Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Bal Arısı Dokusunda Histolojinin Temelleri ve Hücre Ölümü Tespiti

3.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/64141

⸱

7 Temmuz 2022

1Agricultural Institute of Slovenia

Bu makalede

Özet

İmmünohistokimyasal yöntemler, yetişkin arıların midgut ve hipofaringeal bezlerindeki apoptoz ve nekroz seviyesini tespit etmek ve değerlendirmek için bal arısı araştırmalarında yararlıdır.

Özet

Kovanın içindeki (hemşire işçiler ve diğer kovan arıları) ve kovanın dışındaki bal arıları (Apis mellifera L.) (toplayıcılar), iklim ve hava değişikliklerine, çeşitli pestisitlere, patojenlere ve yetersiz beslenmeye maruz kalmaktadır, esas olarak ağızdan girmekte ve öncelikle yetişkin arıların sindirim yollarını etkilemektedir. Bu tür dış ve iç stresörlerin bal arıları üzerindeki etkilerini anlamak ve önlemek için, yararlı bir araştırma yöntemi immünohistokimyasal yöntemdir. Histolojik analiz için yetişkin arıların midgut (ventrikül) ve hipofaringeal bezlerini (HPG'ler) hazırlamak için temel bir protokol tanımlanmıştır. Hücre hasarının seviyesini değerlendirmek ve nekrozu doğal bir doku rejenerasyonu süreci olarak programlanmış hücre ölümünden (apoptoz) ayırt etmek için ayrıntılı bir metodoloji açıklanmaktadır. Oksalik asit ve pestisitler (insektisit ve akarisit) ile erişkin bal arısı tedavisinin sonuçları ve ventriküls ve HPG'lerde hücre ölümünün belirlenmesi sunulmaktadır. Metodolojinin artıları ve eksileri de tartışılmaktadır.

Giriş

Bal arıları (Apis mellifera L.), diğer vahşi tozlayıcıların yanı sıra, tarımsal bitkilerin en önemli tozlayıcılarıdır. Binlerce yıl boyunca, değişen çevre arıların morfolojilerini, fizyolojilerini, davranışlarını ve toleranslarını çeşitli patojenlere ve parazitlere uyarlamalarını etkilemiştir. Bu nedenle, bal arıları dünya çapında çok çeşitli türler ve alt türler geliştirmiştir1. Bu sonuçlar, bal arısının sindirim sistemi yapısında genetik çeşitlilik olduğu yönündeki önceki bulgularla tutarlıdır, ancak aynı zamanda midgut değişikliklerinin çevresel faktörlerden kaynaklandığını düşündürmektedir 2,3.

Bal arısının sindirim sistemi üç ana bölüme sahiptir: foregut, midgut (ventriculus) ve hindgut4. Ventrikül, polen ve nektar/balın sindirimi için gerekli bir organdır; hindgutta, ozmotik kontrol suyun ve iyonların emilimi yoluyla gerçekleşir2. Bal arısı işçilerinin hipofaringeal bezleri (HPG'ler) kafada bulunur ve yavruyu, kraliçeyi ve koloninin üyelerini beslemek için arı sütü bileşenlerini sentezler ve salgılar. Büyüklükleri yaş ve görevlerle birlikte değişir ve doğru beslenmeye (kaliteli polen) bağlıdır. 6 ila 18 günlük hemşire işçiler yavru yetiştiriciliği gerçekleştirir ve HPG'lerin boyutu 5,6 artar. Toplayıcı arılarda, HPG'ler dejenere olur ve sadece karmaşık şekerleri balda basit olanlara (α-glukozidazlar, lösin arylamidaz, invertaz) dönüştürmek için önemli olan enzimleri salgılar7.

