Method Article

Anti-Kanser Uygulamaları için In Vitro Src Kinaz Aktivitesini İnhibe Eden Metillenmiş Nano Yapılı Dipeptidlerin Geliştirilmesi ve Test Edilmesi

DOI:

10.3791/64256

⸱

November 30th, 2022

 ,  , 
1Biochemistry Department, College of Science, King Abdulaziz University, 2Independent Scholar, 3School of Health Sciences and Biomedical Engineering, Hebei University of Technology, 4School of Engineering, Saveetha University, 5Programa de Pós-graduação em Ciência e Engenharia dos Materiais, UFPI

In This Article

Retraction Notice

The article Developing and Testing Methylated Nano-Structured Dipeptides that Inhibit Src Kinase Activity In Vitro for Anti-Cancer Applications has been retracted by the journal due to authorship and reproducibility concerns.

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, anti-kanser uygulamaları için aselüler ve hücresel tahliller kullanarak Src kinaz enzim aktivitesini inhibe edebilen dipeptitlerin tasarlanması ve test edilmesi için bir protokol sunulmaktadır. Burada formüle edilen peptitler (W-RCH3, WCH3-R CH3 ve W-R(CH3)2), sırasıyla510 nM, 916 nM ve 1 μM'lik IC 50 değerleri ile Src kinazını inhibe etti.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, yeni bir anti-kanser tedavisi geliştirmek amacıyla, metillenmiş triptofan ve/veya metillenmiş arginin içeren ve Fmoc katı faz peptit sentezi kullanılarak üretilen yedi dipeptit tasarlandı. Src tirozin kinaz enziminin aşırı ekspresyonu, farklı kanserlerin gelişiminde rol oynamaktadır. Metillenmiş arginin (RCH3), dimetillenmiş arginin (R (CH3) 2) ve / veya metillenmiş triptofan (WCH3) kalıntıları gibi doğal olmayan amino asitler içeren dipeptitler daha önce Src kinaz'ı inhibe ettiği gösterilmiştir. Bu çalışmada, bu tür üç dipeptit, W-RCH3, WCH3-R CH3 ve W-R(CH3)2, aselüler deneyler kullanılarak test edildi ve sırasıyla510 nM, 916 nM ve 1 μM'lik IC 50 değerlerine (% 50 inhibisyonun meydana geldiği konsantrasyon) sahip olduğu bulundu. Bu değerler, önceki çalışmalarda sentezlenen döngüsel penta- ila nano-W-R peptitleri ([W-R]5-[W-R]9) için elde edilenlerle karşılaştırılabilirdi. Bununla birlikte, dipeptitlerin metillenmemiş versiyonları, Src kinaz'a karşı herhangi bir inhibitör aktivite göstermedi. Bu dipeptitlerin tümü (50 μM), lösemi (CCRF-CEM), meme adenokarsinomu (MDA-MB-231) ve yumurtalık adenokarsinomu (SK-OV-3) hücre hatları dahil olmak üzere üç farklı kanser hücre hattı ile 72 saate kadar inkübasyondan sonra herhangi bir sitotoksisite göstermedi, bu da peptitlerin hücre zarı boyunca sınırlı geçirgenliğini gösterir. Bu nedenle, bir peptit taşıyıcısı veya ek peptit işlevselleştirmesi gibi antikanser uygulamaları için bu peptitlerin geçirgenliğini iyileştirmek için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır. Özetle, bu çalışma, Src kinaz aktivitesini inhibe eden peptitleri sentezlemek ve test etmek için bir protokol sağlar ve bu nedenle aselüler ve hücresel tahliller kullanılarak gösterildiği gibi umut verici antikanser yeteneğine sahiptir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kanser, normal hücrelerin anormal büyümesinden kaynaklanır ve dünyadaki en ölümcül hastalıklardan biridir. Bu anormal hücreler metastaz adı verilen bir süreçle vücuttaki farklı organlara yayılır. En sık görülen kanser türü, 2020 yılında 2,26 milyon kişide meydana gelen meme kanseridir. Ayrıca, 2020 yılında akciğer kanserine bağlı yaklaşık 1,80 milyon ölüm gerçekleşti1. Dünya Sağlık Örgütü'ne göre 2020 yılında yaklaşık 10 milyon kişi kanserden hayatını kaybetti2. Kanser hücreleri, protein tirozin kinazlar (PTK'lar) gibi belirli enzimleri aşırı eksprese etmeleri bakımından normal hücrelerden farklıdır. Ulusal Kanser Enstitüsü, kinazları diğer proteinleri veya şekerleri fosforile edebilen enzimler olarak tanımlar3

figure-introduction-1

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Peptitlerin sentezi

NOT: W-R sentezi temsili bir örnek olarak tanımlanmıştır (Şekil 2).

