Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Üç Çeşit Umbilikal Kordon Mezenkimal Kök Hücresinin İzolasyonu ve Kültürü

2.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/64065

⸱

23 Ağustos 2022

 ,  , 
1Department of Obstetrics and Gynecology, the Third Affiliated Hospital, Soochow University, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Nanjing First Hospital, Nanjing Medical University, 3Center for Reproductive Medicine and Obstetrics and Gynecology, Nanjing Drum Tower Hospital, Nanjing University Medical School

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Mevcut protokol, göbek kordonu arterleri, ven ve Wharton jölesinden mezenkimal kök hücrelerin izolasyonunu ve kültürünü tanımlar.

Özet

Umbilikal kord mezenkimal kök hücreleri (UC-MSC'ler) rejeneratif tıp için önemli bir hücre kaynağıdır. UC-MSC'ler göbek kordonundan, Wharton jölesinden, ayrıca göbek arterlerinden ve göbek damarından izole edilebilir. Umbilikal arterlerden elde edilen perivasküler kök hücreler (UCA-PSC'ler), umbilikal venden elde edilen perivasküler kök hücreler (UCV-PSC'ler) ve Wharton jölesinden elde edilen mezenkimal kök hücreler (WJ-MSC'ler) olarak bilinirler. UCA-PSC'ler ve UCV-PSC'ler, MSC'lerin progenitörleri olan perivasküler bölgelerden türetilen perisitlerdir. Üç tür hücrenin izolasyonu ve kültürü, kök hücre nakli ve onarımı için önemli bir kaynaktır. Mevcut protokol, mekanik ayırma, yapışık kültür ve hücre taraması yoluyla hücrelerin izolasyonu ve kültürüne odaklanmaktadır. Bu teknik sayesinde, üç farklı kök hücre türü türetilebilir. Hücre yüzey belirteçleri akım sitometrisi ile tespit edildi. Kök hücreler, MSC'lerin fenotipi ile tutarlı olan adipojenik, osteojenik ve nöral benzeri farklılaşma ile çok soylu farklılaşma potansiyeli açısından tespit edildi. Bu deneysel protokol, UC-MSC'lerin kaynağını genişletir. Ek olarak, hücre izolasyon yöntemi, rejeneratif tıp ve diğer uygulamaların daha fazla incelenmesi için bir temel sağlar.

Giriş

İnsan göbek kordonu mezenkimal kök hücreleri (UC-MSC'ler), noninvaziv çalışmaları, düşük immünojenisiteleri ve etik tartışma olmaması nedeniyle rejeneratif tıpta yaygın olarak kullanılmaktadır1. Birçok çalışmada, Wharton jölesinden (WJ) izole edilen UC-MSC'ler duvara yapışabilir, çoklu farklılaşmaya uğrayabilir ve mezenkimal kök hücrelerin (MSC'ler) belirteçlerini eksprese edebilir2. Bununla birlikte, hemen hemen tüm MSC'ler perivasküler bölgeden kökenalır 3. Perivasküler hücrelerin bir alt kümesi olan perisitler, MSC'lerin4'ünün progenitör hücreleridir. Bu nedenle, UKAP-MSC'ler sırasıyla UCA-PSC'ler, UCV-PSC'ler ve WJ-MSC'ler olarak bilinen göbek kordonu WJ, umbilikal arterler (UCA'lar) ve umbilikal venden (UCV) izole edilebilir5. Bu yöntem, üç farklı kök hücre türünü izole etmeyi ve kültürlemeyi amaçladı. UCA-PSC'LERIN, UCV-PSC'lerin ve WJ-MSC'lerin izolasyonu ve kültürü, daha fazla MSC kaynağı sağlamak için çok önemlidir.

