Yöntem makalesi

Neonatal Hipoksik İskemik Ensefalopatinin Sıçan Modeli Kullanılarak Serebral Yaralanmanın Erken Patolojik ve Manyetik Rezonans Tespiti

1K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/64183

⸱

28 Ekim 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, University of Oklahoma Health Sciences Center, 2Department of Chemistry, University of Prince Edward Island, 3Center for Neuroscience, University of Oklahoma Health Sciences Center, 4Oklahoma Medical Research Foundation

Bu makalede

Özet

Mevcut protokol, kaba morfoloji ve manyetik rezonans görüntüleme ile serebral dokudaki erken değişiklikleri tanımlamak için yenidoğan hipoksik-iskemik hasarının bir kemirgen modelini tanımlamaktadır. Bunun, geç yaralanmayı incelemek için kullanılabilen ancak tekrarlanabilir erken değişikliklerin değerlendirilmesine izin vermeyen mevcut modellere göre faydaları vardır.

Özet

Perinatal hipoksik-iskemik ensefalopati (HİE), yenidoğanları etkileyebilen, değişken uzun ve kısa vadeli nörogelişimsel sonuçlara yol açan akut bir hastalıktır. Erken teşhis, müdahaleden fayda görebilecek bebekleri belirlemek için kritik öneme sahiptir; Bununla birlikte, erken tanı büyük ölçüde klinik kriterlere dayanır. Hiçbir moleküler veya radyolojik test erken beyin hasarını tespit etmede umut vaat etmemiştir. Çalışmalar, manyetik rezonans görüntülemenin (MRG) hem kan akışında / iskemi hem de metabolik bozulmada değişiklikler gösterebileceğini göstermiştir. Bununla birlikte, hepsi yaralanmanın başlamasından sonra hastalığın ikincil fazını (>12 saat) değerlendirmek için kullanılmıştır. Erken tanı, uygun bebeklerde hızlı bir şekilde başlayan terapötik hipotermi için kritik öneme sahiptir ve şu anda doğumdan sonraki 6 saat içinde başlatılması önerilmektedir. Hipoksik-iskemik hasarın sıçan modeli 1981'de geliştirildi ve beyin perfüzyonu, serebral hasar belirteçleri ve morfolojideki değişiklikleri incelemek için doğrulanmış ve yaygın olarak kullanılmıştır. Bununla birlikte, öncelikle ilk iskemik hakaretten birkaç gün sonra yaralanmayı değerlendiren "geç model" olarak kullanılmıştır. Modelin, güvenilir ve tekrarlanabilir erken serebral değişiklikleri değerlendirmede zayıf duyarlılığa sahip olduğu bilinmektedir. Bu çalışmanın amacı, patolojik boyama ve serebral manyetik rezonans görüntüleme/manyetik rezonans spektroskopisi kullanarak HİE'nin erken brüt morfolojik ve radyolojik belirteçlerini incelemek için güvenilir bir model geliştirmektir.