Bal arıları çeşitli biyotik ve abiyotik stresörlere maruz kalır8 ve sindirim sistemi birkaç olumsuz uyarıcıdan etkilenebilir. Organizmayı patojenlerden koruyan ilk bariyer, patojenlere karşı korunmak için bağırsak mukozasından oluşan midguttaki peritrofik zardır4. HPG'lerin gelişimi ve işlevi diyete, yaşa ve koloni durumuna bağlıdır9 ve insektisitler, akarisitler10 ve patojenler 11,12,13'ten etkilenir. Varroa kontrol tedavisine bağlı kovanda bulunan akarisit kalıntıları ve çevreden gelen pestisitler toplayıcı arıları ve hemşire arıları etkilemektedir14,15. Bal arısı kolonileri için en büyük tehdit, hem koloni kayıplarına katkıda bulunan virüslerin bir vektörü olarak16 hem de konakçının yağ vücudunun (bal arılarında önemli bir hayati organ) tüketicisi olarak akar Varroa yıkıcısıdır, bu da sonuçta bireyin vücudunu ve koloni işlevlerini etkiler17.

Bununla birlikte, yoğun tarım arazisi habitatları, bal arıları için kısa vadeli bir gıda kaynağı sağlayabilir. Bu nedenle, tarım-çevre planları, bal çiçeklerinin tarımsal arazilerde kullanılabilirliğini arttırmalıdır18. Farklı alt türlerin morfolojisini değerlendirmek için 6,19,20,21 veya bu faktörlerin hücre veya doku seviyelerinde, özellikle midgut ve HPG'lerde subletal etkilerini, histolojik ve immünohistokimyasal yöntemler bal arılarında histoloji araştırmalarında kullanılmak üzere pratik ve yeterince doğrudur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. Bal arısı araştırmaları için temel histoloji