Bu çalışma, hücresel adezyona sahip, MSC'lerin belirteçlerini eksprese eden ve çok yönlü farklılaşmaya sahip olan UCA-PSC'LER, UCV-PSC'ler ve WJ-MSC'lerin izolasyonunu, kültürünü ve gelecekteki uygulamasını açıklamaktadır. İzole edilen kök hücreler mikroskopi altında gözlendi ve hücre kültürü, hücre geçişi, hücre kriyoprezervasyonu ve hücre geri kazanımına tabi tutuldu. Bu tekniğin kullanılmasının ardındaki mantık, dokudan sürünen hücrelerdi. Karmaşıkve pahalı olan akış sitometrisi veya immünomanyetik boncuk teknikleri gibi önceki yöntemle karşılaştırıldığında6, US-MSC'ler, yapışık ayırma ve hücre tarama yöntemi ile büyük ölçüde izole edilebilir; Bunlar bir önceki çalışmadakullanılmıştır 5. Türetilmiş kök hücreler üzerinde akış sitometrisi analizi yapıldı ve bu hücrelerin MSC belirteçlerini eksprese edip etmediğini tespit etti. Üç tür hücrenin adipositlere, osteoblastlara ve nöroblastlara farklılaşma potansiyeline sahip olup olmadığını tespit etmek için kök hücrelerin çok yönlü farklılaşması tanıtıldı. Göbek kordonundan üç tip kök hücrenin izolasyonu ve kültürü klinik kullanımda önemliydi ve gelecekteki çeşitli uygulamalar için araştırmacılar için yardımcı oldu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneysel prosedürler Soochow Üniversitesi Üçüncü Bağlı Hastanesi Klinik Araştırma Etik Kurulu tarafından onaylandı. İnsan deneklerden bilgilendirilmiş yazılı onam alındı. Tam süreli vajinal doğum veya sezaryen doğum yapmış bireyler göbek kordonunu elde etmek için bu çalışmaya dahil edildi. Göbek kordonu, cinsiyet önyargısı olmayan sağlıklı yenidoğanlardan gelir. Yenidoğanın Apgar skoru 8-10 idi. Apgar skoru, doğumlarından hemen sonra verilen yenidoğanlar için hızlı bir testtir. Bu test, herhangi bir ek tıbbi veya acil bakım gerekip gerekmediğini görmek için bebeğin kas tonusunu, kalp atış hızını ve diğer belirtileri kontrol eder7. Öte yandan, kalp, karaciğer, böbrek veya diğer bulaşıcı hastalıklar gibi önemli hastalıkları olan hastalar bu çalışmanın dışında bırakıldı.

1. İnsan göbek kordonunun toplanması

  1. Yenidoğanın göbek kordonunu fosfat tamponlu tuzlu suya (PBS) yerleştirin ve 4 °C'de taşıyın.
    NOT: Bu çalışmada üç donörden alınan üç göbek kordonu kullanıldı.
  2. Göbek kordonu kanını steril koşullar altında hemen çıkarın ve göbek kordonunun 20 cm'sinde kan damarlarının uzun ekseni boyunca kesin. Göbek atardamarlarının ve toplardamarının uygun 20 cm'sini ayırın ve Wharton jölesini yüzeyden dikkatlice çıkarın.
    NOT: Üç tip kök hücre arasında çapraz kontaminasyonu önlemek için her bölgeden eksplant kültürleri elde edilmiş, küçük parçalar halinde (1-2 mm3) kıyılmıştır.
  3. Göbek arterlerini, damarı ve Wharton jölesini 1-2mm3 boyutunda kesin ve 100 mm'lik hücre kültürü kaplarına aşılayın. Daha önce yayınlanmış bir raporu takiben cımbız kullanarak göbek arterleri, damar ve Wharton jölesinin aşılamasını gerçekleştirin5. 100 mm'lik kültür plakalarını önceden kaplamayın.
    NOT: Göbek atardamarları, toplardamar veya Wharton jölesi arasındaki aralık yaklaşık 1 cm idi. Hücreleri ayırmadan önce çok uzun bir toplama süresi, hücre canlılığını ve miktarını etkileyebilir. Atardamarların ve toplardamarın göbek kordonundan hemen ayrılması önerilir. Toplama süresi 4 saate kadar çıktı.

