünitesinde PRP-L, trombosit-aferez bağışından elde edilir. Bu ürün başlangıçta% 0.9 NaCl'de 0.3 x 10 9 trombosit / mL'ye (ortalama 1 x 109 trombosit / mL konsantrasyonundan başlayarak) seyreltilir. Seyreltilmiş trombositler dondurulur / çözülür ve daha sonra kalıntıları gidermek için santrifüj edilir. Son hacim 1.45 mL alikotlara bölünür ve -80 ° C'de saklanır. Hastalara dağıtılmadan önce, göz damlaları sterilite açısından test edilir. Hastalar trombosit lizatlarını 1 aya kadar -15 ° C'de saklayabilirler. Büyüme faktörü bileşimi rastgele seçilmiş alikotlardan da değerlendirilir ve ortalama değerler burada bildirilir.
Kan türevi ürünler yara bakımı1, maksillofasiyal ve ortopedik cerrahide ve kuru göz hastalığı (DED)3 gibi farklı oküler yüzey hastalıklarının2 tedavisinde yaygın olarak kullanılmaktadır. DED'de, gözyaşı filmi homeostazı, gözyaşı üretimi ve oküler yüzey bütünlüğünde rol oynayan farklı faktörlerin anormal işleyişinin bir sonucu olarak bozulur 4,5.
DED, nedenler ve şiddet 6,7,8'de heterojenlik ile karakterizedir ve yaşlanma, cinsiyet9, kontakt lensler, topikal veya sistemik ilaçlar 10 veya Sjögrensendromu 10 gibi önceden var olan durumlar gibi farklı faktörlerin bir sonucu olabilir. Hafif semptomlara sahip olmasına rağmen, DED dünya çapında milyonlarca insanı etkileyerek yaşam kalitelerini ve sağlık sistemlerini de etkilemektedir6.
Bu patoloji için birçok tedavi bildirilmiştir, ancak en etkili çözüm12 üzerinde hala bir fikir birliği yoktur. Bugüne kadar, yapay gözyaşları, gözyaşı filminin sulu bileşimini restore etmeyi amaçlayan ilk tedavi hattıdır, ancak bu ikameler, doğal gözyaşlarının ana biyolojik olarak aktif solutlarını içermez 6,11. Trombosit bazlı ürünler suni gözyaşlarına12,13 oranında geçerli bir alternatif olarak kabul edilir, ancak klinik etkinlikleri, kullanım önerileri ve preparat yöntemleri hala tartışma konusudur3.
Kan bazlı ürünler, metabolitler14, proteinler, lipitler, vitaminler, iyonlar, büyüme faktörleri (GF'ler), antioksidan bileşikler11 ve ozmolarite (300 mOsm / L) 11 açısından gözyaşları ile benzer bir bileşimi paylaşır. Bileşenlerinin sinerjik aktivitesi sayesinde, kornea epitelinin yenilenmesini teşvik eder, enflamatuar sitokinlerin salınımını inhibe eder ve kadeh hücrelerinin sayısını ve konjonktiva 2,3'teki müsinlerin ekspresyonunu arttırır.
Şimdiye kadar, oftalmik kan bazlı ürünlerdeki heterojenlik literatürde belgelenmiştir; Bu ürünler kan bağışçılarının kökenine, yani otolog veya allojenik olana ve ayrıca kan kaynağına, yani periferik kan, kordon kanı, serum veya trombositlere göre sınıflandırılabilir.
Otolog ürünler en yaygın3 olmasına rağmen, allojenik ürünler artık tercih edilen seçenek haline gelmektedir, çünkü daha yüksek etkinlik ve güvenlik standartları 15 ve maliyetlerde önemli bir azalma sağlamaktadır16,17. Önceki çalışmalar, otoimmün ve / veya sistemik hastalıkları olan hastalardan elde edilen kan bazlı ürünlerin değişmiş kalite ve işlevsellik gösterebileceğini kanıtlamıştır 6,16,17. Serum bazlı göz damlalarının en yaygın olmasına rağmen, trombosit bazlı ürünler son zamanlarda geçerli bir alternatif olarak onaylanmaktadır, çünkü önemli etkinlik seviyelerini korurken kolayca hazırlanabilirler 3,11. Şu anda mevcut trombosit bazlı ürünler, trombositten zengin plazma (PRP), trombositten zengin plazma lizatı (PRP-L) ve büyüme faktörleri bakımından zengin plazma (PRGF)3 olarak ayrılabilir.