  1. Balarısı dokusunun diseksiyonu
    NOT: İşçi arıların diseksiyonu için, LED ışık kaynağı olan bir diseksiyon mikroskobu kullanın. En kullanışlı büyütme ~ 20x'tir.
    1. Manipülasyon ve diseksiyon
      1. Forsepsli bir işçi arıyı dikkatlice alın ve 22 dakika boyunca buza (veya -20 ° C'de dondurucuya) koyun ve 22 dakika boyunca hareketsizhale getirin. Arısı, Petri kabının üzerine, göğüs kafesinin en üst arka kısmından çapraz olarak, soldan sağa ve sağdan sola iki kez sabitleyin.
      2. Vücudu örtmek için böcek salini dökün. Petri kabını mikroskop altına yerleştirin, odaklanın ve ayarlayın.
      3. Aletleri hazırlayın ( bkz. Malzeme Tablosu).
    2. Midgut diseksiyonu
      1. Arı vücudunun sağ tarafının ortasındaki tergit A5'in (Şekil 1) altına makasın bir noktasını sokarak karın ile başlayın. Tergite A2'ye kesin.
      2. İç organlara zarar vermemek için makasın iç bıçağını vücudun yan tarafına paralel tutun. Makası sola çevirin ve bir kesim yapın; sağa dönün ve başka bir kesim yapın. Karnın sol kısmını yavaşça açın ve sabitleyin. Diğer tarafta tekrarlayın.
      3. Bir elinizle forseps kullanarak, bal arısı midesini yavaşça yukarı doğru çekin ve diğer yandan makasla yemek borusunun en sonunda kesin. Mideyi ve midgutu karından uzaklaştırın ve rektumda kesin. Böcek salin çözeltisi içeren bir pipet kullanın ve dışkıyı veya dokunun parçalarını çıkarın.
    3. HPG'lerin diseksiyonu
      1. Bir işçi arıyı adım 1.1.1'de açıklandığı gibi buz üzerinde hareketsiz hale getirin. Kafayı kesin ve antenler yukarı bakacak şekilde daha küçük plakaya yerleştirin. Kafayı iki pimle sabitleyin: biri sol bileşik gözden, ikincisi sağ bileşik gözden.
      2. Pimlerin iç tarafındaki ilk bileşik göz boyunca bir kesim yapın, labruma devam edin ve ardından ikinci bileşik göz boyunca diğer tarafta başka bir kesim yapın (Şekil 2).
      3. Antenleri kesin. Maskeyi çıkarın ve hala takılı olan yerde kesin. Forsepsleri alın ve bezleri beyin ve bileşik gözlerin bir kısmı ile birlikte dikkatlice çıkarın.
  2. Fiksasyon, dehidrasyon ve parafin gömme
    NOT: Koruyucu eldiven giyin.
    1. Dokuyu penisilin şişelerine yerleştirin,% 10 formalin ile 3/4 doldurun. 4 °C'de buzdolabında saklayın.
    2. 24 saat sonra, dokuyu bir dizi alkolde kurutun:% 70,% 80,% 90,% 100, her biri 1 saat için,% 100 2-propanol, 12 saat boyunca% 100 2-propanol ve son olarak 1 saat boyunca% 100 2-propanol.
    3. Dokuyu histokasetlere yerleştirin; işaretleyin ve 24 saat boyunca 60 ° C'de bir inkübatörde 2-propanol ve parafin (1: 1) ile cam odalara yerleştirin.
    4. Histokasetleri 24 saat daha parafin (I.) içeren başka bir odaya taşıyın. Prosedürü her ikisi de 24 saat boyunca taze parafin ile iki kez daha tekrarlayın (II. ve III.).
    5. Son olarak, montaj istasyonunu hazırlayın ve dokuyu balmumu içine gömmeye başlayın.
      1. Her histokaseti açın ve kapağı çıkarın. Kalıbı balmumu ile doldurun ve kalıbın ortasına ılık forseps içeren dokuyu dikkatlice yerleştirin.
      2. Histokaseti kalıba yerleştirin ve hafifçe balmumu ile örtün. Kalıbı derhal montaj istasyonunun soğuk yüzeyine birkaç saniye yerleştirin, ardından balmumu sertleşene ve kalıptan ve histokasetten ayrılana kadar birkaç dakika soğuk plakaya yerleştirin.
    6. Bitmiş numuneleri toz ve ısıdan uzak bir kutuda saklayın.
    7. Bir mikrotom üzerinde 4 μm ince kesitler kesin: ilk önce birbirine bağlı iki bölüm ve sonra ayrı ayrı bir bölüm. Bölümleri forseps ile aktarın ve damıtılmış su (42 ° C) üzerinde yüzmelerine izin verin, ardından iki bölümü objektif camın sol tarafına ve üçüncüsünü sağ tarafa yerleştirerek temiz slaytlarda toplayın, belirgin bir şekilde ayrı kalın. İşaretli slaytları gece boyunca ısıtma cihazında bırakın ve son olarak histoloji örnekleri için ayrılmış bir kutuda saklayın.
  3. Mum giderme ve rehidrasyon
    NOT: Koruyucu eldiven giyin.
    1. Dokuz Coplin kavanozu hazırlayın ve bölümleri her biri 5 dakika boyunca bir dizi temizleme maddesine (I., II., III.) koyun.
    2. 2-propanol,% 96 etanol (I., II.), alkol% 90 ve% 80 ve her biri 3 dakika damıtılmış suya koyun.
  4. Hematoksilin ve eozin ile boyama
    NOT: Koruyucu eldiven giyin.
    1. Altı Coplin kavanoz hazırlayın.
    2. Hematoksilin ve eozin (H & E) boyama için, mumdan arındırılmış, rehidre edilmiş bölümleri 5 dakika boyunca hematoksilin içine koyun, ardından 2 dakika boyunca akan musluk suyunun altına dikkatlice yerleştirin. Daha sonra bunları 1 dakika boyunca damıtılmış suya ve 4 dakika boyunca eozine koyun (eozin için Coplin kavanozu gerekli değildir).
    3. Slaytları 1 dakika boyunca% 96 etanol, daha sonra 2 dakika boyunca 2-propanol ve son olarak 2 dakika boyunca temizleme maddesine yerleştirin.
    4. Montaj ortamı ve bir kapak camı ekleyin ve kurumasını bekleyin. Bir ışık mikroskobu altında gözlemleyin.

