Anjiyotensin II İndüklü Abdominal Aort Anevrizmasının Bir Fare Modelinde Santral Venöz Kateter ile İlaç Tedavisi ve 3D Ultrason ile İzleme

Abdominal aort anevrizması (AAA), aort duvarındaki enflamatuar ve doku-yıkıcı süreçlere bağlı olarak bir damarın patolojik dilatasyonudur ve sonuçta rüptür ve hasta ölümüne yol açabilir. Cerrahi AAA onarımında önemli başarılara rağmen, anevrizma genişlemesinin ilerlemesini engellemek ve potansiyel olarak rüptür riskini azaltmak için konservatif bir ilaç tedavisi bugüne kadar eksiktir. Hastalığın tetikleyicilerini ve aracılarını aydınlatmak ve tedaviye yeni yaklaşımları test etmek için hayvan modelleri geliştirilmiştir. AAA'nın fare modelleri yaygın olarak uygulanır ve insan dokusundan farklı gözlemleri kapsar. Pathomechanistic farklılıkları nedeniyle, moleküllerin / yolakların özel işlevini veya potansiyel terapötik ilaçların etkinliğini araştırmak için genellikle birden fazla model uygulanır ^1,2. AAA indüksiyonunun en sık kullanılan modelleri arasında, akut bir hakaretten aort duvarına kadar anevrizma oluşumuna dayanan modellere kıyasla daha kronik benzeri patogeneze sahip olan apolipoprotein E eksikliği (ApoE KO) farelerde anjiyotensin-II (Ang-II) uygulaması ^3,5'tir. Bu nedenle, Ang-II modeli hastalığın ilerlemesini izlemek için özellikle uygun görünmektedir ve son zamanlarda metabolik ve enflamatuar yanıtlar açısından insan AAA hastalığına yakından benzediği gösterilmiştir⁶. Özellikle, Ang-II modelinde sadece AAA gelişimi değil, aynı zamanda torasik anevrizma oluşumu ve intramural trombüs oluşumu ile aort diseksiyonu da bulunmaktadır.

Hastalığın başlamasını önlemek yerine, halihazırda yerleşmiş AAA'nın ilerlemesini hedeflemeyi amaçlayan tedaviler, tedavi gerektiren önceden var olan bir durumla başvuran hastalar olarak daha yüksek translasyonel değere sahip olabilir ^7,8. Karşılaştırılabilir bir deneysel tasarım için, hastalık gelişiminin bir eşiğini tanımlamak ve potansiyel olarak fareleri tedavi gruplarına sınıflandırmak için AAA indüksiyonundan önce ve sonra aort boyutunun izlenmesi gerekir.

İlaç uygulama şekli, ilgili maddenin alımına ve stabilitesine bağlıdır. İntraperitoneal (i.p.) enjeksiyonlar en sık uygulama kolaylığı, anestezi gerektirmemesi ve enjeksiyon hacmi kısıtlamalarının olmaması nedeniyle kullanılır⁹. Bununla birlikte, uygulama yolunu seçerken farmakokinetiği göz önünde bulundurulmalıdır, çünkü i.p. uygulanan maddeler öncelikle hepatik portal dolaşım yoluyla emilir ve dolaşıma ulaşmadan önce karaciğer metabolizmasına uğrayabilir, bu da ilk geçiş etkisine bağlı olarak değişen plazma konsantrasyonlarına neden olabilir¹⁰. İntravenöz (i.v.) enjeksiyon, maddelerin en yüksek biyoyararlanımını sağlar ve tekrarlayan i.v. erişiminin zorluğu, günlük uygulama için kateterlerin ve vasküler erişim portlarının kullanılmasıyla atlatılabilir^11,12,13. AAA ayarı ile ilgili olarak, dolaşımdaki ilaç dağılımı, tanımlanmış konsantrasyonlarda doğrudan anevrizma maruziyetini kolaylaştırır.