Giriş

Hipoksik iskemik ensefalopati (HİE) yenidoğan bebeklerde çeşitli faktörlerden kaynaklanan yıkıcı bir durumdur1. Perinatal asfiksi ve/veya serebral kan akışının bozulması beyinde fokal veya global iskemik değişikliklere neden olabilir2. Görülme oranı 1.000 canlı doğumda yaklaşık 1.6'dır, ancak gelişmekte olan ülkelerde 1.000 canlı doğumda 12.1'e kadar çıkabilir3. Bu durum yüksek mortalite (%20-50) ile sonuçlanırken, hayatta kalanların %25'inin zeka geriliği, epilepsi veya serebral palsi gibi uzun süreli bir sinirsel sakatlıktan muzdarip olması muhtemeldir4. Hafif ila orta dereceli yaralanmalarda etkili olduğu kanıtlanmış tek terapötik müdahale, doğumdan sonraki 6 saat içinde başlatılması gereken terapötik hipotermidir 5,6,7,8,9. Bu, ikincil yaralanmaya yol açan metabolik değişikliklerin önlenmesine yardımcı olabilirken, hipotansiyon, trombositopeni, uzun süreli pıhtılaşma süresi, intrakraniyal kanama, ritim bozuklukları, yağ nekrozu ve serum elektrolit dengesizliği gibi yan etkiler için potansiyel olabilir 4,5. Bebeklerde HİE'nin erken teşhisi, kriterlerin öznel olması ve zamanla gelişen fizik muayene bulgularına büyük ölçüde dayanması nedeniyle genellikle zordur. Manyetik rezonans görüntüleme, yaralanmadan birkaç gün ila haftalar sonra yaralanmayı yansıtan değişiklikler gösterebilir. Bununla birlikte, T1 / T2 MRG'deki morfolojik değişiklikler, terapötik hipotermidenfayda görme olasılığı en yüksek olan bebek kategorisi olan orta dereceli ensefalopatinin üçte ikisine kadar normal olabilir. Son raporlara göre, manyetik rezonans spektroskopisi (MRS) yenidoğan HIE11 ile ilişkili erken değişiklikler gösterebilir. Ancak, bugüne kadar herhangi bir standardizasyon veya doğrulama yapılmamıştır.

Birçok araştırmacı, serebrovasküler yaralanma için potansiyel tanısal veya terapötik müdahaleleri değerlendirmek için hayvan modellerine güvenmektedir. Enfarktüs oluşturmak için en sık kullanılan yöntem kemirgenlerin orta serebral arterininbağlanmasıdır 12,13. Genellikle erişkin iskemik inmeyi incelemek için kullanılsa da, bu, insan yenidoğan hastalığına eşdeğer yaştaki yavruların küçük boyutu ve kırılganlığı nedeniyle yenidoğan kemirgenlerinde teknik olarak zordur. Ayrıca, HİE'de görülmesi muhtemel küresel serebral iskemik değişiklikleri temsil etmemektedir. Sıçanlarda tek taraflı karotis arter ligasyonunun Rice-Vanucci Model14'ü, 1980'lerden beri hipoksik-iskemik beyin hasarını incelemek için uygun maliyetli bir kemirgen modeli olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, erken serebrovasküler değişikliklerde büyük değişkenlik ve daha önceki deneylerde yüksek mortalite vardır. Çoğu çalışma, serebral yaralanmayı daha tutarlı olan uzun vadeli değişikliklerde (yani, 24 saatlik yaralanmadan sonra) bildirmektedir. Bu çalışma, HİE'nin bir sıçan modelinde erken (6 saat içinde) moleküler ve radyolojik değişiklikleri değerlendirmek için bir yaklaşım geliştirmeyi amaçladı. Protokol, erken (term yenidoğan eşdeğeri) yaşta iskemiyi sağlamak ve özellikle hipoksiye maruz kalma sırasında yavruların hayatta kalmasını artırmak için tasarlanmıştır. MRG/MRS, yaralanmadan sonraki 6 saat içinde değişen akış, serebral doku değişiklikleri ve metabolik değişikliklerin radyolojik kanıtlarını değerlendirmek için kullanıldı. Enfarktüs alanlarının brüt morfolojik değerlendirmesi de yapıldı. Tekrarlanabilirliğin daha fazla doğrulanması, deneylerin birden fazla litrede tekrarlanmasıyla gerçekleştirildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneysel prosedürler Oklahoma Tıbbi Araştırma Vakfı (OMRF) Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylandı (protokol IACUC #17-17). Bu çalışma için E14'teki gebe dişi Sprague-Dawley sıçan yavruları kullanıldı. Hayvanlar ticari bir kaynaktan elde edilmiştir (bkz.

1. Hayvan hazırlama

  1. Yavruların tesliminden önce hayvan tesisindeki hayvanları iklimlendirin.
  2. Tüm fareleri a12 h aydınlık / karanlık döngüde tutun ve standart ratchow ile besleyin.
  3. Yavruların tesliminden sonra, yavruları kendi barajlarında tutun. Deneyler için her iki cinsiyeti de kullanın.
  4. Doğum sonrası 10 yaşında (P10), yavruları sahte veya HİE gruplarına randomize edin.
    NOT: Deneysel zaman çizelgesi Şekil 1'de gösterilmiştir. Tüm deneyler aynı gün P10'da yapıldı.