2. UCA-PSC'lerin, UCV-PSC'lerin ve WJ-MSC'lerin izole edilmesi ve kültürlenmesi

  1. Kültür ortamı eklenmeden önce göbek arterlerinin, damarın ve Wharton'un jöle dokusunun hücre kültürü kaplarına sıkıca yapışmasını sağlamak için hücre kültürü kaplarını 37 ° C'de% 5 CO2 inkübatöre 3 saat boyunca baş aşağı yerleştirin.
    1. 3 saat sonra, hücre kültürü kaplarını normal yerleşimine geri getirin. Hücre kültürü kabına 5 mL hücre kültürü ortamı (LG-DMEM, %10 FBS, 100 IU/mL penisilin ve 100 μg/mL streptomisin, Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin.
  2. İlk haftanın 3. ve 7. günlerinde sırasıyla 3 mL ve 2 mL kültür ortamını hücre kültürü kabına ekleyin. Göbek kordonu arterlerinin, damarların ve Wharton jölesinin doku bloklarına dokunmamaya dikkat edin.
  3. Sıvı ortamın yarısını ikinci haftada iki kez ve tüm sıvı ortamı üçüncü haftada iki kez değiştirin.
  4. Kültürden yaklaşık 7 gün sonra doku bloklarından sürünen hücreleri gözlemleyin ve ardından hücreler ~ 2 haftada% 80 kaynaştığında doku bloklarını atın.
    1. Hücreler% 100 kaynaştığında, oda sıcaklığında 4 dakika boyunca 600 x g'da santrifüjlemeden sonra 2 mL% 0.05 tripsin ile 1: 3 oranında geçirin.
      NOT: Göbek kordonundan izole edilen birincil hücreler yaklaşık 2 x 106 UCA-PSC, 1 x 106 UCV-PSC ve 2 x 106 WJ-MSC idi. 2 x 106 UCA-PSC, 1 x 106 UCV-PSC ve 2 x 106 WJ-MSC, 20 cm göbek kordonundan izole edildi. Hücreler, üç göbek kordonunun hepsinde sürünerek dışarı çıktı, bu da izolasyonlar arasındaki sonuçların tekrarlanabilir olduğunu gösterdi.
    2. Kültür kabında 5 x 105/100cm2'lik bir konsantrasyonu koruyarak hücreleri tohumlayın. 5 x 105 hücreyi 1 mL kriyoprezervasyon solüsyonunda koruyun (% 90 FBS,% 10 DMSO). Bu çalışmada üçüncü ila beşinci geçiş hücreleri kullanıldı.

3. Akış sitometrisi ile MSC yüzey belirteçlerinin tespiti

  1. Tek hücreli bir süspansiyon elde etmek için üçüncü nesil hücreleri% 0.05 tripsin ile sindirin. Hücreleri oda sıcaklığında 4 dakika boyunca 600 x g'da santrifüjleyin ve hücre süpernatantını bir Pasteur pipeti kullanarak atın. Daha sonra 100 μL PBS'de (% 1 FBS) 1 x10 5 hücreyi yeniden süspanse edin. Daha önce yayınlanmış bir raporu takiben bir hemositometre kullanarak hücreleri sayarak hücre sayısını değerlendirir8.
  2. 1 x 105 hücreyi CD13 (FITC, 0.1 mg / mL), CD34 (FITC, 0.1 mg / mL), CD45 (FITC, 0.1 mg / mL), CD73 (FITC, 0.1 mg / mL) ve HLA-DR'YE (FITC, 0.1 mg / mL) karşı çeşitli fikoeritrin antikorları ile karanlıkta 30 dakika inkübe edin. Kontroller için, 1 x 105 hücreyi FITC-IgG (FITC Fare Anti-İnsan IgG, 0.1 mg / mL) ile inkübe edin (bkz.
  3. Hücreleri oda sıcaklığında 4 dakika boyunca 600 x g'da santrifüjleyin ve ardından hücre süpernatantını bir Pasteur pipeti kullanarak atın. 500 μL PBS'de (%1 FBS) 1 x 105 hücreyi yeniden süspanse edin, akış sitometrisi ile tespit edin ve FlowJo2 ile analiz edin (bkz.