Burada, Ang-II fare modelinde AAA'yı bir ozmotik pompanın deri altı implantasyonu yoluyla indüklemek, harici juguler ven içine yerleştirilen bir katetere bağlı bir vasküler erişim portu aracılığıyla günlük i.v. ilaç tedavisi ve iki dorsal implantın varlığına rağmen 3D ultrason¹⁴ ile anevrizma boyutunun izlenmesi için bir iş akışını açıklıyoruz.

Hayvan deneyleri, yerel etik kurul ve Avusturya Bilim Bakanlığı (BMWFW-66.009/0355-WF/V/3b/2016) tarafından, bilimsel amaçlarla kullanılan hayvanların korunmasına ilişkin 2010/63/EU sayılı Avrupa Direktifi ve 2012 Avusturya Hayvan Deneyi Yasası'na uygun olarak onaylanmıştır. İnsancıl sonlanım noktaları şu şekilde belirlendi: % ≥15 vücut ağırlığı kaybı, yiyecek ve / veya su alımından kaçınma, aktivitenin azalması (hipokinezi) veya diskinezi veya ağrı / semptom yönetimine rağmen uzun süreli titreme, kaşınma, nefes darlığı veya kambur duruş. Gerekirse, bir hayvan derin anestezi altında, yani aşırı dozda ketamin (yaklaşık 100 mg / kg) ve ksilazin (yaklaşık 5 mg / kg) kokteyli veya servikal çıkık ile ötenazi yapılır. Cerrahi prosedürler için, aseptik teknik ve steril / temiz eldivenler kullanılır.

1. Pompa implantasyonu

1. Anestezi
   1. ApoE eksikliği olan fareleri (B6.129P2-Apoe^tm1Unc / J) normal bir diyette tutun ve tercihen insan hastalığında erkek baskınlığını temsil etmek için deneylere 12-14 haftalık erkek hayvanları dahil edin³.
   2. Ameliyattan 1 gün önce (d-1, OP öncesi), ozmotik pompaları üreticinin protokolünü izleyerek fare ağırlığına göre istenen anjiyotensin II konsantrasyonu ile hazırlayın ve doldurun ve pompaları gece¹⁵ 37 ° C'de tuzlu su içinde inkübe edin.
      Örnek: 25 g'lık bir fare için, 28 gün boyunca 1000 ng/kg/dak dağıtım hızına ve 0,25 μL/h pompa hızına sahip ozmotik pompalar (bkz. Malzeme Tablosu) kullanarak, 1,8 mg Ang-II'yi 300 μL salin içinde çözün (1500 ng/s Ang-II vermek için 6000 ng/μL konsantrasyonu). Çözeltiyi künt doldurma iğnesiyle pompaya yükleyin ve ardından pompayı kapatmak için akış moderatörünü takın.
   3. Fareyi anestezi odasına bilinçsiz olana_{kadar 2} L/dak O2 ile karıştırılmış %3-%4 izoflurana yerleştirin. Fareyi yüzüstü pozisyonda ısıtılmış bir masaya (37 ° C) hareket ettirin ve izofluran anestezisini burun konisi aracılığıyla% 1.8 -% 2'de tutun.