figure-protocol-1
Resim 1: Bal arısı gövdesinin dorsal görünümü. A1-A7 tergitleri. Bal arısı diseksiyonu ile ilgili ayrıntılı talimatlar Carreck ve ark.24'te bulunabilir. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-protocol-2
Şekil 2: HPG'lerin dorsal görünümü, beyne bağlı bileşik gözlerin parçaları (görünmez). 5 ila 6 günlük genç bir işçi arı, dolgun ve kremsi beyaz HPG'lere sahiptir. Acini beyinde bulunur ve baş bölgesini beynin arkasına ulaşan dallarla doldurur. Yiyecek arayan arılarda, bu bezler büyük ölçüde küçülür ve sadece ince iplik benzeri kalıntılar bırakır. Bu nedenle, dokuyu kaybetmemek için daha sonraki prosedürlerde daha kolay hale getirmek için bezleri beyinle birlikte çıkarmak daha iyidir. Ölçek çubuğu = 500 μm. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Doku kesitlerinde hücre ölümünün tespiti

  1. Apoptoz tespit kiti (Tahlil A)
    NOT: Üreticinin protokolünü izleyin ( bkz. Malzeme Tablosu).
    1. Coplin kavanozlarını hazırlayın.
    2. Mumdan arındırma ve rehidrasyondan sonra (bkz. adım 1.3), slaytları% 0.85 NaCl çözeltisine ve ardından fosfat tamponlu salin (PBS) içine daldırın (5 dakika).
    3. Slaytları% 4 paraformaldehit 2 x 15 dakika içine koyun.
    4. Slaytları kaba düz bir şekilde yerleştirin ve 100 μL bir Proteinaz K (20 μg / mL) çözeltisi ekleyin, ardından 10-30 dakika bekletin.
    5. Slaytları PBS'ye yerleştirin (5 dk).
    6. Slaytları PBS'de% 4 paraformaldehit içine yerleştirin (5 dk).
    7. Slaytları PBS'ye daldırın (2 x 5 dakika).
    8. Slaytları kaba düz bir şekilde yerleştirin, 100 μL denge tamponu ekleyin ve 5-10 dakika bekletin.
    9. 100 μL TdT reaksiyon karışımı ekleyin. Kağıt havluları kabın içine, slaytların etrafına koyun, havluları suyla nemlendirin ve ardından plastik ambalajla örtün. Slaytları 37 °C'de 60 dakika boyunca inkübe edin.
    10. Slaytları tekrar boyama rafına yerleştirin ve 15 dakika boyunca 2x salin-sodyum sitrat (SSC) içine daldırın.
    11. Slaytları 3 x 5 dakika PBS'ye, daha sonra% 0.3 hidrojen peroksitte 3-5 dakika ve sonra tekrar PBS'ye 3 x 5 dakika batırın.
    12. Yine, slaytları kaba düz bir şekilde yerleştirin, 100 μL Streptavidin HRP (yaban turpu peroksidaz) ekleyin ve 30 dakika bekletin (plastik ambalajla örtün).
    13. Slaytları PBS'ye 3 x 5 dakika daldırın.
    14. Slaytları kaba düz bir şekilde yerleştirin ve 100 μL 3,3'-diaminobenzidin (DAB) çözeltisi ekleyin. Açık kahverengi bir arka plan arayın.
    15. Slaytları rafa geri koyun ve birkaç kez suda yıkayın (çift damıtılmış).
    16. Kızakları cam kapakların altına monte edin, montaj ortamında kaymaları ve kurumaya bırakın.
    17. Bir ışık mikroskobu altında gözlemleyin.
  2. Apoptoz tespit kiti (Tahlil B)
    NOT: Üreticinin protokolünü izleyin ( bkz. Malzeme Tablosu).
    1. Coplin kavanozları hazırlayın.
    2. Proteinaz K (PBS'de seyreltilmiş 20 μg / mL) hazırlayın.
    3. Bölümleri mumdan arındırdıktan ve yeniden sulandırdıktan sonra (adım 1.3), slaytları 5 dakika boyunca PBS'ye yerleştirin.
    4. Slaytları kaba düz bir şekilde yerleştirin ve Proteinaz K (20 μg / mL, 5 cm² numune başına 60 μL) ekleyin.
    5. Slaytları 2 x 2 dakika damıtılmış suda yıkayın.
    6. Oda sıcaklığında endojen peroksidaz (% 3 hidrojen peroksidaz) içinde söndürün.
