İmmünohistokimyasal yöntemler, yetişkin arıların midgut ve hipofaringeal bezlerindeki apoptoz ve nekroz seviyesini tespit etmek ve değerlendirmek için bal arısı araştırmalarında yararlıdır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bal Arısı Dokusunda Histolojinin Temelleri ve Hücre Ölümü Tespiti
Bu makalede
Özet
Özet
Kovanın içindeki (hemşire işçiler ve diğer kovan arıları) ve kovanın dışındaki bal arıları (Apis mellifera L.) (toplayıcılar), iklim ve hava değişikliklerine, çeşitli pestisitlere, patojenlere ve yetersiz beslenmeye maruz kalmaktadır, esas olarak ağızdan girmekte ve öncelikle yetişkin arıların sindirim yollarını etkilemektedir. Bu tür dış ve iç stresörlerin bal arıları üzerindeki etkilerini anlamak ve önlemek için, yararlı bir araştırma yöntemi immünohistokimyasal yöntemdir. Histolojik analiz için yetişkin arıların midgut (ventrikül) ve hipofaringeal bezlerini (HPG'ler) hazırlamak için temel bir protokol tanımlanmıştır. Hücre hasarının seviyesini değerlendirmek ve nekrozu doğal bir doku rejenerasyonu süreci olarak programlanmış hücre ölümünden (apoptoz) ayırt etmek için ayrıntılı bir metodoloji açıklanmaktadır. Oksalik asit ve pestisitler (insektisit ve akarisit) ile erişkin bal arısı tedavisinin sonuçları ve ventriküls ve HPG'lerde hücre ölümünün belirlenmesi sunulmaktadır. Metodolojinin artıları ve eksileri de tartışılmaktadır.
Giriş
Bal arıları (Apis mellifera L.), diğer vahşi tozlayıcıların yanı sıra, tarımsal bitkilerin en önemli tozlayıcılarıdır. Binlerce yıl boyunca, değişen çevre arıların morfolojilerini, fizyolojilerini, davranışlarını ve toleranslarını çeşitli patojenlere ve parazitlere uyarlamalarını etkilemiştir. Bu nedenle, bal arıları dünya çapında çok çeşitli türler ve alt türler geliştirmiştir1. Bu sonuçlar, bal arısının sindirim sistemi yapısında genetik çeşitlilik olduğu yönündeki önceki bulgularla tutarlıdır, ancak aynı zamanda midgut değişikliklerinin çevresel faktörlerden kaynaklandığını düşündürmektedir 2,3
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Bal arısı araştırmaları için temel histoloji
- Balarısı dokusunun diseksiyonu
NOT: İşçi arıların diseksiyonu için, LED ışık kaynağı olan bir diseksiyon mikroskobu kullanın. En kullanışlı büyütme ~ 20x'tir.- Manipülasyon ve diseksiyon
- Forsepsli bir işçi arıyı dikkatlice alın ve 22 dakika boyunca buza (veya -20 ° C'de dondurucuya) koyun ve 22 dakika boyunca hareketsizhale getirin. Arısı, Petri kabının üzerine, göğüs kafesinin en üst arka kısmından çapraz olarak, soldan sağa ve sağdan sola iki kez sabitleyin.
- Vücudu örtmek için böcek salini dökün. Petri kabını mikroskop altına yerleştirin, od....