   4. Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz kayganlaştırıcısı uygulayın.
   5. Fareye deri altından 10 μL/g farede salin içinde% 2.5 buprenorfin enjekte edin ve anestezi derinliğini bir ayak parmağı sıkışmasıyla doğrulayın.
   6. Farenin sol üst tarafındaki küçük bir alanı omuz bıçağının üzerinde tıraş edin. Tıraş edilen bölgenin dezenfeksiyonu için% 10 (w / v) povidon-iyot çözeltisi uygulayın.
2. Pompa yerleştirme (5-7 dk, mikroskopsuz yapılır)
   1. Farenin ayak parmağı sıkışmasıyla tamamen uyuşturulduğunu kontrol edin ve orta omurga ile sol skapuler çizgi arasında bir neşter ile üst sırtın derisinde 1 cm'lik enine bir kesi yapın.
   2. Cildi forseps ile tutun ve sol arka bacağa doğru iterek deri altı bir cep yapmak için künt, kavisli makas kullanın. Makası açın, açılan makası kesimden çekin ve cebi genişletmek için tekrarlayın.
   3. Pompayı, akış moderatörü kuyruğa doğru olacak şekilde cebe yavaşça yerleştirin (Ang-II salınımının insizyon bölgesi tarafından potansiyel girişimini en aza indirmek için).
      NOT: Cep sadece pompa yerleştirilmesi için değil, aynı zamanda cildin pompanın etrafında sıkı olmaması için yeterince geniş olmalı ve optimum yara iyileşmesi için pompa ile kesi yeri arasında en az 5 mm olmalıdır.
   4. Yarayı 4-0 emilebilir kesilmiş dikişlerle kapatın.
   5. Fareye, deri altından 10 μL/g farede salin içinde %10 glikoz enjekte edin.
   6. Kapalı yaraya povidon-iyot yara spreyi uygulayın ve farenin bir ısıtma lambası altında bilinci geri kazanmasına izin verin, ardından ameliyattan sonraki 3 gün boyunca 200 mL içme suyunda 7.5 mg piritramid (uzun süreli ağrı yönetimi için) ve% 5 glikoz ile kafese geri koyun.
   7. Fareleri ağrı veya sıkıntı belirtileri için günde birkaç kez kontrol edin.
      NOT: Aort rüptürleri %20-%40 oranında ve ağırlıklı olarak ameliyattan sonraki ilk 3-10 gün içinde meydana geldiğinden, uzun süreli şiddetli ağrı veya sıkıntı riskinin sık sık hayvan izlemesi ile en aza indirilmesi gerekir. Yaklaşan rüptür için ana endikasyonlar şunları içerir: gruptan ayrılma, kambur duruş, hareketliliğin azalması (arka ekstremite felci ölçüsünde) ve kullanım sırasında azalmış veya yanıt vermeme.