    7. Slaytları PBS veya su ile 2 x 5 dakika durulayın.
    8. Kızakları kaba düz bir şekilde yerleştirin ve oda sıcaklığında 10 s boyunca denge tamponu (75 μL / 5cm2) uygulayın.
    9. Mendilin etrafını dikkatlice silin.
    10. TdT enzimini (terminal deoksinükleotidil transferaz) her bölüme ekleyin ve nemlendirilmiş bir odada 37 ° C'de 1 saat boyunca inkübe edin. Kağıt havluları tepsinin içine, slaytların etrafına koyun, havluları suyla nemlendirin ve plastik ambalajla örtün.
    11. Kuluçkadan sonra, numuneleri rafa koyun ve durdurma / yıkama tamponunda bırakın (10 dakika).
    12. Anti-digoxigenin konjugatını oda sıcaklığına ısıtın.
    13. Slaytları PBS ile yıkayın (3 x 1 dakika).
    14. Dokunun etrafını dikkatlice silin.
    15. Bölümlere iki damla Anti-Digoxigenin-Peroksidaz konjugatı (65 μL / 5 cm²) ekleyin ve nemlendirilmiş bir kapta 30 dakika boyunca inkübe edin.
    16. PBS 4 x 2 dakika içinde yıkadıktan sonra, çalışma mukavemetli peroksidaz substratını hazırlayın ve fazla sıvıya hafifçe dokunun ve bölümün etrafına aspirasyon yapın.
    17. Bölümleri peroksidaz substratı (75 μL/5 cm²) ile örtün ve 5 dakika boyunca lekeleyin. Mikroskop altına bir slayt yerleştirin ve en uygun boyama süresini belirleyin.
    18. Slaytları bir boyama rafında damıtılmış suda (3 x 1 dakika) yıkayın.
    19. Slaytları 5 dakika boyunca damıtılmış suda inkübe edin.
    20. 2 dakika boyunca hematoksilin kullanarak karşı boyama.
    21. Kaydırağı 3 dakika boyunca akan musluk suyunun altına yerleştirin.
    22. Slaytı damıtılmış suda yıkayın.
    23. Kızakları cam kapakların altına monte edin, montaj ortamında kaymaları ve kurumaya bırakın.
    24. Bir ışık mikroskobu altında gözlemleyin.
  3. Apoptoz tespit kiti (Tahlil C)
    NOT: Üreticinin protokolünü izleyin ( bkz. Malzeme Tablosu).
    1. Coplin kavanozlarını hazırlayın.
    2. Doku bölümlerini balmumundan arındırın ve yeniden sulandırın (bkz. adım 1.3).
    3. Dokuyu Proteinaz K ile inkübe edin (37 ° C'de 15-30 dakika).
    4. Slaytları tekrar rafa yerleştirin ve PBS'de 2 kat durulayın.
    5. 50 μL 'TUNEL reaksiyon karışımı' ile örtün. Islak kağıt havluları kabın içine yerleştirin, plastik ambalajla örtün ve 37 ° C'de 60 dakika bekletin.
    6. PBS ile 3 kat durulayın.
    7. Slaytları kaba yerleştirin ve doku örneğinin etrafındaki alanı kurutun.
    8. Numuneye 50 μL Converter-AP ekleyin ve nemlendirilmiş bir kapta 37 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin.
    9. PBS'de 3 kat durulayın.
    10. 50-100 μL substrat çözeltisi ekleyin ve karanlıkta 10 dakika bekletin.
      NOT: Boyama işlemini ışık mikroskobu altında gözlemleyin.
    11. Slaytları PBS ile 3 kat durulayın.
    12. Kesitleri 2 dakika boyunca hematoksiline aktararak karşı leke yapın ve ardından 5 dakika boyunca akan musluk suyunda dikkatlice durulayın.
    13. Kızakları cam kapakların altına monte edinSulu bir montaj ortamında kaymaları ve kuruması için düz bırakın.
    14. Bir ışık mikroskobu altında gözlemleyin. Etkilenen (pozitif) hücreleri, midgut veya HPG'lerin her bir örneğinde ışık mikroskobu altında 70 ila 100 hücre sayarak değerlendirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Midgutta hücre ölümü tespiti