Bunlar arasında PRP-L, uzun ömürlü dondurulmuş bir ürün olma avantajına sahiptir. PRP-L, aferez, kabarık paltolar ve hatta süresi dolan trombositlerden (PLT'ler)18,19 hazırlanabilir ve bu da israflarını değerli bir şekilde azaltır. Alikotlar, -80 ° C'de kan transfüzyon merkezlerinde veya hatta hastaların evlerinde -15 ° C'de daha kısa süreler için aylarca saklanabilir.
PRP-L, göz yüzeyi rejenerasyonunu uyardığı kanıtlanmış GF'lerde oldukça zenginleştirilmiştir12,20,21. Bununla birlikte, bu alanda bildirilen çok az sayıda klinik çalışma vardır ve hepsinde otolog kaynaklarkullanılmıştır 3,22. PRP-L, göz yüzeyi hastalıklarının tedavisinde rutin olarak kullanılmadan önce hala daha fazla doğrulama ve karakterizasyona ihtiyaç duymaktadır, çünkü hazırlanması, dağıtılması ve depolanması için standartlaştırılmış bir kılavuz yoktur3.
Burada, İtalya'nın AUSL-IRCCS di Reggio Emilia kentindeki Transfüzyon Tıbbı Ünitesinde kullanılan PRP-L'nin üretimi ve DED'li hastalara dağıtılması için ayrıntılı bir protokol paylaşılmaktadır. Bilimsel topluluğun, dünya çapındaki çalışmalarda ve klinik yaklaşımlarda homojenliği ve tutarlılığı artırabilecek standart hazırlama yöntemleri geliştirmesine yardımcı olmayı amaçlıyoruz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Büyüme faktörlerinin nicel değerlendirmesi için kullanılan PRP-L, AUSL-IRCCS di Reggio Emilia'da yürütülen ve 10 Ocak 2019 tarihinde Vasta Emilia Nord Etik Komitesi tarafından onaylanan PRP ürünlerinin rejeneratif amaçlar için karakterizasyonu üzerine daha geniş bir çalışmada toplanmıştır (protokol numarası 2019/0003319). Bağışçılar, Helsinki Deklarasyonu'na göre bilgilendirilmiş onaylarını verdiler. Klinisyenler tarafından kuru göz sendromu semptomlarını izlemek için rutin olarak kullanılan Oküler Yüzey Hastalığı İndeksi (OSDI) anketinin toplu, anonim verilerinin toplanması için etik onay gerekli değildi. Şekil 1A , izlenen protokolün bir taslağını gösterirken, Şekil 1B'deki resimler prosedürün ana adımlarını göstermektedir.
1. Trombositten zengin plazma (PRP) toplama
2. Trombositten zengin plazma lizat (PRP-L) preparatı
3. PRP-L dağıtımı
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Serum kaynaklı göz damlalarının (göz yüzeyi hastalıklarının tedavisinde en sık kullanılan kan bazlı üründür) kullanımının mantığı, neredeyse tamamen dolaşımdaki trombositlerden elde edilen GF'lerin içeriğinde yatmaktadır. PRP, periferik kan serumuna kıyasla 0.15 x 10 9-0.45 x 109 PLT / mL arasında değişen anlamlı derecede daha fazla trombosit (ve sonuç olarak trombosit kaynaklı GF'ler) içerir. İtalyan yasalarına göre, PRP ünitelerindeki trombosit sayısı en az 0,9 x 10 9-1 x 109 PLT / mL o...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Son yıllarda, trombosit bazlı ürünlerin oküler yüzey patolojileri için klinik kullanımı artmıştır, ancak bilimsel sağlamlık eksikliği nedeniyle difüzyonları engellenmektedir. Bunun temel nedeni, donör kaynaklarındaki ve hazırlama protokollerindeki geniş heterojenliktir, bunlar genellikle tam olarak açıklanmayan veya dağıtıldıkları amaç için özel olarak tasarlanmamıştır. Özellikle aferez tarafından toplanan trombosit bazlı ürünler hakkında bilgi halen eksiktir. Bu nedenle bu çalışmanın amacı, ader ile elde edilen trombosi...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Yazarlar, donör kaynaklı trombosit konsantreleri sağladığı için "Casa del Dono di Reggio Emilia" ya teşekkür etmek istiyor.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Equipments | |||