2. Juguler ven kateterizasyonu

NOT: Bu cerrahi prosedür 8x-10x büyütmeli bir mikroskop gerektirir.

1. Vasküler erişim sistemini kullanarak ( bakınız Malzeme Tablosu), 3Fr tarafını istenen uzunlukta (silikon ankrajdan ~ 5-7 mm önce) keserek ve kateteri vasküler erişim sisteminin (VAS) 22 G metal konektörü üzerinde en az 3 mm örtüşme ile iterek kateteri hazırlayın. Bağlantı noktasını korumak için alüminyum kapağı düğmenin üzerine yerleştirin.
2. 1-1,5 cm uzunluğunda 6-0 ipek ligatürler hazırlayın.
3. Fareyi anestezi odasına bilinçsiz olana_{kadar 2} L/dak O2 ile karıştırılmış %3-%4 izoflurana yerleştirin.
4. Fareyi sırtüstü pozisyonda ısıtılmış bir masaya (37 ° C) hareket ettirin ve izofluran anestezisini burun konisinden %1,8-%2 oranında tutun.
5. Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz kayganlaştırıcısı uygulayın.
6. Fareye, deri altından 10 μL/g fareye tuzlu su içinde% 2,5 büprenorfin enjekte edin.
7. Kürkü ventral taraftaki boynun sağ tarafından ve üst sırtın sağ tarafındaki tıraş edin (sol tarafta implante edilmiş ozmotik pompa olacaktır).
8. Tıraş edilen bölgenin dezenfeksiyonu için povidon-iyot çözeltisini uygulayın.
9. Farenin ayak parmağını sıkıştırarak tamamen uyuşturulduğunu kontrol edin.
10. Juguler ven hazırlığı (5-10 dk, mikroskop altında gerçekleştirilir)
    1. Boynun sağ tarafında, sağ klavikula üzerinde 0,5 cm'lik transversal supraklaviküler cilt kesisi yapın.
    2. Bağ dokusunu ve yağını ayırmak için künt mikrocerrahi cımbız kullanın ve dış juguler veni açığa çıkarın. Yağdaki küçük kan damarlarını parçalamaktan kaçının.
    3. Göğüs kaslarına yakın, damarın en az 5 mm'sini izole edin.
    4. Bükülmüş mikro cımbız kullanarak ven altındaki dokuyu künt diseke eder ve 6-0 ligatürlerin 2-3'ünden geçirir.
       NOT: İlgilenilen alanda herhangi bir yan dal tespit edilirse, ya yan dala kaudal olacak şekilde ligatür yerleştirilmeli ya da yan dal izole edilerek ve 6-0 ligatür ile bağlanarak kalıcı olarak bağlanmalıdır.
    5. Ligatürlere tutun ve siteye bir damla salin ekleyin.
11. Düğme implantasyonu (5-7 dk, mikroskopsuz yapılır)
    1. Fareyi ters çevirin ve eğilimli konuma getirin; Anestezi derinliğini bir ayak parmağı tutamağı ile doğrulayın ve traş edilen bölgeyi dezenfekte etmek için povidon-iyot çözeltisini uygulayın.
    2. Orta omurga ve sağ skapuler çizgiler arasında bir neşter ile üst sırtta 1 cm'lik bir sagital kesi yapın.
    3. Künt diseksiyon ile kesi bölgesinin etrafındaki VAS boyutundan sadece biraz daha büyük dairesel bir cep yapmak için künt kavisli makas kullanın.
    4. Künt kavisli makası kullanarak sağ omzun üzerinden boyundaki ventral kesiye doğru kraniyal olarak tünel açmak için makası hafifçe açın, ardından açılan makası dışarı çekin ve hareketi daha fazla itilirken tekrarlayın.
       NOT: Bu adım için fare sol tarafından açılabilir.
    5. Tünel ventral insizyona ulaştığında, ventralden dorsal insizyona cerrahi kelepçelerden geçin.
    6. Kateterin 3Fr ucunu kelepçeye takın ve kateteri tünelden çekin, böylece ventral boyun insizyonunun dışında kalır ve VAS dorsal insizyonda yerinde olur.
    7. VAS'ın cerrahi keçe diskini deri altından arkadaki insizyona yerleştirin.
    8. Kateteri açın ve kalsiyum ve magnezyum (PBS^-/-) içermeyen salin veya fosfat tamponlu salin ile yıkayın, koruyucu alüminyum kapağı çıkarmak için taşıma aletinin çatal ucunu kullanarak açıklığı kontrol edin ve ardından düğmeyi tutmak için manyetik ucu kullanın ve sıvı 1Fr ucundan sızana kadar ilgili enjektöre bağlı 1 mL'lik bir şırınga ile enjekte edin.