Ljubljana'daki Slovenya Tarım Enstitüsü'ndeki deneysel arı kovanından yeni ortaya çıkan işçi arılar (Apis mellifera carnica), bireysel olarak% 3 oksalik asit (OA) 23 ile muamele edildi. OA, arıcılıkta Varroa yıkıcı kontrolü için sıklıkla kullanılır. Tedaviden sonra, işçi arılar (her gruptan üç) buz üzerinde hareketsiz hale getirildi. Midgut diseke edildi ve% 10 formalin ile sabitlendi. Doku daha sonra bir dizi alkol çözeltisinde de...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Canlı organizmalarda, hücre ölümü apoptoz veya nekroz25 olarak tanımlanır ve otofaji26 eşlik edebilir. Apoptotik ve nekrotik hücreler arasındaki fark, apoptozun programlanmış hücre ölümünün bir şekli olması ve normal hücrelerde ortaya çıkması, nekrozun ise ölümcül koşullar (örneğin, kaza, hastalık) nedeniyle ortaya çıkmasıdır27,28. Apoptoz, TUNEL tekniğine dayanan tahlil kitleri kullanılarak tespit edilebilir (apopt...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarın çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Slovenya Araştırma Ajansı'nın P4-133 no'lu hibe desteğine minnetle teşekkür ediyorum.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
2-Propanol
ApopTag Peroksidaz kiti (ApopTag Peroksidaz Yerinde Apoptoz Tespiti)Sigma-AldrichS7100Test B, https://www.sigmaaldrich.com/SI/en/product/mm/s7100?gclid=CjwKCA
jw7vuUBhBUEiwAEdu2pPanI9SE
j81ZTl-nLHEoxXAv7ViKwPA_QRx
H7fciMRNcYwR7lbPQbhoCqcQQA
vD_BwE; S7101'de bulunan pozitif kontroller
DeadEnd Kolorimetrik TUNEL sistemini
Diseksiyon mikroskobu  (arı diseksiyonu için)Zeiss
Damıtılmış su
Gömme kaseti
EnVision Sistemi alkalin fosfataz kitiDako
Eosin Y ÇözeltisiSigma-Aldrichalkollü
Etanol%95 (veya daha az saf), %90, %80
Uzak montaj ortamı, suluDakomontaj ortamı
Düzleştirme masasıLeicaHI1220
Forseps  (arı diseksiyonu için)Güzel bilim araçları11294-00Standart # 4
Formalin%Formaldehit
HematoksilenSigma-Aldrich
HistoChoice Temizleme MaddesiSigma-Aldrichtemizleme maddesi
Hidrojen peroksidaz %
İnkübatörBioRad
Böcek pimleri ve nbsp; (arı diseksiyonu için)Entosphinx44594Böcek pimleri paslanmaz çelik ve beyaz, boyut 2
ISCDDK, AP (Yerinde Hücre Ölümü Tespit Kiti, Alkalin Fosfataz)Roche11684809910Tahlil C, https://www.sigmaaldrich.com/deepweb/assets/sigmaaldrich/product/documents/362/737/11684809910b
>> ul.pdf KHPO4
Lab saati
Işık mikroskobuLeica
Mikroskop slaytları Slaytlarınbulunduğu kutu, tozu önlemek için plastik bir sargı içinde korunmalıdır
MikrotomLeica
Modüler doku gömme istasyonuLeica
Na2HPO4
NaCl
Paraformaldehit %
ParaplastLeica
Pasteur pipetleri1,5 mL; 3 mL
PBS
Petri kabı ve nbsp; (arı diseksiyonu için)Yoğuşma silikonu ile doldurulmuş  (Ksantoprene L mavi ve Üniversal sıvı artı aktivatör)
Proteinaz KMerck21627
Ringers solüsyonu  (arı diseksiyonu için)7,5 g NaCL, 2,38 g Na2HPO4, 2,72 g KH2PO4, 1 L damıtılmış su
Makas  (arı diseksiyonu için)Güzel bilim aletleri1406-09, 14061-09Düz ve kavisli, 9 cm
Üniversal sıvı artı aktivatör  (arı diseksiyonu için)Kulzer
Saatçi' s forseps (arı diseksiyonu için)İnce bilim araçları91100-12
Su banyosuLeica
Suluboya fırçası2x
Xantoprene L mavi  (arı diseksiyonu için)Kulzer
kapsar Promega G7360 Tahlil A, https://worldwide.promega.com/products/cell-health-assays/apoptosis-assays/deadend-colorimetric-tunel-system/?catNum=G7360 10 34