4. UCA-PSC'lerin, UCV-PSC'lerin ve WJ-MSC'lerin adipositlere farklılaşması

  1. Üçüncü nesil hücreleri, 500 μL hücre ortamı (LG-DMEM,% 10 FBS, 100 IU / mL penisilin ve 100 μg / mL streptomisin, bkz. Malzeme Tablosu) ile 6 x 104 hücre / cm2 yoğunluğunda 24 oyuklu plakalara aşılayın 37 ° C'de% 5 CO2 inkübatörinde.
  2. 24 saat sonra hücre ortamını değiştirin ve kontrol grubunu hücre ortamına değiştirin (LG-DMEM,% 10 FBS, 100 IU / mL penisilin ve 100 μg / mL streptomisin). Deneyleri, hücreler 24 oyuklu plakalarda% 80 kaynaştıktan sonra gerçekleştirin.
    NOT: Adipogenezi indükleyen gruplardaki hücreler, adipojenik bir indüksiyon ortamına değiştirildi (adipojenik farklılaşma kiti, bkz. Malzeme Tablosu). Her iki gruptaki hücrelerin ortamı her 3 günde bir değiştirildi.
  3. Adipojenik indüksiyon grubunda indüksiyondan yaklaşık 21 gün sonra hücrelerdeki lipit damlacıklarını gözlemleyin ve ardından adipojenik indüksiyonu sonlandırın.
    NOT: Adipojenik ortam, adipojenik indüksiyonu 2,5 sonlandırmak için hücre kültürü ortamı ile değiştirildi. Ek olarak, kontrol grubundaki hücreler önemli bir değişiklik göstermedi.
  4. Hücreleri PBS ile 5 dakika boyunca üç kez yıkayın ve ardından oda sıcaklığında 15 dakika boyunca% 4 paraformaldehit ile sabitleyin. Ardından, hücreleri her biri 5 dakika boyunca PBS ile üç kez yıkayın.
  5. PBS'yi atın ve hücreleri oda sıcaklığında yaklaşık 20 dakika kurutun. Daha sonra, 10 dakika boyunca kuyuya 500 μL yağ kırmızısı O çözeltisi (% 0.5) ( Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin.
  6. Yağ kırmızısı O çözeltisini çıkarın ve hücreleri PBS ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın. Hücreleri mikroskop altında gözlemleyin.

5. Kök hücrelerin osteoblastlara farklılaşması

  1. 24 oyuklu kültür plakalarına oyuk başına 500 μL% 0.1 jelatin ( Malzeme Tablosuna bakınız) yerleştirin ve 30 dakika sonra atın.
  2. 6 x 104 /cm2 üçüncü nesil hücreleri 24 oyuklu kültür plakalarına aşılayın ve 37 ° C'de% 5 CO2 inkübatörde her bir oyuğa 500 μL hücre kültürü ortamı veya osteojenik indüksiyon ortamı (Osteojenik Farklılaşma Kiti, Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin. Kontrol grubunda, hücre kültürü ortamını her 3 günde bir değiştirirken, osteojenik farklılaşma grubundaki osteojenik indüksiyon ortamını da her 3 günde bir değiştirin.
  3. 3-4 hafta sonra hücrelerde siyah kalsiyum birikimini kontrol edin. Kuyuyu PBS ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  4. Hücreleri oda sıcaklığında% 4 paraformaldehit ile 15 dakika sabitleyin ve PBS ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın. Alizarin kırmızı boyama solüsyonunu (% 1) oda sıcaklığında 20 dakika boyunca kuyuya ekleyin ve ardından atın.
  5. Oda sıcaklığında 30 dakika kuruduktan sonra hücreleri mikroskop altında gözlemleyin.