- Manipülasyon ve diseksiyon
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Midgutta hücre ölümü tespiti
Ljubljana'daki Slovenya Tarım Enstitüsü'ndeki deneysel arı kovanından yeni ortaya çıkan işçi arılar (Apis mellifera carnica), bireysel olarak% 3 oksalik asit (OA) 23 ile muamele edildi. OA, arıcılıkta Varroa yıkıcı kontrolü için sıklıkla kullanılır. Tedaviden sonra, işçi arılar (her gruptan üç) buz üzerinde hareketsiz hale getirildi. Midgut diseke edildi ve% 10 formalin ile sabitlendi. Doku daha sonra bir dizi alkol çözeltisinde de.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Canlı organizmalarda, hücre ölümü apoptoz veya nekroz25 olarak tanımlanır ve otofaji26 eşlik edebilir. Apoptotik ve nekrotik hücreler arasındaki fark, apoptozun programlanmış hücre ölümünün bir şekli olması ve normal hücrelerde ortaya çıkması, nekrozun ise ölümcül koşullar (örneğin, kaza, hastalık) nedeniyle ortaya çıkmasıdır27,28. Apoptoz, TUNEL tekniğine dayanan tahlil kitleri kullanılarak tespit edilebilir (apopt.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarın çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Slovenya Araştırma Ajansı'nın P4-133 no'lu hibe desteğine minnetle teşekkür ediyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 2-Propanol | |||
| ApopTag Peroksidaz kiti (ApopTag Peroksidaz Yerinde Apoptoz Tespiti) | Sigma-Aldrich | S7100 | Test B, https://www.sigmaaldrich.com/SI/en/product/mm/s7100?gclid=CjwKCA jw7vuUBhBUEiwAEdu2pPanI9SE j81ZTl-nLHEoxXAv7ViKwPA_QRx H7fciMRNcYwR7lbPQbhoCqcQQA vD_BwE; S7101'de bulunan pozitif kontroller |
| DeadEnd Kolorimetrik TUNEL sistemini | |||
| Diseksiyon mikroskobu (arı diseksiyonu için) | Zeiss | ||
| Damıtılmış su | |||
| Gömme kaseti | |||
| EnVision Sistemi alkalin fosfataz kiti | Dako | ||
| Eosin Y Çözeltisi | Sigma-Aldrich | alkollü | |
| Etanol | %95 (veya daha az saf), %90, %80 | ||
| Uzak montaj ortamı, sulu | Dako | montaj ortamı | |
| Düzleştirme masası | Leica | HI1220 | |
| Forseps (arı diseksiyonu için) | Güzel bilim araçları | 11294-00 | Standart # 4 |
| Formalin% | Formaldehit | ||
| Hematoksilen | Sigma-Aldrich | ||
| HistoChoice Temizleme Maddesi | Sigma-Aldrich | temizleme maddesi | |
| Hidrojen peroksidaz % | |||
| İnkübatör | BioRad | ||
| Böcek pimleri ve nbsp; (arı diseksiyonu için) | Entosphinx | 44594 | Böcek pimleri paslanmaz çelik ve beyaz, boyut 2 |
| ISCDDK, AP (Yerinde Hücre Ölümü Tespit Kiti, Alkalin Fosfataz) | Roche | 11684809910 | Tahlil C, https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/362/737/11684809910b |
| >> ul.pdf KHPO4 | |||
| Lab saati | |||
| Işık mikroskobu | Leica | ||
| Mikroskop slaytları Slaytların | bulunduğu kutu, tozu önlemek için plastik bir sargı içinde korunmalıdır | ||
| Mikrotom | Leica | ||
| Modüler doku gömme istasyonu | Leica | ||
| Na2HPO4 | |||
| NaCl | |||
| Paraformaldehit % | |||
| Paraplast | Leica | ||
| Pasteur pipetleri | 1,5 mL; 3 mL | ||
| PBS | |||
| Petri kabı ve nbsp; (arı diseksiyonu için) | Yoğuşma silikonu ile doldurulmuş (Ksantoprene L mavi ve Üniversal sıvı artı aktivatör) | ||
| Proteinaz K | Merck | 21627 | |
| Ringers solüsyonu (arı diseksiyonu için) | 7,5 g NaCL, 2,38 g Na2HPO4, 2,72 g KH2PO4, 1 L damıtılmış su | ||
| Makas (arı diseksiyonu için) | Güzel bilim aletleri | 1406-09, 14061-09 | Düz ve kavisli, 9 cm |
| Üniversal sıvı artı aktivatör (arı diseksiyonu için) | Kulzer | ||
| Saatçi' s forseps (arı diseksiyonu için) | İnce bilim araçları | 91100-12 | |
| Su banyosu | Leica | ||
| Suluboya fırçası | 2x | ||
| Xantoprene L mavi (arı diseksiyonu için) | Kulzer |
Kaynaklar
- Ruttner, F. Naturgeschichte der Honigbienen. , Ehrenwirth. München. (1992).
- Jordan, R. Kleine Bienenkunde. Österreichischer Agrarverlag Wien München. , 41-45 (1964).
- Snodgrass, R. E. The Anatomy of the Honey Bee.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