Kaynaklar

  1. Ruttner, F. Naturgeschichte der Honigbienen. , Ehrenwirth. München. (1992).
  2. Jordan, R. Kleine Bienenkunde. Österreichischer Agrarverlag Wien München. , 41-45 (1964).
  3. Snodgrass, R. E. The Anatomy of the Honey Bee. The Hive and the Honey Bee. , Dadant and Sons. 111-113 (1975).
  4. Snodgrass, R. E. The Anatomy of the Honey Bee. , Cornell University Press. (2004).
  5. Hrassnigg, N., Crailsheim, K. Adaptation of hypopharyngeal gland development to the brood status of honeybee (Apis mellifera L.) colonies. Journal of Insect Physiology. 44 (10), 929-939 (1998).
  6. Smodiš Škerl, M. I., Gregorc, A. Characteristics of hypopharyngeal glands in honeybees (Apis mellifera carnica) from a nurse colony. Slovenian Veterinary Research. 52 (2), 67-74 (2015).
  7. Kubo, T. Change in the expression of hypopharyngeal-gland proteins of the worker honeybees (Apis mellifera L.) with age and/or role. Journal of Biochemistry. 119 (2), 291-295 (1996).
  8. Sammataro, D., Yoder, J. A. Honey bee colony health: Challenges and sustainable solutions. , Taylor & Francis Group. 302(2012).
  9. Crailsheim, K., Stolberg, E. Influence of diet, age and colony condition upon intestinal proteolytic activity and size of the hypopharyngeal glands in the honeybee (Apis mellifera L.). Journal of Insect Physiology. 35 (8), 595-602 (1998).
  10. Smodiš Škerl, M. I., Gregorc, A. Heat shock proteins and cell death in situ localisation in hypopharyngeal glands of honeybee (Apis mellifera carnica) workers after imidacloprid or coumaphos treatment. Apidologie. 41 (1), 73-86 (2010).
  11. Gregorc, A., Bowen, I. D. The histochemical characterisation of cell death in honeybee larvae midgut after treatment with Paenibacillus larvae, Amitraz and Oxytetracycline. Cell Biology International. 24 (5), 319-324 (2000).
  12. Higes, M., et al. Apoptosis in the pathogenesis of Nosema ceranae (Microsporidia: Nosematidae) in honey bees (Apis mellifera). Environmental Microbiology Reports. 5 (4), 530-536 (2013).
  13. Kurze, C., et al. Infection dynamics of Nosema ceranae in honey bee midgut and host cell apoptosis. Journal of Invertebrate Pathology. 154, 1-4 (2018).
  14. Johnson, R. M. Honey bee toxicology. Annual Review of Entomology. 60 (1), 415-434 (2005).
  15. Gashout, H. A., Guzman-Novoa, E., Goodwin, P. H. Synthetic and natural acaricides impair hygienic and foraging behaviors of honey bees. Apidologie. 51 (6), 1155-1165 (2020).
  16. McMenamin, A. J., Genersch, E. Honey bee colony losses and associated viruses. Current Opinion in Insect Science. 8, 121-129 (2015).
  17. Ramsey, S. D., et al. Varroa destructor feeds primarily on honey bee fat body tissue and not hemolymph. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 116 (5), 1792-1801 (2019).
  18. Requier, F., et al. Honey bee diet in intensive farmland habitats reveals an unexpectedly high flower richness and a major role of weeds. Ecological Applications. 25 (4), 881-890 (2015).
