NOT: Örneklemeden önce, genel proje gereksinimlerine, istatistiksel tasarıma veya beklenen örnek değişkenlik miktarına göre çoğaltmaların derecesini belirleyin. Hassas istatistiksel analiz için ve potansiyel numune kaybını veya kırılmasını hesaba katmak için beş adet açık ve koyu renkli inkübasyon şişesi çifti önerilmektedir. Tarif edilen yüzen deneysel mavna, beş kopya artı bir çift boş kontrol taşımak üzere tasarlanmıştır; deneysel mavnanın teknik çizimi için Şekil 1'e bakınız.

Resim 1: Deneysel mavna ve yan şamandıranın teknik çizimleri. (A) Üstten görünüm: Mavnanın çerçevesi, dört Alüminyum düz çubukla (gri) birleştirilen dört Alüminyum açılı L profil parçasından (mavi) oluşur. XPS şamandıraları (pembe), her biri paralel alüminyum parçalar üzerinde olmak üzere çerçeveye iki noktada monte edilir. Kuluçka şişeleri için zincirler, aralarında 550 mm mesafe bulunan önceden delinmiş deliklerde (kırmızı oklar) çıtçıtlı kancalar kullanılarak her iki taraftaki çerçeveye tutturulur. Zincirlere, kuluçka şişesi bağlantısı için 1 m ve 2 m mesafelerde çıtçıtlı kancalar sağlandı (deneysel derinliğe göre çıtçıtlı kancaların konumunu seçin). Beton ankraj, mavnanın pruvasına sabitlenir, burada 25 mm'lik bir çıkıntı, çapanın zinciri ve araştırma kabı için bir bağlantı noktası olarak hizmet etmek üzere önceden delinmiş iki deliğin (sarı ok uçları) kullanılmasına izin verir. Çerçeve, dört alüminyum açılı parça (yeşil ok uçları) arasındaki paralel bağlantılar aracılığıyla kolayca monte edilir veya sökülür. (B) Yan görünüm, asılı kuluçka şişeleri ve beton ankrajlı (kahverengi kare) asılı zincirleri gösterir. (C) Yan XPS şamandırası: Paralel alüminyum açılı L parçaları (mavi) dikey alüminyum düz çubuklarla (gri) birleştirilir. Enine çubuk bölümünün altında, XPS şamandıra (pembe), gerekli delik boyutları belirtilmiş (4 mm) olacak şekilde monte edilir. Asılı zincirler, 8 mm'lik deliklerde (kırmızı ok ucu) çıtçıtlı kancalarla tutturulmuştur. Mavnanın yayında, biri çapayı mavnaya (sarı ok ucu) sabitlemek için ve diğeri araştırma gemisini mavnaya (mavi) demirlemek için çıkıntılı alüminyuma iki adet 8 mm'lik delik açılır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
1. Deneysel mavnanın yapımı
NOT: Yüzer mavna, birbirine monte edilmiş iki eşit bölümden oluşur ve kolay montaj/sökme sağlar. Kullanılan tüm parçalar herhangi bir hobi pazarından veya yapı malzemeleri satan mağazadan satın alınabilir.
- İlk olarak, dört alüminyum düz çubuk (40 mm x 3 mm x 350 mm), 16 vida (altıgen somunlarla 4 mm x 15 mm) ve 32 pul (4 mm x 10 mm) kullanarak dört alüminyum açılı L profil parçasını (40 mm x 40 mm x 3 mm; uzunluk 2.000 mm) bir araya getirerek mavnanın çerçevesini monte edin .
NOT: Düz çubukların mesafesi ve konumu Şekil 1A'daki teknik resimde gösterilmiştir. Şamandıraların yan yassı çubuklara ayrıntılı bağlantısı Şekil 1B'de gösterilmiştir.
- Çerçevenin iki eşit bölümünü birleştirmek için, alüminyum açılı L profillerini uçlarda birbirine vidalamak için kanat somunlu dört adet 4 mm x 15 mm vida ve sekiz adet 4 mm x 10 mm rondela kullanın (Şekil 1A, yeşil oklar).