       NOT: Kateter yıkama alternatif olarak adım 2.1'de gerçekleştirilebilir.
    9. Düğmeye cebinizde kaudal olarak basın ve cildi VAS'ın keçe diski üzerinden, VAS'ın flanşının altında, kraniyal olarak en az iki 4-0 kesilmiş dikişle kapatın.
       NOT: Düğmenin etrafındaki ciltte gerginlik olmadığından emin olun.
12. Ven kateterizasyonu (7-10 dk, mikroskop altında yapılır)
    1. Fareyi sırtüstü pozisyona geri çevirin, anestezi derinliğini bir ayak parmağı tutamıyla doğrulayın ve kesilen bölgeye bir damla salin ekleyin.
    2. Kateter ve juguler ven etrafındaki ilk ligatürü 2-3 knot ile damarı ligate'e bağlamak ve kateteri dışarıya sabitlemek için mümkün olduğunca kraniyal olarak bağlayın. İkinci bağı pektoral kaslara mümkün olduğunca yaklaştırın.
    3. Kateteri istenen uzunluğa kadar kısaltın, böylece keskin bir uç oluşturmak için çapraz açıyla mikro makasla keserek kateterin ~ 3-5 mm'si damarda olur.
    4. Güvenli kraniyal ligatürü çekerek ve iğneyi damara paralel iterek tuzlu suyla dolu 1 mL'lik bir şırıngaya bağlı 27 G'lik bir iğne kullanarak damardaki bir deliği delin.
       NOT: Geri akıştan gelen kan damardan sızarsa, kanama durana kadar basınç uygulamak için pamuklu çubukla kullanın.
    5. Güvenli kraniyal bağı çekerek ve bükülmüş cımbızı kullanarak kateteri damarın içine kaydırarak kateteri aynı şekilde damara yerleştirin. Kateteri damarla aynı hizaya gelene kadar itin.
    6. İkinci bağı 2-3 knot ile damar içine kateterin yerleştirildiği bölge üzerine bağlayın ve kan kaçağı olmadığını kontrol edin. Kateteri ek olarak sabitlemek için üçüncü bir ligatür ve lokal yağ dokusunun bir kısmı kullanılabilir.
    7. Her iki ligatürdeki fazla ucu mikro makasla kesin ve bir damla salin ekleyin.
    8. Cildi 4-0 emilebilir kesilmiş dikişlerle kapatın.
    9. Fareye, deri altından 10 μL/g farede salin içinde %10 glikoz enjekte edin.
    10. Koruyucu alüminyum kapağı çıkarmak için taşıma aletinin çatal ucunu ve ardından düğmeyi tutmak için manyetik ucu kullanarak fareye istenen miktarda inhibitör veya PBS / salin enjekte edin ve enjektöre bağlı 1 mL'lik bir şırınga ile enjekte edin.
        NOT: Enjeksiyon şırıngasında hava veya hava kabarcığı olmadığından emin olun, enjeksiyondan önce bir damla sıvı çıkana kadar pistona bastırın. Kateter ucuna kan çekilmesini ve kateter tıkanmasına neden olmasını önlemek için şırıngayı enjektörle VAS'tan ayırırken piston üzerindeki pozitif basıncı koruyun.
    11. Kapalı yaraya bir povidon-iyot yara spreyi uygulayın ve farenin bir ısıtma lambası altında bilinci kazanmasına izin verin, ardından ameliyattan sonraki 3 gün boyunca 200 mL içme suyunda 7.5 mg piritramid (uzun süreli ağrı yönetimi için) ve 20 mL% 5 glikoz ile kafese geri gönderin.
    12. Fareleri ağrı veya sıkıntı belirtileri için günde birkaç kez kontrol edin.
13. Günlük enjeksiyonlar (<5 dk.)
    1. Günlük enjeksiyon için, fareyi anestezi odasına% 3 -% 4 izofluranda 2 L / dak_O2 ile karıştırılmış, bilinçsiz olana ve solunum hızı yavaşlayana kadar yerleştirin, ardından adım 2.12.10'daki gibi enjekte edin. Enjeksiyon sonrası şişlik belirtileri için boynu kontrol edin, bu da kateterin artık damara yerleştirilmediğini gösterir. Ayrıca, kateter tıkanırsa enjeksiyonun mümkün olmayacağını unutmayın.
       NOT: Günde 1x 10 μL / g fare ağırlığı enjeksiyonu fareler tarafından iyi tolere edilir.