2. Deneysel HİE grubu için karotis arter ligasyonu (CAL)

  1. Sıçan yavrularını bir ısıtma pedine yerleştirin.
  2. Kıstırma refleksi kaybolana kadar bir burun konisi kullanarak oksijende% 4 izofluran (0.6 LPM) ile anesteziyi başlatın. Anestezinin sürdürülmesi için gaz akışını% 0,5 -% 2'ye düşürün. Solunum dürtüsünü baskılamadan yavruların bilinçsiz olduğundan emin olun.
  3. Tanımlama için kuyruktaki yavruları işaretleyin ve dört uzuvlarının hepsinde bantla nazikçe tutun.
  4. Boyun bölgesini tıraş edin ve% 70 iyot-povidon solüsyon çubukları ile sterilize edin (Malzeme Tablosuna bakınız).
  5. #11 bıçak kullanarak, deriden 1 cm'lik orta hat boyun kesisi yapın. Sol karotis arter açığa çıkana kadar sol parotis bezini ve fasyayı dikkatlice inceleyin. Fasyadan kurtarmak için kanama durdurucular kullanarak damarı nazikçe harekete geçirin.
  6. Küçük bir kanama durdurucu kullanarak, damarın etrafından 0,5 cm aralıklarla dikkatlice iki adet 5-0 dikiş (bkz . malzeme tablosu) geçirin ve sıkıca bağlayın.
  7. Küçük bir makas kullanarak, kan akışının kesilmesini sağlamak için arteri iki dikiş arasında kesin. Cildi ve fasyayı 5-0 ipek dikişlerle kapatın (bkz.
  8. Dehidrasyonu önlemek için buprenorfini (800 μL steril normal salin içinde 10 ünite) intraperitoneal olarak ve 800 μL normal salin daha boynun arkasına deri altına enjekte edin.
    NOT: İşlem 10-12 dakika içinde tamamlanmalıdır.
  9. Yavruları barajlarıyla birlikte kafeslere geri koyun ve yavruların 1-2 saat uyanmasına ve iyileşmesine izin verin.

3. Kontrol grubu için sahte cerrahi prosedür

  1. Sıçan yavrularını bir ısıtma pedine yerleştirin.
  2. Kıstırma refleksi kaybolana kadar bir burun konisi kullanarak oksijende% 4 izofluran (0.6 LPM) ile anesteziyi başlatın. Anestezinin sürdürülmesi için gaz akışını% 0,5 -% 2'ye düşürün. Solunum dürtüsünü baskılamadan yavruların bilinçsiz olduğundan emin olun.
  3. Tanımlama için kuyruktaki yavruları işaretleyin ve dört uzuvlarının hepsinde bantla nazikçe tutun.
  4. Boyun bölgesini tıraş edin ve% 70 iyot-povidon solüsyonu çubukları ile sterilize edin.
  5. #11 bıçak kullanarak, deriden 1 cm'lik orta hat boyun kesisi yapın ve ardından 5-0 ipek dikişlerle kapatın.
  6. HI grubu ile aynı hidrasyon, analjezi ve postoperatif bakımı uygulayın (aşama 2.8-2.9).

4. Hem CAL hem de sahte gruplar için hipoksi maruziyeti

  1. Hipoksi gazı karışımının 6 LPM'lik (%8 oksijen, %92 azot) sürekli hava akışını sağlamak için hazne kapağına hortum takarak şeffaf pleksiglas hipoksi odasını (Malzeme Tablosuna bakınız) hazırlayın.
  2. Hazneye mavi bir emici ped yerleştirin ve hemen her iki gruptan sıçan yavrularını hazneye yerleştirin. Yavruların 45 dakika boyunca hipoksi odasında kalmasına izin verin.
  3. Odanın içinde 37 °C'ye ayarlanmış sıcaklığı korumak için hazneyi sürekli akan ılık su içeren bir su banyosuna daldırın.
  4. Yavruları, hipoksi odasına yerleştirilmeden önce 600 μL'lik gavaj yoluyla ve 45 dakikanın sonunda 600 μL'lik bir oral tuzlu su çözeltisi ile nemlendirin.
  5. Tüm yavruları barajlarıyla (deneysel ve sahte) kafeslere çıkarın ve küçük hayvan görüntüleme tesisinin yanındaki bir odada 2 saat iyileşmelerine izin verin.