6. Kök hücrelerin nöronlara farklılaşması

  1. 6 x 104 /cm2 üçüncü nesil hücreleri, L-polilisin ile muamele edilmiş steril örtü slaytlarının değiştirildiği 24 oyuklu kültür plakalarına aşılayın. Hücreleri nöronlara ayırmak için hücre tırmanma tabakalarını ( Malzeme Tablosuna bakınız) 24 oyuklu plakalara yerleştirin. Hücreleri hücre tırmanma tabakaları üzerinde kültürleyin.
  2. Daha sonra, kuyucuğa 500 μL hücre kültürü ortamı ekleyin ve hücre kültürü ortamını 24 saat sonra 500 μL nörojenik indüksiyon ortamı9 ile değiştirin (Malzeme Tablosuna bakınız).
  3. 24 saat indüksiyondan sonra, nöronların indüklenen farklılaşmasını korumak için çözeltiye 10-7 mol / L ATRA ve 10 ng / mL bFGF ekleyin (Malzeme Tablosuna bakınız).
  4. Belirgin hücresel sinapslar oluştuğunda indüksiyonu sonlandırın. Mikroskopi tekniğini kullanarak belirgin hücresel sinapsları kontrol edin (bkz. Malzeme Tablosu).
    NOT: İmmünofloresan boyama, nöronların2'nin bir belirteci olan nörona özgü enolazın nörona özgü belirteçlerini tanımlamak için kullanıldı (NSE, bkz. Malzeme Tablosu).
  5. Hücre tırmanma tabakaları üzerinde konfokal görüntüleme gerçekleştirin.

7. İmmünofloresan boyama

  1. Hücre kültürü çözeltisini attıktan sonra, hücreleri 500 μL PBS ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  2. Daha sonra kuyuya 500 μL% 4 paraformaldehit ekleyin ve hücreleri oda sıcaklığında 45 dakika sabitleyin.
  3. Hücreleri PBS ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  4. Hücreleri oda sıcaklığında 100 μL% 0.5 Triton-X ile 5 dakika geçirgen hale getirin.
  5. Hücreleri 500 μL PBS ile% 1 BSA ile her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  6. Hücreleri, spesifik olmayan bağlanma bölgesini bloke etmek için 37 ° C'de 45 dakika boyunca oyuk başına% 3 BSA ve% 0.1 Triton X-100 ile 500 μL PBS ile inkübe edin.
  7. NSE'ye karşı birincil antikoru (1:100, Malzeme Tablosuna bakınız) %1 BSA ve %0.1 Triton X-100 içeren PBS (1:100) ile seyreltin ve hücreleri birincil antikorla gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.
  8. Birincil antikoru attıktan sonra, hücreleri her biri 5 dakika boyunca üç kez% 1 BSA içeren 500 μL PBS ile yıkayın.
  9. Floresan ikincil antikoru (keçi Anti-Fare IgG H & L, Alexa Fluor 488, bkz . Malzemelerin Tabel'i) 1:200'de %1 BSA ve %0.1 Triton X-100 içeren PBS (1:200) ile seyreltin ve hücreleri ikincil antikor ile karanlıkta 37 °C'de 60 dakika inkübe edin.
  10. Hücreleri 500 μL PBST (% 0.1 Tween-20 içeren PBS) ile karanlıkta her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  11. Daha sonra, çekirdeği oda sıcaklığında 5 dakika ışıksız boyamak için kuyuya 200 μL DAPI boyaması (PBST seyreltilmiş, 0.1 μg/mL) ekleyin.
  12. Hücreleri 500 μL PBST ile karanlıkta her biri 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  13. Floresan önleyici su verme maddesini slayta ekleyin ve ardından slaytı bir kapak camı ile nazikçe kapatın. Sabitlemek için kapak camının etrafına oje damlaları ekleyin.
  14. Camı lazer konfokal mikroskopla gözlemleyin. Aşağıdaki mikroskopi ayarlarını kullanın: 488 nm lazerli yeşil kanal ve 405 nm'lik DAPI kanalı.