3.3D ultrason

1. Ultrason görüntüleme sistemini, ısıtma masasını ve jel ısıtıcısını hazırlayın, dönüştürücüyü sisteme takın ve sahnenin üzerine enine konumda (yani fare omurgasına dikey) ayarlayın.
2. Ultrason yazılımını kullanarak ayarları 30 dB, görüntü derinliği 9,0 mm ve görüntü genişliği 8,08 mm olacak şekilde ayarlayın.
3. Fareyi anestezi odasına bilinçsiz olana_{kadar 2} L/dak O2 ile karıştırılmış %3-%4 izoflurana yerleştirin. Fareyi sırtüstü pozisyonda ısıtılmış bir masaya (37 ° C) hareket ettirin ve izofluran anestezisini bir burun konisi aracılığıyla% 1.8 -% 2'de tutun.
4. Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz kayganlaştırıcısı uygulayın.
5. Kürkü fare karnındaki tıraş edin. Gerekirse 1 dakika boyunca epilasyon kremi uygulayın, ardından silin ve nemli gazlı bezle temizleyin.
6. Sahnedeki dört elektrokardiyogram (EKG) elektrodunun her birine bir damla elektrot jeli ekleyin ve fare ekstremitelerini bunlara bantlayın.
7. Sıcak ultrason jelini farenin karnına yayın ve vericiyi hayvanla temas ettirmek için indirin.
8. Aortu dairesel hızlı titreşen bir damar olarak tanımlayın.
   NOT: İnferior vena kava (IVC) aortun yanına yerleştirilecektir ve prob sıkıca bastırılırsa, aort sabit kalırken IVC sıkıştırılacaktır. Analiz edilen damarın IVC yerine aort olduğunun doğrulanması, 65°'lik bir açıyla darbe dalgası Doppler (PW-modu) kullanılarak elde edilebilir. Aort yüksek nabız dalga hızına sahip olacaktır.
9. Sol renal arteri bulun ve ilgilenilen alanda (yani suprarenal aort) herhangi bir girişim olmadığından emin olmak için bölgeyi kraniyal olarak 12 mm'ye kadar manuel olarak araştırın. Sol renal artere dönün ve ardından probu sol renal arterden kraniyal olarak 6 mm'ye ayarlayın.
   NOT: 3D ultrason, menşe noktasından kaudal olarak yarıya (6 mm) başlayan ve belirtilen uzunluğu (12 mm) kraniyal olarak kaydedecektir. Parazit için sorun giderme adımları, dönüştürücüyle hafifçe bastırmayı, dönüştürücüyü kaldırıp tekrar indirmeyi, daha fazla ultrason jeli uygulamayı ve sahnenin açısını eğmeyi içerir.
10. 3D ultrason alımı
    1. Solunum geçidini %25 gecikmeye ve %50'lik bir pencereye ve EKG tetikleyicisini (T1) 50 ms'ye (aortun pik sistolik dilatasyonunu kaydetmek için) ayarlayın.
       NOT: Solunum geçidi, solunum hızına ve hareket artefaktlarının çıkarılmasını sağlama çabasına bağlı olarak her hayvan için optimize edilebilir.
    2. 3B seçeneklerinden, tarama mesafesini 0,076 mm'lik bir adım boyutuyla 11,96 mm'ye ayarlayın ve bu da 157 kare ile sonuçlanır.
    3. Program yaklaşık 1-2 dakika içinde 157 kareyi otomatik olarak alacaktır. Görüntü kalitesini kontrol etmek için kaydırın, subpar ise tekrarlayın, sonra görüntüyü kaydedin.
11. 2D çap kazanımı
    1. Solunum geçidi ve EKG tetikleyicisini kapatın ve suprarenal aortun 12 mm uzamasında en büyük çapa sahip alanı manuel olarak bulun.
    2. B modu görüntüsü^{16 elde edin}.
    3. Ek olarak, dönüştürücüyü hareket ettirmeden, aynı yerde sistemin standart ayarlarıyla EKG kapılı kilohertz görselleştirme (EKV) görüntüsü elde edin.
12. Taramayı sonlandırma
    1. Ultrason jelini karnından silin ve fareyi kafesine geri getirin. Tamamen iyileşene kadar fareyi izleyin.