5. Manyetik rezonans görüntüleme ve spektroskopi

  1. Karotis arter ligasyonunun bitiminden 4 saat sonra radyolojik ve metabolik belirteçleri tanımlamak ve değerlendirmek için MRG ve MRS yapın. Küçük hayvan görüntüleme tesisinde sürekli kardiyovasküler izleme ile anestezi altında prosedürü gerçekleştirin.
  2. Her hayvanı anestezi altına alın (% 1.5 izofluran ve% 0.7 L / dak oksijen ile) ve bir ısıtma yastığını kaplayan mavi emici bir ped üzerinde sırtüstü pozisyonda MR probuna yerleştirin (Malzeme Tablosuna bakınız). Karın pnömatik yastığı kullanarak hayvanların solunum hızını sürekli olarak izleyin (bkz. Malzeme Tablosu).
  3. Sinyal alıcısı olarak bir kafa yüzeyi bobini kullanın ve radyofrekans darbelerini dörtlü hacimli bir bobin aracılığıyla numuneye iletin (72 mm iç çap, Malzeme Tablosuna bakın).
  4. Daha önce yayınlanmış yöntemleri 15,16,17 izleyerek hem serebral kan akışındaki (CBF) değişiklikleri hem de su difüzyon sabitlerindeki (ADC) değişiklikleri değerlendirmek için MRG yapın. Beynin en çok etkilenen ve en az perfüze olan alanlarını belirlemek için MRI morfolojisi (T1 ve T2), difüzyon ve perfüzyon gerçekleştirin.
    NOT: Her gruptaki perfüzyon ve difüzyon (ADC) için ortalama değerler, bağlanan taraf ile kontrol tarafı (sağlam karotis arter tarafı) arasında karşılaştırılır.
  5. Daha önce yayınlanmış yöntemleri15,17 izleyerek MRS'yi gerçekleştirin ve Mathematica yazılımını kullanarak şirket içi kodlanmış bir program kullanarak analiz edin (bkz.
  6. Su zirvesine (4,78 ppm) göre kalibre ederek MR spektrumlarını milyonda parça (ppm) olarak ölçeklendirin. Başlıca beyin metabolik zirvelerini 2.02 ppm'de N-asetilaspartat (NAA), 3.22 ppm'de kolin (Cho), 3.02 ppm'de kreatin (Cr) ve 3.53 ppm'de miyo-inositol olarak tanımlayın.
    NOT: Metabolitlerin tepe alanı ölçümleri aşağıdaki oranları hesaplamak için kullanılır: NAA'dan Cho'ya (NAA/Cho), Cr'den Cho'ya (Cr/Cho) ve Myo-Ins'ten Cho'ya (Myo-Ins/Cho)15.