| CompoSeal Mobilea II | Fresenius Kabi, Almanya | torba kapatıcı | |
| HeraSafe başlık | Heraeus Instruments, Almanya | Sınıf II biyolojik tehlike başlığı | |
| MCS+ 9000 Mobil Trombosit Toplama Sistemi | Hematentik, İtalya | Trombosit, kırmızı hücre, plazma veya kombinasyon kan bileşenlerini bağışlamak için otomatik plazma ve çok bileşenli toplama ekipmanı | |
| Trombosit çalkalayıcı, PF396i | Helmer, ABD | Trombosit çalkalayıcı | |
| Raycell X-ışını Kan Işınlayıcı | MDS Nordion, Kanada | X-ışını Kan Işınlayıcı | |
| ROTIXA 50RS | Hettich Zentrifugen, Almanya | Yüksek hızlı enjeksiyon | |
| Sysmex XS-1000i | Sysmex Europe GMBH, Almanya | Trombosit sayımı için hemositometre | |
| Sıcak banyo, WB-M15 | Falc Instruments, İtalya | Sıcak banyo | |
| Malzemeler | |||
| ACD-A antikoagülan solüsyon A | Fenwal Inc., ABD | Trombosit aferezi için DIN 00788139 antikoagülan solüsyon (1000 ml) | |
| BD BACTEC Peds Plus/F Kültür şişeleri | BD Biosciences, ABD | BD 442020 | Sterilite testi |
| BD BACTEC Peds Plus/F Kültür | şişeleri BD Biosciences, ABD | 442020 | Sterilite testi için en az 2 şişe |
| BD Luer Lok Şırınga | BD Plastipack, ABD | 300865 | En az 4 steril şırınga (50 ml) |
| Bio-Plex İnsan Kanseri Paneli 1 | BioRad Laboratuvarları, ABD | 171AC500M | PDGF izoform değerlendirmesi |
| için standart panelBio-Plex İnsan Kanseri Paneli 2 | BioRad Laboratuvarları, ABD | 171AC600M | EGF değerlendirmesi için standart panel |
| Bio-Plex MAGPIX Multipleks Okuyucu | BioRad Laboratuvarları, ABD | Magpix | Bu cihaz, işlevselleştirilmiş manyetik boncuklar kullanılarak çoklu immünolojik testlere izin verir. |
| Bio-Plex Pro TGF-b Testi | BioRad Laboratuvarları, ABD | 10024984 | TGFb izoformlarının değerlendirilmesi için set ve standartlar |
| BioRet | ARIES srl, İtalya | A2DH0020 | Kan torbaları için en az 4 delici sivri uç |
| Kan alma tüpü | BD Vacutainer, ABD | 367835 | Trombosit sayımı yapmak için gerekli olan |
| 1 tüpGöz damlası seti. Hemobileşenlerden göz damlalarının uygulanması ve korunması için COL Tıbbi Cihaz | Biomed Device s.r.l., İtalya | COLC50 | Göz damlası kiti. Toplanan her PRP ünitesi için en az 2 kit |
| İnsan Kanseri PDGF-AB/BB Seti 1x96well | BioRad Laboratuvarları, ABD | 171BC511 | PDGF izoform değerlendirmesi için set |
| İnsan Kanseri2 EGF Seti 1x96well | BioRad Laboratuvarları, ABD | 171BC603M | EGF değerlendirmesi için set |
| NaCl% 0.9 steril çözelti | Baxter S.p.A., İtalya | B05BB01 | 1000 ml |
| OSDI Anketi | Allergan Inc., ABD | OSDI | Oküler Yüzey Hastalığı İndeksi Anketi |
| Delici başak | BioRet ARIES srl, İtalya | BS051004 | Spike |
| Trombosit Katkı Çözeltisi A+ T-PAS+ | TERUMO BCT Inc., İtalya | 40842 | trombosit konsantreleri için koruyucu solüsyon (1000 ml) |
| Yazılım Excel | Microsoft, ABD | Excel Veri | analiz yazılımı |
| Teruflex Transfer torbası 1000 ml | TERUMO BCT Inc., İtalya | seyreltme için | BB*T100BM |
| Teruflex Transfer torbası 300 ml | TERUMO BCT Inc., İtalya | BB*030CM | Toplanan her PRP ünitesi için en az 6 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.