- Beş adet ekstrüde polistiren (XPS) malzemesi (500 mm x 200 mm x 150 mm), altıgen somunlu on adet 10 mm x 170 mm vida ve beş adet ekstrüde polistiren şamandıra ( her biri 500 mm x 200 mm x 150 mm) hazırlamak için yirmi adet 10 mm x 50 mm rondela kullanın. Şamandıraları teknik çizimde gösterilen beş noktadan çerçeveye takın (Şekil 1A).
- Çerçeveye delikler açın ( Şekil 1A'daki zincirler için deliklerin konumlarını ve mesafelerini gösteren kırmızı oklara bakın). Kuluçka şişeleri için 12 m çelik zincirleri (3 mm'lik tel çapı, 5,5 mm x 26 mm'lik iç bağlantı) çelik karabin kancalar (50 mm x 5 mm) kullanarak çerçevedeki deliklere takın. Kuluçka şişelerini deneysel tasarıma göre istenen derinliğe monte etmek için her zincire çıtçıtlı kanca çiftleri (50 mm x 5 mm) sağlayın. Bu durumda, 1 m ve 2 m derinliklerde oturdular.
- Ankraj için, 15 L'lik kovayı betonla doldurun. Betona bir göz cıvatası yerleştirin ve bozulmadan kurumasını bekleyin. 5 m'lik çelik zinciri kancaya sabitleyin. Ankrajı mavnanın yayı üzerindeki önceden delinmiş deliğe sabitleyin (Şekil 1A,B'de sarı oklarla işaretlenmiştir).
NOT: Montaj tanımını içeren teknik çizimler Şekil 1A-C'de gösterilmiştir. Şekil 2, monte edilmiş deneysel mavnanın fotoğrafını göstermektedir. Şekil 3, inkübasyon şişelerinin zincire tutturulmasını göstermektedir.

Resim 2: Birleştirilmiş deneysel mavna. Toplanan deneysel mavnanın fotoğrafı. Kırmızı ok uçları, zincirlerin kuluçka şişeleriyle tutturulması için delikleri gösterir. Yeşil ok uçları, şamandıranın iki yarısının bir araya getirildiği yeri işaret eder. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Resim 3: Kuluçka şişeleri. 1 m derinlikte asılı iki çift karanlık ve hafif kuluçka şişesinin fotoğrafı. Bir çift şişe, taş üzerinde hala büyüyen bozulmamış mikrobiyal paspasların örneğini içerir (kırmızı ok ucu). İkincisi, ilgili derinlikten göl suyu içeren boş şişedir. Sarı bir ok ucu, kuluçka şişesinin iç duvarına tutturulmuş oksijen sensörü noktasına işaret eder. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Sahada kurulum
- Kolayca taşınabildiği için mavna yerleştirme ve deneyler yapmak için şişirilebilir bir kano kullanılması önerilir.
- Şamandırayı sabitlemek için ideal derinliğe sahip bir yer seçin. Derinliği, alt inkübasyon şişelerinin, kuluçka şişelerinin etrafındaki su sütununa tortuyu rahatsız etmesini önlemek için tabandan en az 2 m yukarıda olacak şekilde seçin.
- Birleştirilmiş mavnayı teknenin kıçının arkasına takın. Ankrajı teknenin yan tarafı boyunca dikkatlice indirin ve su yüzeyinin biraz altında asılı kalacak şekilde hizalayın, böylece şamandıra ankrajla birlikte gerekli derinliğe sahip noktaya kolayca çekilebilir.
- Çapayı tekneden çıkarın, dibe indirin ve mavnayı çapa zincirine sabitleyin.
- Kuluçka şişelerini mavnaya bağlamak için zincirleri sabitleyin.
3. Kuluçka şişesi hazırlama
- Gaz geçirmez contalara sahip şeffaf geniş boyunlu 0,5 L şişeleri kullanın.
NOT: Şişelerin boyutunu ayarlamak mümkündür, ancak mavnanın yüzdürülmesini daha fazla polistiren levha ile arttırmayı da unutmayın. Burada tarif edilen mavna, 24 adet 0,5 L cam şişeyi güvenilir bir şekilde taşıyabilir.