8. Proliferasyon testi

  1. 96 oyuklu plakalara oyuk başına 2 x10 3 hücre tohumlayın. Her oyuğa 100 μL hücre kültürü ortamı ekleyin.
  2. Her oyuğa 10 μL Hücre sayma kiti-8 (CCK-8, Malzeme Tablosuna bakınız) ekleyin.
  3. 2 günlük inkübasyondan sonra, 1-7. günlerde bir mikroplaka okuyucuda 450 nm'de OD değerini ölçün.
  4. İstatistiksel yazılım kullanarak farklı kök hücre türlerinin OD değerlerini analiz edin ( Materyal Tablosuna bakınız) ve bunları SD ± araçlar olarak sunun. Tek yönlü varyans analizi (ANOVA) gerçekleştirin. P değerini < 0.05'i istatistiksel olarak anlamlı olarak kabul edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Göbek kordonundan UCA-PSC'lerin, UCV-PSC'lerin ve WJ-MSC'lerin izolasyonu ve kültürü
Umbilikal arterler, umbilikal ven ve Wharton jölesi mekanik olarak göbek kordonundan ayrıldı ve 2-3 cm3 parçaya bölündü. Arterler, ven veya Wharton jöle doku blokları arasındaki mesafe yaklaşık 1 cm idi ve quincunx şeklinde düzenlenmişti (Şekil 1A-C). Üç çeşit kök hücre, dokuya bağlı bir kültür yöntemi ile izole edildi5....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Bu çalışma, göbek kordonu arterlerinden, damardan ve Wharton jölesinden üç farklı hücre türünü izole etti. Göbek kordonu teslimat atığıydı ve kullanımı basit, güvenli ve etik tartışmasızdı5. UC-MSC'ler orijinaldir ve güçlü farklılaşma kabiliyetine sahiptir1. Önceki çalışmalar, kollajenaz, tripsin ve hyaluronidaz sindirim yöntemi ile göbek kordonlarından izole edilen UC-MSC miktarının bol olmadığını göstermiştir; Klinik ihtiyaçları karşılaya...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Yazarlar, Changzhou Bilim ve Teknoloji Bürosu'nun CJ20200110 numaralı hibe numarası altında Temel Araştırma Projesi'nden (YJY'ye), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (82001629, XQS), Jiangsu Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı Gençlik Programı'ndan (BK20200116, XQS) ve Jiangsu Eyaleti Doktora Sonrası Araştırma Fonu'ndan (2021K277B, XQS) destek almak istemektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Adipojenik farklılaşma kitiGibcoA1007001Çok yönlü farklılaşma
Alizarin kırmızı boyama çözeltisiSigmaA5533Çok yönlü farklılaşma
CD13'e karşı antikorThermo Fisher ScientificMA1-12034akış analizi
CD34'e karşı antikorBD Biosciences560942akış analizi
CD45'e karşı antikorBD Biosciences561865akış analizi
CD73'e karşı antikorBD Biosciences940294akış analizi
HLA-DR'ye karşı antikor BDBiosciences555560akış analizi
Anti-floresan söndürme maddesiAbcamAB103748İmmünofloresan
Anti-Fare IgG H & L (Alexa Fluor 488)abcamab150113Çok yönlü farklılaşma
ATRASTEMCELL Technologies302-79-4hücre kültürü
bFGFGibco13256029Çok yönlü farklılaşma
BSASigmaV900933İmmünofloresan
Hücre inkübatörüThermo Fisher ScientificHERAcell 240ihücre kültürü
Hücre sayma kiti-8,DojindoCK04hücre çoğalması
SantrifüjThermo Fisher, ScientificSorvall & trade; MTX-150hücre kültürü
DAPISigma10236276001İmmünofloresan
DMSOSigmaD1435hücre kültürü
FBSGibco10099141hücre kültürü
FITC Fare Anti-İnsan IgGBD Biosciences560952akış analizi
Akış SitometresiThermo Fisher ScientificA24864akış analizi
Floresan mikroskobuThermo Fisher ScientificIM-5akış analizi
JelatinSigma48722Çok yönlü farklılaşma
Leica MikroskopLeicaDM500Çok yönlü farklılaşma
LG-DMEM ortamıGibco11-885-084hücre kültürü
Mikroplaka okuyucuThermo Fisher ScientificA51119500Chücre çoğalması
Nörojenik indüksiyonGibcoA1647801Çok yönlü farklılaşma
Yağ kırmızısı O çözeltisiSigmaO1516Çok yönlü farklılaşma
Osteojenik indüksiyonSiyagenHUXXC-90021Çok yönlü farklılaşma
ParaformaldehitSangon Biotech30525-89-4İmmünofloresan
Pasteur pipetiBiosharpBS-XG-03Lhücre kültürü
PBS (fosfat tamponlu salin)kültürüSH30256.LS hiklon
Penisilin streptomisinHücrekültürüSV30010
NSE'ye karşı birincil antikorSanta Cruz Biyoteknolojisc-292097Çok yönlü farklılaşma
SPSS 22.0IBMSPSS 22.0İstatistiksel analiz
Hücre tırmanma levhalarıCITOTEST Scientific80346-0910Çok yönlü farklılaşma
TritonX-100Sangon Biotech9002-93-1İmmünofloresan
TripsinGibco25300120hücre kültürü
, , , Hücre klon