4. Ultrason analizi

1. Hacim analizi
   1. Analiz yazılımında, 3D Mode görüntüsünü açın ve Görüntü İşleme menüsünün altında, 157 2D kareyi bir 3D görüntüde (yani küp) derleyecek olan 3D'ye yükle'ye basın.
   2. Hacim Ölçümü menüsünde, Paralel ve Dönme Yöntemleri'ni seçin ve ardından yazılım 3B görüntüyü tek bir bölmede görüntüleyecektir.
   3. Ses Düzeyi altında, Başlat'a basın ve ilk noktayı eklemek için tıklatarak, imleci aortun etrafında hareket ettirerek ve ardından konturu tamamlamak için sağ tıklatarak aortun iç duvarının etrafına ilk konturu çizin.
   4. 9-10 kare (0,75-1 mm) atlayın, ardından aynı şekilde başka bir kontur çizin. Son kareye ulaşılana kadar bu adımları yineleyin. Bu, 16-17 konturla sonuçlanmalıdır.
      NOT: 12 mm'nin üzerindeki doğru hacmin hesaplanabilmesi için ilk ve son çerçevelerin konturlarının çizilmiş olması gerekir.
   5. Menüden ilk konturu seçin ve İyileştir'i seçin. Bu, çizgiyi gemi duvarına yakından sığdırmak için kenar algılama algoritmasını başlatacaktır. Kontur üzerindeki noktaları yeni bir konuma sürükleyerek hareket ettirin, böylece kontur aortun iç duvar kenarını doğru bir şekilde hizalar.
      NOT: Ang-II modelinde intramural trombüs mevcut olabilir. Bu, bu modelin ortak bir özelliği olduğundan, hacim ölçümü trombüsü içermelidir.
   6. Tüm konturları hassaslaştırın ve analizi kaydetmek için Son'a basın. Hesaplanan hacim sol alt köşede görüntülenecektir.
2. Çap analizi
   NOT: Çap ölçümleri içten içe duvar, dıştan dış duvara veya içten dışa duvar şeklinde yapılabilir, ancak tüm ölçümler için tutarlı olmalıdır. Bununla birlikte, Ang-II modelinde, analize dahil edilmesi gereken bir intramural trombüs mevcut olabilir.
   1. 3D mod görüntüsünden: Görsel inceleme ile maksimum çapı belirlemek için 157 kareyi değerlendirin. Ardından, Ölçüm menüsünden Doğrusal'ı seçin ve en büyük çapı belirlemek için aort boyunca birden fazla çizgi çizin.
   2. B modu veya EKV (EKG kapılı kilohertz görselleştirme) görüntüsünden: Cine döngüsünde, görsel inceleme ile aortun maksimum genişlemesini (sistolde) tanımlayın. Ardından, Ölçüm menüsünden Doğrusal'ı seçin ve en büyük çapı belirlemek için aort boyunca birden fazla çizgi çizin.
      NOT: EKG, kardiyak siklüsü belirlemek için kullanılabilir, ancak görsel tanımlama doğru sonuçlar verir.

Temsili sonuçlar, başlangıçta, 8. günde ve 27. günde ultrason ile izlenen suprarenal anevrizmaların gelişimini ve ilerlemesini göstermektedir (Şekil 1A). Şekil 1A'daki 27. gün aortunun trikrom boyası ( Şekil 1B ), duvar diseksiyonu ve intramural trombüs ile oluşan anevrizmanın morfolojisini göstermektedir. Aort hacmi (mm3) 12 mm14'lük bir streç üzerinde belirlendi ve EKV görüntülerinden ek olarak maksimum aort çapı ölçüldü. İlk anevrizma gelişimini tanımlamak için başlangıçtan 8. güne kadar% 125'lik bir hacim büyümesi eşiği belirlendi. 2 yıl boyunca toplanan verilere dayanarak (2020-2021, n = 157), hayvanların sadece% 9'u bu kesime göre bir AAA oluşturamadı. Bununla birlikte, farelerin% 35'i 9. günde kateter implantasyonundan önce aort rüptürleri (torasik veya karın) yaşamıştır, böylece AAA hastalığı olan kalan hayvanların toplam% 56'sı tedavi gruplarına tabakalaşmaya uygundur (Şekil 1C). Not olarak, tarihsel PBS kontrollerimiz arasında (n = 21), anevrizmalar değişen derecelerde gelişmiştir (aralık: % 128 -% 314, ortalama% 199 ± 8. günde % 55 SD aort hacmi büyümesi). Önemli olarak, ilk genişleme ile daha fazla hastalık progresyonu arasında ters bir ilişki gözlenmiştir, yani hızlı ilerleyen anevrizmaların% 55'i (8. günde >% 200 hacim büyümesi) 27. güne kadar ilerlemezken, diğer anevrizmaların% 80'i (>125% ve% 200 hacim büyümesi) deneyin sonuna kadar genişlemeye devam < (Şekil 1D).