- Oksijen optik sensör noktalarını her şişenin iç duvarına takın.
- Koyu renkli tedavi şişelerine siyah elektrik bandı ile sararak opak bir tabaka ekleyin.
- Optik sensör ile noktadaki küçük bir deliği kesin. Işığın şişeye girmesini önlemek için, deliği sensörün çapından biraz daha küçük yapın.
NOT: Işığın şişeye girmesini engelleyen herhangi bir opak tabaka da çalışacaktır. Siyah elektrik bandının avantajı, aşınmaya karşı dayanıklı olması ve suda soyulmamasıdır.
4. Numune toplama ve işleme
NOT: Dalgıçlar, numunelerin manuel olarak toplanmasını daha derin sularda gerçekleştirir. Sığ sularda, şnorkelle yüzerek veya bisiklete binerek yapılabilir.
- Kuluçka şişelerini portatif kutuya yerleştirin.
- Kutuyla ilgili derinliğe dalın. Çevredeki sudaki tortuyu rahatsız etmekten kaçının.
- Kuluçka şişelerini numunelerle dikkatlice doldurun. Numunenin biyokütlesini, örneğin uzun cımbız kullanarak mümkün olduğunca az rahatsız etmeye çalışın. Mikrobiyal paspaslar küçük bir taş gibi katı bir yüzeyde büyürse, tüm taşı sağlam biyokütle ile şişeye dikkatlice aktarın.
NOT: Numune alma paspasları taşların üzerinde büyürken büyük taşları toplamaktan kaçının - cam şişeler daha fazla manipülasyon sırasında kırılabilir.
- Boş kontroller olarak kullanılmak üzere bir çift açık / koyu şişeyi ilgili derinliklerden temiz suyla doldurun.
NOT: Perifiton numunesi olmayan şişeler, ortam suyu organizmalarının oksijen üretimini/tüketimini belirleyen bir kontrol görevi görür. Perifitonun hesaplanan net veya brüt birincil verimliliğinin tarafsız olmasını sağlar.
- Tüm kuluçka şişelerindeki suyun temiz olduğundan ve rahatsız edici tortu içermediğinden emin olun.
- Şişeleri kapatın ve yüzen mavnaya demirli tekneye getirin.
5. Birincil üretkenliğin ölçülmesi
NOT: Teknede oturan kişi kutuyu dalgıçtan alır ve aşağıdaki adımları uygular.
- İlk iki çift inkübasyon şişesini ilk zincirdeki çıtçıtlı kancalara takın.
- Fiber optik oksijen ölçeri kullanarak her şişedeki ilk oksijen konsantrasyonunu ölçün. Ölçüm cihazının optik kablosunu şişenin içine monte edilmiş oksijen sensörüne takın ve hemen (birkaç saniye içinde)O2 konsantrasyonunu temassız (şişe duvarından geçirin) okuyun. Ölçülen değeri kaydedin.
NOT: Kullanım süresi kısadır; şişeleri dalgıçlardan ilk ayara ve ilgili derinliğe götürmekten, sadece birkaç dakika sürer.
- Hemen sonra, bağlı şişelerle zinciri dikkatlice suya indirin. Kuluçka şişelerinin, içine yerleştirilen biyokütlenin örneklendiği derinlikte yerleştirildiğinden emin olun.
- 1 saat sonra gemiden başka bir ölçüm yapın (aşağıdaki NOTA bakın). Şişeleri olan her zinciri dikkatlice tekneye çekin, optik kabloyu sensöre takarak oksijen değerini okuyun ve numuneleri tekrar suya indirin.
NOT: Şişelerin aşırı doygunluğunu önlemek için inkübasyon sırasında bireysel ölçümler arasındaki süreyi, numunelerinO2 üretkenliğinin/tüketiminin yoğunluğuna göre ayarlayın.
- Bu prosedürü tüm şişe çiftleriyle en az dört veya beş kez tekrarlayın.
NOT: Alandaki deneyin tüm kurulumu Şekil 4'te gösterilmiştir.

