Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

4.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/63866

⸱

9 Eylül 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Özet

Multipl skleroz (MS), inflamatuar infiltrasyon, demiyelinizasyon ve aksonal hasar ile karakterize tipik bir santral sinir sistemi (SSS) otoimmün hastalığıdır. Şu anda, MS'i tamamen tedavi etmek için herhangi bir önlem yoktur, ancak hastalığın ilerlemesini kontrol etmek ve hafifletmek için çoklu hastalık modifiye edici tedaviler (DMT) mevcuttur. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) ile MS hastalarının SSS patolojik özellikleri arasında anlamlı benzerlikler vardır. EAE, MS ilaçlarının etkinliğini belirlemek ve MS hastalığı için yeni tedavilerin geliştirilmesini araştırmak için temsili bir model olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Farelerde EAE'nin aktif indüksiyonu stabil ve tekrarlanabilir bir etkiye sahiptir ve özellikle ilaçların veya genlerin otoimmün nöroinflamasyon üzerindeki etkilerini incelemek için uygundur. C57BL/6J farelerin miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG35-55) ile bağışıklanması yöntemi ve klinik skorlama sistemi kullanılarak hastalık semptomlarının günlük değerlendirilmesi esas olarak paylaşılmaktadır. MS'in çeşitli klinik bulgularla karmaşık etiyolojisi göz önüne alındığında, mevcut klinik skorlama sistemi hastalık tedavisinin değerlendirilmesini karşılayamamaktadır. Tek bir müdahalenin eksikliklerini önlemek için, MS hastalarında anksiyete benzeri ruh hallerinin ve osteoporozun klinik belirtilerine dayanarak EAE'yi değerlendirmek için yeni göstergeler, MS tedavisinin daha kapsamlı bir değerlendirmesini sağlamak için oluşturulmuştur.

Giriş

Otoimmün hastalıklar, bağışıklık sisteminin kendi antijenlerine karşı bağışıklık tepkisinin neden olduğu, doku hasarı veya işlev bozukluğu ile sonuçlanan bir bozukluk spektrumudur1. Multipl skleroz (MS), santral sinir sisteminde (SSS) polinöropatinin kronik otoimmün bir hastalığı olup, inflamatuar infiltrasyon, demiyelinizasyon ve nöronal aksonal dejenerasyon ilekarakterizedir 2,3. Şu anda, MS dünya çapında 2,5 milyon kadar insanı, çoğunlukla ailelerinin ve toplumun bel kemiği olan 20-40 yaş arası genç ve orta yaşlı insanları etkilemiştir. Bu durum aileler ve toplum üzerinde önemli etki....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tongji Üniversitesi Hayvan Bakım Komitesi mevcut çalışmayı onayladı ve tüm hayvan bakım kurallarına uyuldu. Deneyler için 8-12 haftalık erkek veya dişi C57BL/6J fareler kullanıldı. Deney gruplarında yaş ve cinsiyetin aynı olması sağlanmış; aksi takdirde, hastalığa duyarlılık etkilendi. Fareler, sabit koşullar altında (oda sıcaklığı 23 ± 1 ° C, nem% 50 ±% 10) alternatif 12 saat açık ve karanlık döngülere sahip patojensiz belirli bir ortamda barındırıldı.

1. MOG35-55 emülsiyonunun hazırlanması

  1. Freund'un adjuvanını (kendisi 1 mg / mL ısı ile inaktive edilmiş MTB, H37Ra içeren) tamamlamak için ısıda inaktiv....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Farelerin bağışıklanmasından sonra, farelerin vücut ağırlığı günlük olarak kaydedilir ve klinik semptomları yukarıda açıklanan protokole göre değerlendirilir (adım 4). MOG peptidi ile aşılanmış C57BL / 6J farelerde, lezyonun yeri esas olarak omurilikle sınırlı olduğundan, EAE farelerinin patogenezi kuyruk ucundan başa doğru yayılır. Hastalığın başlangıcında, EAE fareleri kuyruğun zayıflığı ve sarkması, ardından arka bacakların zayıflığı, koordinasyonsuz hareket ve felç sergiler. Hastalık kötüleştikçe, yavaş yavaş ön ayak.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

MS, MSS'nin demiyelinizan inflamatuar bir hastalığıdır ve gençlerde kronik sakatlığa neden olan en yaygın nörolojik bozukluklardan biridir ve ailelere ve topluma büyük bir yük getirmektedir 3,4. MS her zaman organa özgü bir T hücresi aracılı otoimmün hastalık olarak sınıflandırılmıştır ve otoimmün sistemi CNS'yi yavaşça aşındırmaya teşvik eder, bu da vücutta birden fazla sistemi içerecektir27. Tipik klinik semptomlar görme bozukluğu, motor.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Teşekkürler

Yazarlar, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'nın (32070768, 31871404, 31900658, 32270754) ve Devlet Anahtar İlaç Araştırmaları Laboratuvarı'nın desteğini kabul etmektedir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1 mL şırınga (26 G iğne ile)Shanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017031
2 mL mikrosantrifüj tüpüHAIKELASIKY-LXG2A
22 G iğneShanghai Kindly Medical Instruments Co., Ltd60017208
Komple Freund' s AdjuvanSigmaF58814 ° C'de saklanır; C, mL başına 1 mg ısıyla inaktive edilmiş MTB (H37Ra)
Şartlandırılmış yer tercih sistemiShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdHayvan davranışı
EtanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10009218RT'de saklanır
Hareket aktivitesi (açık alan) video analiz sistemiShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdDigBehv-002Hayvan davranışı
MOG35-55 peptitGill Biochemical Co., LtdGLS-YM-03590-20 °C'de saklanır; C
Mycobacterium tuberculosis H37RaBD2311414 °C'de saklanır; C
Açık alan reaksiyon odasıShanghai Jiliang Software Technology Co., LtdHayvan davranışı
Boğmaca toksiniCalbiochem5165604 °C'de saklanır; C
Fosfat Tamponlu SalinLaboratuvarımızda üretilmiştir
MakasŞangay Tıbbi Alet (grup) Co, LtdJ21010
Sızdırmazlık filmiHeathrow ScientificHS 234526B
Sorvall Legend Micro 21RMikrosantrifüj Termo Bilimsel75002447
Çelik bilyeQIAGEN69975
TissueLyser IIQIAGEN85300
CımbızŞangay Tıbbi Alet (grup) Co, LtdJD1060
& mu; CT 35 masaüstü mikroCT tarayıcıScanco Medical AG, Bassersdorf, İsviçre

Kaynaklar

  1. Zhernakova, A., Withoff, S., Wijmenga, C. Clinical implications of shared genetics and pathogenesis in autoimmune diseases. Nature Reviews Endocrinology. 9 (11), 646-659 (2013).
  2. Filippi, M., et al. Multiple sclerosis. Nature Reviews Disease Primers. 4

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

Multipl Skleroz ModeliMiyelin Oligodendrosit GlikoproteiniKlinik Skorlama SistemiAçık Alan TestiKemik Mineral YoğunluğuAkış Sitometrisiİmmün Hücre AnaliziAnksiyete Benzeri DavranışOsteoporoz Değerlendirmesi