Son zamanlarda bildirildiği gibi14,17, tarif edilen yöntemler başarılı bir şekilde kurulmuş, doğrulanmış ve uygulanmıştır, örneğin, bir histon sitrullinasyon inhibitörünün (GSK484, nötrofil hücre dışı tuzak oluşumunun inhibisyonu için) yerleşik AAA'nın ilerlemesini bloke etmedeki terapötik etkisini belgelemek için. ApoE eksikliği olan fareler, 28 gün boyunca deri altından implante edilen ozmotik pompalarla 1000 ng / kg / dak'da Ang-II aldı. Hayvanlar, 8. günde ölçülen aort hacmine dayanarak GSK484'e (0.2 μg / g / gün) veya PBS tedavisine 1: 1 tabakalandırıldı ve 9. günde juguler ven kateterizasyon prosedürü uygulandı. İlaç enjeksiyonları, çalışmanın sonuna kadar günlük olarak 10 μL / g fare ağırlığı hacminde gerçekleştirildi17. Şekil 2, GSK484 tedavisinin AAA progresyonunu inhibe ettiğini, anevrizmaların kontrol farelerinde büyümeye devam ettiğini ortaya koyan örnek (n = 2 / grup) ultrason sonuçlarını (mutlak ve göreceli hacim veya çap genişlemesinin zaman seyri) göstermektedir.

Şekil 1: Ang-II fare modelinde AAA oluşumu ve ilerlemesi 3D ultrason ile tespit edildi. (A) Suprarenal aort, Ang-II pompa implantasyonundan sonra başlangıçta (BL), gün 8 (d8) ve gün 27'de (d27) 3D ultrason ile izlendi. Hacim, 3D yeniden yapılandırılmış bir görüntüye dayanarak suprarenal aortun 12 mm'lik bir uzantısı (157 kare) üzerinde ölçüldü. EKV görüntülerinden maksimum aort çapı belirlendi. (B) Fare kurban edildikten ve organ toplanmasından sonra 27. günün enine kesitinin trikrom boyası. Aort diseksiyonunun varlığı L1/L2 (lümen 1 ve lümen 2) ile gösterilir ve intramural trombüs A ve B'de * ile gösterilir. (C) 2 yıl boyunca toplanan bir veri setinden 8. günde AAA insidansı (BL'den %>125 aort hacmi büyümesi) ve ilk 9 gün içinde (torasik veya karın) aort rüptürleri (n=157) insidansı. (D) PBS kontrolü ile tedavi edilen farelerde (n = 21) başlangıçta hızlı oluşan (BL'den 8. güne %200 > aort hacmi büyümesi) ile orta derecede büyüyen (BL125 ve %200 aort hacmi büyümesi) anevrizmalarının 8. günden 27. güne ilerleme sıklığı (n = 21). Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Örnek olarak, vasküler erişim düğmesi aracılığıyla GSK484 veya PBS'nin intravenöz enjeksiyonu ile Ang-II modelinde AAA progresyonunu bloke etmek için histon sitrülinasyonun inhibisyonu sonucu elde edilir. (A) Suprarenal aortun 12 mm'lik bir gerilmesi üzerinde ölçülen aort hacmi (mm3). (B) Başlangıçtan itibaren hesaplanan aort hacmi büyümesi (BL = %100). (C) EKV görüntülerinden belirlenen maksimum aort çapı. GSK484 verilerinden hesaplanan aort çapı büyümesi daha önce yayınlanmış bir çalışmadan çıkarılmıştır17. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Yazarların herhangi bir açıklaması yoktur.