6. Serum ve beyin dokusu analizi

  1. Daha önce yayınlanmış yöntemlere göre karotis arter ligasyonu veya sahte prosedürü takiben 5.5 saatte kan örneklemesi yapın18.
  2. Yavruları tekrar %4 izofluran ile uyuşturun.
  3. Keskin bir # 11 bıçak kullanarak, abdominal bir kesi yapın, ardından kalbi ortaya çıkarmak için diyafram kesisi yapın.
  4. Daha önce tarif edildiği gibi kardiyak ponksiyon yoluyla kan örneklemesi yapın18. Kısaca, 1 mL'lik bir şırıngaya 32 G'lik bir iğneyi sağ kalp odasına sokun ve 1 mL kanı nazikçe aspire edin.
  5. Tam kanın pıhtılaşmasına izin verin, ardından 4 ° C'de 15 dakika boyunca 1.000 x g'da santrifüjleyin. Serum temiz mikrosantrifüj tüplerine ayrılır.
  6. Serebral patolojinin brüt değerlendirmesi için tüm yavru kafasının kafasını kesin ve ardından 2 dakika boyunca buza batırın.
  7. Kafatasının tabanından burun ucuna kadar sırt saçlı deride bir kesi yapın ve kafatası kemiklerini beynin etrafından soyun. Sağlam tüm beyni temiz bir Petri kabına alın.
  8. Beynin sağ tarafını toksik olmayan bir işaretleyici ile işaretleyin. Beyni, her iki yarım küre de görünecek şekilde sefalad yüzeyi yukarı bakacak şekilde konumlandırın. Buz gibi bir tıraş bıçağı kullanarak beyni koronal düzleme paralel dört eşit bölüme ayırın.
  9. Beyin bölümlerini, ışığa duyarlılığı önlemek için folyo kaplı bir Petri kabına 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC, Malzeme Tablosuna bakınız) çözeltisine daldırın ve 37 ° C'de 15 dakika inkübe edin.
    NOT: Enfarktüslü alanlar, kırmızı TTC lekesi olmayan beyaz alanlar olarak tanımlanmıştır.
  10. Enfarktüsler ince veya tespit edilmesi zorsa, abdominal insizyon ve torakotomiden sonra doğrudan sağ kalbe fosfat tamponlu salin içinde 0.5-1 mL TTC (% 1) enjekte edin ve yavrunun dekapitasyonundan önce 2 dakika perfüze edilmesine izin verin.
  11. Daha fazla analiz gerekiyorsa beyin dokusunu ve serumu -80 ° C'de saklayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

HİE sonrası erken serebral değişiklikleri üretmek ve değerlendirmek için mevcut protokolün uygulanması kolaydı ve P10'daki sıçan yavrularında hakaretten sonraki 6 saat içinde serebral hasarın brüt patolojik ve radyolojik olarak görüntülenmesine izin verdi. Deney planı Şekil 1'de

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Yenidoğan sıçan yavrularında bir araştırma protokolü, HİE'deki serebral hasarın erken belirteçlerini görselleştirmek ve analiz etmek için başarıyla tasarlanmıştır. Bugüne kadar, yenidoğan popülasyonunda erken serebral yaralanmayı tespit etmek için objektif değerlendirme araçları eksikliği vardır. HI yaralanmasından sonra, serebral oksidatif metabolizma bozukluğunun, geri dönüşü olmayan mitokondriyal fonksiyonun 19 başarısızlığından önce kısmen iyileşme potansiyeline sahip olduğu bir faz ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların hiçbiri için herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Oklahoma Tıbbi Araştırma Vakfı'nın veteriner personeline, hayvan bakım protokollerini değiştirme konusundaki uzmanlıkları ve yardımları için teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 0.9 Normal tuzlusu Fisher ScientificZ1376
2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC)Millipore SigmaT8877
Abdominal pnömatik yastıkSA Instruments, Inc., Stony Brook, NY
Su Geçirmez Nem Bariyerli Emici Alt Pedler, 58,4 x 91,4 cm, 680 mLFisher Scientific501060566
BD 30 G İğne ve şırıngaFisher BilimselKatalog No.14-826-10
Biospec 7.0 Tesla/30 cm yatay delikli mıknatıslı küçük hayvan görüntüleme sistemiBruker Biospin, Ettlingen, Almanya
BuprenorfinVeteriner hekimlik tarafından sağlanmıştır
Problu Kompakt TermometreFisher ScientificS01549
Gaz karışımı %92 nitrojen %8 oksijenAirgas
Kafa yüzey bobiniBruker BioSpin MRI Gmbh, Ettlingen, Almanya
İzofluran gazıVeteriner hekim tarafından sağlanmıştır
Isotemp Daldırma Sirkülatörü 2100Fisher ScientificDurdurulduBoru aracılığıyla sürekli akan su ile su banyosu odasına daldırılmış
Kurşun Halka Şişe AğırlıklarıVWR29700-060Kemirgen odasının su banyosuna batık kalmasını sağlamak için su banyosu ağırlıkları
Mathematica SoftwareWolfram Research, Champaign, IL, ABDsürüm 6.0
Pedialyte Elektrolit Çözeltisi, Hidrasyon İçeceği, 1 Litre, TatlandırılmamışPedialitCVS
Fosfat tamponlu salinden (DPBS, 1X) elde edilir, Dulbecco'nun formülüMillipore SigmaJ67670.
Plastik şeffaf kovaEski bir kemirgen muhafaza kafesi kullandık - bu iyi bir alternatif: Cambro 182615CW135 Camwear Gıda Saklama Kutusu, 18" X 26" X 15", Model #:182615CW135
Pleksiglas Kemirgen Kısıtlama OdasıPedialyte/CVS Veteriner tıbbı, kemirgenleri dizginlemek için kullanılan küçük bir oda sağladı.
Charles RiverStrain Code 400Hamile Sprague Dawley sıçanları
  Betadine SwabsticksFisher Scientific19-061617
Dörtlü hacim bobini (72 mm iç çap)Bruker BioSpin MRI Gmbh, Ettlingen, Almanya
Stoelting İpek SütürFisher ScientificKatalog No.10-000-656
Vicryl 5-0 sütürFisher Scientific 
APE14 Purdue Products'ta yaklaşık 6x4x4 inçNC1985424