Kaynaklar

  1. Zhang, Y., et al. Comparison of the biological characteristics of umbilical cord mesenchymal stem cells derived from the human heterosexual twins. Differentiation. 114, 1-12 (2020).
  2. Yang, Y., et al. Transplantation of umbilical cord-derived mesenchymal stem cells on a collagen scaffold improves ovarian function in a premature ovarian failure model of mice. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Animal. 55 (4), 302-311 (2019).
  3. Sepulveda, R. V., et al. Canine umbilical cord perivascular tissue: A source of stem cells for therapy and research. Research in Veterinary Science. 129, 193-202 (2020).
  4. Ahmed, T. A., Shousha, W. G., Abdo, S. M., Mohamed, I. K., El-Badri, N. Human adipose-derived pericytes: biological characterization and reprogramming into induced pluripotent stem cells. Cellular Physiology and Biochemistry. 54 (2), 271-286 (2020).
  5. Xu, L., et al. Different angiogenic potentials of mesenchymal stem cells derived from umbilical artery, umbilical vein, and Wharton's jelly. Stem Cells International. 2017, 3175748(2017).
  6. Garikipati, V. N. S., et al. Isolation and characterization of mesenchymal stem cells from human fetus heart. PLoS ONE. 13 (2), -192244(2018).
  7. Simon, L. V., Hashmi, M. F., Bragg, B. N. APGAR Score. StatPearls. , Treasure Island, FL. (2022).
  8. Adler, E. M., Gough, N. R., Blundon, J. A. Differentiation of PC12 cells. Science's STKE. 2006 (351), (2006).
  9. Liang, X., et al. Bisphenol A and several derivatives exert neural toxicity in human neuron-like cells by decreasing neurite length. Food and Chemical Toxicology. 135, 111015(2020).
  10. Salehinejad, P., et al. Comparison of different methods for the isolation of mesenchymal stem cells from human umbilical cord Wharton's jelly. In Vitro Cellular & Developmental Biology Animal. 48 (2), 75-83 (2012).
  11. Ding, D. C., Chang, Y. H., Shyu, W. C., Lin, S. Z. Human umbilical cord mesenchymal stem cells: a new era for stem cell therapy. Cell Transplant. 24 (3), 339-347 (2015).
  12. Han, Y. F., et al. Optimization of human umbilical cord mesenchymal stem cell isolation and culture methods. Cytotechnology. 65 (5), 819-827 (2013).
  13. Esteves, C. L., et al. Equine mesenchymal stromal cells retain a pericyte-like phenotype. Stem Cells and Development. 26 (13), 964-972 (2017).
  14. Nagamura-Inoue, T., He, H. Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells: Their advantages and potential clinical utility. World Journal of Stem Cells. 6 (2), 195-202 (2014).
  15. Mennan, C., et al. Isolation and characterisation of mesenchymal stem cells from different regions of the human umbilical cord. BioMed Research International. 2013, 916136(2013).
  16. Carvalho, M. M., Teixeira, F. G., Reis, R. L., Sousa, N., Salgado, A. J. Mesenchymal stem cells in the umbilical cord: phenotypic characterization, secretome and applications in central nervous system regenerative medicine. Current Stem Cell Research & Therapy. 6 (3), 221-228 (2011).