Şekil 4: Alandaki deney düzeneğinin şeması. Göl yüzeyindeki demirli deneysel mavnanın illüstrasyonu. Mikrobiyal mat biyokütleli kuluçka şişeleri (0,5 L) iki farklı derinliğe (1 m ve 2 m) asılır. Dalgıçlar, mikrobiyal paspas örneklerini doğrudan inkübasyon şişelerine uygun derinliklerde topladılar. Tek tek şişelerdeki oksijen konsantrasyonu gemiden ölçülür. Şişeler sudan çıkarılır. Oksijen konsantrasyon değeri, oksijen sensörüne optik bir kablo takılarak birkaç saniye içinde ölçülür. Şişeler daha sonra dikkatlice suya indirilir. İki çift inkübasyon şişesini iki derinlikten ölçme prosedürünün tamamı ~ 2 dakika sürer. Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
6. Numune analizleri
- Ölçümlerin bitiminden sonra, numuneleri doğrudan şişelerden alın ve mikrobiyal paspasın biyokütlesini küçük plastik şişelere aktarın. Paspaslar katı yüzeylerde (örneğin taşlar) büyürse, bunları bir diş fırçası veya küçük bir bıçakla ovalayın.
- Laboratuvarda, kuru ağırlığı belirlemek için her bir replikayı önceden tartılmış cam elyaf filtrelerden filtreleyin9.
7. Veri analizleri
- Kuluçka döneminde, açık ve koyu renkli şişelerdeki oksijen konsantrasyonunu ölçün ve şişeler doldurulduğunda su sütunundaki oksijen konsantrasyonu ile karşılaştırın.
NOT: Işık şişesindeki oksijenin zaman içindeki değişimi, brüt ekosistem üretkenliğinin (GEP) ve şişedeki tüm organizmaların (ortam suyundan ve perifitik topluluktan ototroflar ve heterotroflar) solunumun birleşik sonucudur. Karanlık şişedeki oksijendeki azalma, hem ototrofların hem de heterotrofların solunum kayıplarını ölçer. Kontroldeki oksijen konsantrasyonundaki değişim (yani, perifitonsuz şişeler) sadece ortam suyundaki heterotrofik veya ototrofik organizmaların ürünüdür. Perifiton verimliliği ve solunum, boş inkübasyon şişelerinde ölçülen ortam suyu verimliliği ve solunumu çıkarılarak tahmin edildi.
- Yüzde oksijen doygunluğundakiO2 konsantrasyonuna dikkat edin (yani, oksijen sensörlerini% 0 ve% 100 oksijen doygunluğuna kalibre edin). Birincil üretkenliği tahmin etmeden önce, ham verileri (
) makul bir birime dönüştürün.
NOT: Bu çalışmada, Benson ve Krause10'a göre, veriler kuru ağırlık bazında perifiton kütlesinin gramı organik madde (OM) başınaO2 mmol'e dönüştürülmüştür.- Denklemi kullanarak dönüşümü hesaplayın (1):
(1)
C p, O2 tarafından tamamen doyurulduğunda sudakiO2 konsantrasyonudur (mg (O2) L-1), V Şişe, mL'deki şişenin hacmidir, VTaşları, mL'deki taşın kapladığı hacimdir, perifiton kütlesinin g cinsinden ağırlığıdır ve 32,O2'nin molar ağırlığıdır.
- C p'yi denklem (2) kullanarak hesaplayın:
(2)
Cs standartO2 konsantrasyonu, P göl yüzeyindeki atmosferik basınç, Pw göl yüzeyindeki su buharının kısmi basıncı ve ω su yoğunluğudur.