Kaynaklar

  1. Douglas-Escobar, M., Weiss, M. D. Hypoxic-ischemic encephalopathy: A review for the clinician. JAMA Pediatrics. 169 (4), 397-403 (2015).
  2. Bano, S., Chaudhary, V., Garga, U. C. Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy: A radiological review. Journal of Pediatric Neurosciences. 12 (1), 1-6 (2017).
  3. Lee, A. C., et al. Intrapartum-related neonatal encephalopathy incidence and impairment at regional and global levels for 2010 with trends from. Pediatric Research. 74, 50-72 (2013).
  4. American College of Obstetricians and Gynecologists Task Force on Neonatal Encephalopathy. Executive summary: Neonatal encephalopathy and neurologic outcome, second edition. Report of the American College of Obstetricians and Gynecologists Task Force on Neonatal Encephalopathy. Obstetrics & Gynecology. 123 (4), 896-901 (2014).
  5. Jacobs, S. E., et al. Whole-body hypothermia for term and near-term newborns with hypoxic-ischemic encephalopathy: A randomized controlled trial. Archives of Pediatrics and Adolescent. 165 (8), 692-700 (2011).
  6. Drury, P. P., Gunn, E. R., Bennet, L., Gunn, A. J. Mechanisms of hypothermic neuroprotection. Clinics in Perinatology. 41 (1), 161-175 (2014).
  7. Higgins, R. D., et al. Hypothermia and other treatment options for neonatal encephalopathy: An executive summary of the Eunice Kennedy Shriver NICHD workshop. The Journal of Pediatrics. 159 (5), 851-858 (2011).
  8. Patel, S. D., et al. Therapeutic hypothermia and hypoxia-ischemia in the term-equivalent neonatal rat: characterization of a translational preclinical model. Pediatric Research. 78 (3), 264-271 (2015).
  9. Park, W. S., et al. Hypothermia augments neuroprotective activity of mesenchymal stem cells for neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy. PLoS One. 10 (3), 0120893(2015).
  10. Agut, T., et al. Early identification of brain injury in infants with hypoxic ischemic encephalopathy at high risk for severe impairments: Accuracy of MRI performed in the first days of life. BMC Pediatrics. 14, 177(2014).
  11. Guo, L., et al. Early identification of hypoxic-ischemic encephalopathy by combination of magnetic resonance (MR) imaging and proton MR spectroscopy. Experimental and Therapeutic Medicine. 12 (5), 2835-2842 (2016).
  12. Ashwal, S., Cole, D. J., Osborne, S., Osborne, T. N., Pearce, W. J. A new model of neonatal stroke: reversible middle cerebral artery occlusion in the rat pup. Pediatric neurology. 12 (3), 191-196 (1995).
  13. Larpthaveesarp, A., Gonzalez, F. F. Transient middle cerebral artery occlusion model of neonatal stroke in P10 rats. Journal of Visualized Experiments. (122), e54830(2017).
  14. Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat. Annals of Neurology. 9 (2), 131-141 (1981).
  15. Bozza, F. A., et al. Sepsis-associated encephalopathy: A magnetic resonance imaging and spectroscopy study. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 30 (2), 440-448 (2010).