  17. Harichandan, A., Sivasubramaniyan, K., Buhring, H. J. Prospective isolation and characterization of human bone marrow-derived MSCs. Advances in Biochemical Engineering/Biotechnology. 129, 1-17 (2013).
  18. Zhang, H., et al. Acceleration of fracture healing by overexpression of basic fibroblast growth factor in the mesenchymal stromal cells. STEM CELLS Translational Medicine. 6 (10), 1880-1893 (2017).
  19. Caplan, A. I. New MSC: MSCs as pericytes are Sentinels and gatekeepers. Journal of Orthopaedic Research. 35 (6), 1151-1159 (2017).
  20. Caplan, A. I. MSCs: the sentinel and safe-guards of injury. Journal of Cellular Physiology. 231 (7), 1413-1416 (2016).
  21. Tigges, U., Komatsu, M., Stallcup, W. B. Adventitial pericyte progenitor/mesenchymal stem cells participate in the restenotic response to arterial injury. Journal of Vascular Research. 50 (2), 134-144 (2013).
  22. Herrmann, M., et al. Pericyte plasticity-comparative investigation of the angiogenic and multilineage potential of pericytes from different human tissues. European Cells and Materials. 31, 236-249 (2016).
  23. Ahmed, T. A., El-Badri, N. Pericytes: The role of multipotent stem cells in vascular maintenance and regenerative medicine. Advances in Experimental Medicine and Biology. 1079, 69-86 (2018).
  24. Greenberg, J. I., et al. A role for VEGF as a negative regulator of pericyte function and vessel maturation. Nature. 456 (7223), 809-813 (2008).
  25. Lin, S. L., et al. Targeting endothelium-pericyte cross talk by inhibiting VEGF receptor signaling attenuates kidney microvascular rarefaction and fibrosis. American Journal of Pathology. 178 (2), 911-923 (2011).
  26. Failla, C. M., Carbo, M., Morea, V. Positive and negative regulation of angiogenesis by soluble vascular endothelial growth factor receptor-1. International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), 1306(2018).
  27. Kim, J. M., et al. Perivascular progenitor cells derived from human embryonic stem cells exhibit functional characteristics of pericytes and improve the retinal vasculature in a rodent model of diabetic retinopathy. STEM CELLS Translational Medicine. 5 (9), 1268-1276 (2016).
  28. Mills, S. J., Cowin, A. J., Kaur, P. Pericytes, mesenchymal stem cells and the wound healing process. Cells. 2 (3), 621-634 (2013).
  29. Dar, A., et al. Multipotent vasculogenic pericytes from human pluripotent stem cells promote recovery of murine ischemic limb. Circulation. 125 (1), 87-99 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Göbek Kordonu Kök HücreleriWharton JelisiPerivasküler Kök HücrelerHücre İzolasyonuAdherent KültürMekanik AyırmaAkış SitometrisiÇok Hatlı DiferansiyasyonRejeneratif Tıp

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.