- Cs, ω, P ve Pw'yi, göl yüksekliği (km cinsinden h) ve göl yüzeyindeki su sıcaklığı (°C cinsinden t) bilindiğinde, daha önce tanımlanmış ampirik denklemlerden (3-6) hesaplayın:
(3)
(4)
(5)
(6)
NOT: Denklemlerden (1-6), hesaplananO2 konsantrasyonunun sığ derinlikler için en doğru olduğu açıktır. Derinlik arttıkça, hesaplanan konsantrasyon mutlak konsantrasyon açısından daha önyargılı hale gelir. Derinlik boyunca oksijen konsantrasyonunun değişim hızı her göl için bilindiğinde en uygunudur, böylece gerekirse mutlakO2 konsantrasyonu düzeltilebilir. O2 konsantrasyonu hesaplandıktan sonra, zaman içindeki değişimi, iki farklı koşulda iki farklıO2 akışını hesaplamak için kullanılabilir. Işık koşulları altında, net ekosistem verimliliği (NEP), zaman içindeO2 konsantrasyonundaki değişimle doğru orantılıdır (aşağıya bakınız). Burada "ekosistem" terimi, perifitonun ototrofik ve heterotrofik organizmalardan oluştuğunu belirtmek için kullanılır. Karanlıkta, zaman içindeO2 konsantrasyonundaki değişim, ototrofik ve heterotrofik organizmaların solunum kayıplarının toplamı ile orantılıdır, böylece ekosistem solunumunu (RE) tanımlar. NEP ve RE arasındaki fark, brüt ekosistem verimliliğini (GEP) tanımlar. Toplumun heterotrofik kısmının solunum kayıpları ihmal edilebilir düzeydeyse, GEP brüt ekosistem verimliliğine eşit hale gelir.
- Denklemde (7) gösterildiği gibi, üçüncü derece polinom regresyonu ileO2 konsantrasyonunun zaman içindeki değişim oranını belirleyin.
(7)
Burada A 0, sıfır zamanındaO2 konsantrasyonudur ve A 1-A2, polinom regresyonunun katsayılarıdır.
NOT: Polinom fonksiyonu, herhangi bir diferansiyel denklemin bir yaklaşımı olarak hizmet edebileceği için kullanılır. Bu nedenle,O2 konsantrasyonu ve zaman arasındaki doğru fonksiyonel ilişkiyi bilmek gerekli değildir. Bu nedenle, işlevsel ilişkiyle ilişkili herhangi bir varsayımın (örneğin, doğrusallık) kontrol edilmesi gerekmez. Tanım olarak, polinom regresyonunun ikinci terimi olan A 1, A0'dan ve dolayısıyla sıfır zamanındaki mutlak O2 konsantrasyonundan bağımsız olan sıfır zamanındakiO2 konsantrasyonunun değişim oranını (yani, anlık hız) tanımlar. Bu nedenle, O2 akısının tahmini, derinlik gradyanı boyunca basınç değişiminin neden olduğu mutlakO2 konsantrasyon hesaplamalarındaki önyargıdan etkilenmez. A 1, zaman başına (bu çalışmada 1 saat)O2 (mmol g (OM)-1) birimlerine sahiptir.- Işığa maruz kalan ve olmayan ve mikrobiyal mat biyokütlesi içeren şişeler (yani, V Taşları > 0) ve ışığa maruz kalan ve olmayan ve serbest su içeren kontrol şişeleri (yani, VTaşları = 0) için ayrı ayrı hesaplanan A 1'i hesaplayın.
NOT: Bu farklı regresyon katsayıları gösterimleri
atanan , , ,
ve
,
verimlilik GEP hesaplaması için denklem (8) şu şekilde yazılabilir:
(8.1)
(8.2)
(8.3)
Terim
net ekosistem verimliliğini tanımlar (Şekil 5A; yani net oksijen verimliliği) ve terim
ototrofik ve heterotrofik solunumun toplamını temsil eder (Şekil 5B; RE, yani her iki solunumun da karanlık ve aydınlık koşullar altında benzer olduğunu varsayarsak).
- GEP'yi elde etmek için NEP'den R'yi çıkarın (Şekil 5C).
NOT: Denklem (8) dolaylı olarak hem pozitif hem de negatif
olduğunu
varsayar. Pozitifse
, ham verileri aykırı değerler için dikkatlice kontrol edin . teorik olarak negatif olabilir, çünkü heterotrofik aktivitenin neden olduğu solunum kayıpları fotosentetik aktiviteden daha yüksek olabilir. 