  16. Garteiser, P., et al. Multiparametric assessment of the anti-glioma properties of OKN007 by magnetic resonance imaging. Journal of Magnetic Resonance Imaging. 31 (4), 796-806 (2010).
  17. Towner, R. A., et al. Anti-inflammatory agent, OKN-007, reverses long-term neuroinflammatory responses in a rat encephalopathy model as assessed by multi-parametric MRI: implications for aging-associated neuroinflammation. Geroscience. 41 (4), 483-494 (2019).
  18. Adeghe, A. J., Cohen, J. A better method for terminal bleeding of mice. Lab Animal. 20 (1), 70-72 (1986).
  19. Rodriguez, M., Valez, V., Cimarra, C., Blasina, F., Radi, R. Hypoxic-ischemic encephalopathy and mitochondrial dysfunction: Facts, unknowns, and challenges. Antioxiddants & Redox Signaling. 33 (4), 247-262 (2020).
  20. Vannucci, R. C., Towfighi, J. Experimental models of hypothermic circulatory arrest. Seminars in Pediatric Neurology. 6 (1), 48-54 (1999).
  21. Sarkar, S., Barks, J. D. Systemic complications and hypothermia. Seminars in Fetal and Neonatal Medicine. 15 (5), 270-275 (2010).
  22. Chiamulera, C., Terron, A., Reggiani, A., Cristofori, P. Qualitative and quantitative analysis of the progressive cerebral damage after middle cerebral artery occlusion in mice. Brain Research. 606 (2), 251-258 (1993).
  23. Hatfield, R. H., Mendelow, A. D., Perry, R. H., Alvarez, L. M., Modha, P. Triphenyltetrazolium chloride (TTC) as a marker for ischaemic changes in rat brain following permanent middle cerebral artery occlusion. Neuropathology and Applied Neurobiology. 17 (1), 61-67 (1991).
  24. Goldlust, E. J., Paczynski, R. P., He, Y. Y., Hsu, C. Y., Goldberg, M. P. Automated measurement of infarct size with scanned images of triphenyltetrazolium chloride-stained rat brains. Stroke. 27 (9), 1657-1662 (1996).
  25. Robertson, N. J., Thayyil, S., Cady, E. B., Raivich, G. Magnetic resonance spectroscopy biomarkers in term perinatal asphyxial encephalopathy: From neuropathological correlates to future clinical applications. Current Pediatric Reviews. 10 (1), 37-47 (2014).
  26. Gano, D., et al. Evolution of pattern of injury and quantitative MRI on days 1 and 3 in term newborns with hypoxic-ischemic encephalopathy. Pediatric Research. 74 (1), 82-87 (2013).
  27. da Silva, L. F., Hoefel Filho, J. R., Anes, M., Nunes, M. L. Prognostic value of 1H-MRS in neonatal encephalopathy. Pediatric Neurology. 34 (5), 360-366 (2006).
  28. van de Looij, Y., Chatagner, A., Huppi, P. S., Gruetter, R., Sizonenko, S. V. Longitudinal MR assessment of hypoxic ischemic injury in the immature rat brain. Magnetic Resonance in Medicine. 65 (2), 305-312 (2011).
  29. Shibasaki, J., et al. Changes in brain metabolite concentrations after neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy. Radiology. 288 (3), 840-848 (2018).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Magnetic Resonance ImagingEarly DiagnosisPathological StainingBrain PerfusionMagnetic Resonance SpectroscopyTherapeutic HypothermiaNeurodevelopmental Outcomes
Video yakında

İlgili makaleler