  19. Santos, C., Serrão, J. Histology of the ileum in bees (Hymenoptera, Apoidea). Brazilian Journal of Morphological Sciences. 23 (3), 405-413 (2006).
  20. Suwannapong, G., Saichon, C., Benbow, M. Histochemical comparison of the hypopharyngeal gland in Apis cerana Fabricius, 1793 workers and Apis mellifera Linnaeus, 1758 workers. Psyche: A Journal of Entomology. , (2010).
  21. Ceylan, A., Sevin, S., Özgenç, Ö Histomorphological and histochemical structure of the midgut and hindgut of the Caucasian honey bee (Apis mellifera caucasia). Turkish Journal of Veterinary and Animal Sciences. 43 (6), 747-753 (2019).
  22. Human, H., et al. Miscellaneous standard methods for Apis mellifera research. Journal of Apicultural Research. 52 (4), 1-53 (2013).
  23. Gregorc, A., Smodiš Škerl, M. I. Toxicological and immunohistochemical testing of honeybees after oxalic and rotenone treatments. Apidologie. 38 (3), 296-305 (2007).
  24. Carreck, N. L., et al. Standard methods for Apis mellifera anatomy and dissection. Journal of Apicultural Research. 52 (4), 1-40 (2013).
  25. Bowen, I. D., Bowen, S. M., Jones, A. H. Mitosis and apoptosis: Matters of Life and Death. , Chapman & Hall. London. (1998).
  26. Eisenberg-Lerner, A., et al. Life and death partners: apoptosis, autophagy and the cross-talk between them. Cell Death and Differentiation. 16 (7), 966-975 (2009).
  27. Bowen, I. D., Mullarkey, K., Morgan, S. M. Programmed cell death in the salivary gland of the blow fly Calliphora vomitoria. Microscopy Research Techniques. 34, 202-207 (1996).
  28. D'Arcy, M. S. Cell death: a review of the major forms of apoptosis, necrosis and autophagy. Cell Biology International. 43 (6), 582-592 (2019).
  29. Matylevitch, N. P., et al. Apoptosis and accidental cell death in cultured human keratinocytes after thermal injury. American Journal of Pathology. 153 (2), 567-577 (1998).
  30. Perry, S. W., Epstein, L. G., Gelbard, H. A. Simultaneous in situ detection of apoptosis and necrosis in monolayer cultures by TUNEL and trypan blue staining. BioTechniques. 22 (6), 1102-1106 (1997).
  31. Cuello-Carrion, F. D., Ciocca, D. Improved detection of apoptotic cells using a modified in situ TUNEL technique. Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 47 (6), 837-839 (1999).
  32. Gregorc, A., Bowen, I. D. Programmed cell death in the honeybee (Apis mellifera L.) larvae midgut. Cell Biology International. 21 (3), 151-158 (1997).
  33. Gregorc, A., Pogačnik, A., Bowen, I. D. Cell death in honey bee (Apis mellifera) larvae treated with oxalic or formic acid. Apidologie. 35 (5), 453-460 (2004).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Bal Ar s Histolojisimm nohistokimyasal Y ntemApoptoz TespitiNekroz De erlendirmesiOrta Ba rsak DiseksiyonuHipofaringeal BezlerHematoksilin Eozin BoyamaI k MikroskopisiPestisit Toksikolojisi
Bal Arısı Dokusunda Histolojinin Temelleri ve Hücre Ölümü Tespiti
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.