  1. 566 mg (0.3 mmol) H-Arg (Pbf) -2-klorotriril reçinesini tartın ve Mandal ve ark.20 tarafından kullanılan prosedüre göre peptit sentez kabına ekleyin (Malzeme Tablosuna bakınız). İyi bilinen katı faz peptit sentezi (SPPS) stratejisini kullanarak peptit sentezi gerçekleştirin21.
    NOT: Doğal olmayan amino asitler içeren metillenmiş veya dimetillenmiş dipeptitler, bir rink amid reçinesi (0.3 mmol / g yükleme kapasitesi) üzerine monte edilirken, doğal amino asitler içeren dipeptitler, H-Arg (Pbf) -2-klorotriril reçinesi (0.3 mmol / g yükleme kapasitesi) gibi ilk amino asidin bağlı olduğu bir reçine üzerinde birleştirildi. Daha da önemlisi, pist amid reçinesi, bir C-terminali NH2 ile kaplanmış bir peptit üretir.
  2. Kuru reçineyi, peptit kabına bağlı nitrojen gazı basıncı altında 5 mL N, N-dimetilformamid (DMF) içinde 1 saat şişirin.
    NOT: Tüm sentez işlemini bir çeker ocakta gerçekleştirin. Deney boyunca gözlük, eldiven ve laboratuvar önlüğü giyilmelidir. Kimyasal reaktif ekleme adımlarını takip etmek için bir zamanlayıcı da gereklidir.
  3. Sentez işlemi boyunca peptit sentez kabına bağlı nitrojen gazı basıncını kullanarak fazla DMF'yi çıkarın.
  4. Birleştirme reaktifleri olarak 473.9 mg Fmoc-trp(Boc)-OH (0.9 mmol) ve 341 mg 2- (1H-Benzotriazol-1-il) -1,1,3,3-tetrametiluronyum heksaflorofosfat (HBTU) (0.9 mmol) ağırlığındadır. Tozları bir test tüpüne ekleyin ve 5 mL kuru DMF'de çözün.
  5. Test tüpüne (adım 1.4) aktive edici ajan olarak 313.4 μL (1.8 mmol) N, N-Diizopropiletilamin (DIPEA) ekleyin ve tüpü sallayarak karıştırın.
  6. Test tüpünün içeriğini reçineye ekleyin ve reaksiyonun oda sıcaklığında nitrojen gazı altında 1 saat ilerlemesine izin verin. Ardından, nitrojen gazı basıncı kullanarak fazla DMF'yi boşaltın ve reçineyi 3x DMF ile yıkayın.
  7. Nitrojen gazı altında 20 dakika boyunca DMF'de (v/v) 5 mL piperidin kullanarak N-terminal Mmoc'un korumasını kaldırın. Reçineyi 3x DMF (3 x 5 mL) ile yıkayın.
  8. Reçineyi 5 mL diklorometan (DCM) ekleyerek kurutun ve 5 dakika nitrojen gazı altında tutun, ardından nitrojen gazı basıncı kullanarak DCM'yi boşaltın. Reçinenin kuruluğunu artırmak için nitrojen gazı altında 5 dakika boyunca 5 mL metanol ekleyin.
  9. Tüm yan zincirlerin korumasını kaldırmak ve dipeptiti reçineden ayırmak için 2,5 saat boyunca 10 mL taze hazırlanmış TFA/tiyoanisol/ditiyotreitol/anisol (90:3:5:2 v/v/w/v) bölünme kokteyli ekleyin.
    DİKKAT: TFA asidik ve tehlikeli olduğu için dekolte kokteylinin bir cam ölçüm silindirine eklenmesi gerekir; Kullanırken dikkatli olun.
  10. 2.5 saat sonra, nitrojen basıncı kullanarak reaksiyon çözeltisini peptit kabından yuvarlak tabanlı bir şişeye boşaltın. Peptiti çökeltmek için ham peptidi içeren yuvarlak tabanlı şişeye 250 mL soğuk dietil eter (Et2O) ekleyin.
  11. Çökelmiş peptidi, suyla bağlantılı bir yan kolu olan konik bir hunide bir filtre kağıdı kullanarak süzün (böylece filtrasyon su basıncına bağlı olarak gerçekleşir) ve eteri tamamen çıkarmak için çökeltiyi (peptitler) toplayın. Ham peptit 10 dakika içinde çökelir.
  12. Ham peptidi, bir gradyan sistemi kullanarak ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) sütununda (Malzeme Tablosuna bakınız) saflaştırın. 1 mL/dk akış hızında 30-60 dakika boyunca %0.1 TFA içeren suda %0.1 TFA içeren %0-100 asetonitril gradyanı kullanın.

figure-protocol-1
Şekil 2: W-R'nin katı faz peptit sentezi. Kısaltmalar: HBTU = 2- (1H-benzotriazol-1-il) -1,1,3,3-tetrametiluronyum hekzaflorofosfat; DİPEA = N,N-Diizopropiletilamin; TFA = trifloroasetik asit; DMF = dimetil formamid. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

2. Sentezlenen peptitlerin hücre toksisitesinin belirlenmesi

  1. 2.000 hücre / kuyu SK-OV-3 hücresi, 5.000 hücre / kuyu MDA-MB-231 hücresi veya 5 ×10 6 hücre / kuyu CCRF-CEM hücresi (toplam hacimde 100 μL / kuyu) 96 oyuklu bir mikroplakaya. Hücreleri% 5 CO2,% 95 hava içeren nemlendirilmiş bir atmosferde 37 ° C'de% 75 -% 80 birleşmeye ulaşana kadar inkübe edin.
    NOT: RPMI-16 ortamı, hem MDA-MB-231 hem de SK-OV-3 hücre hatları için CCRF-CEM hücrelerini ve Eagle'ın minimum temel ortamını (EMEM) kültürlemek için kullanılır. Her iki ortam da fetal sığır serumu (FBS) ve %1 penisilin/streptomisin (%0.9 NaCl'de 10.000 ünite/mL penisilin ve 10 mg/mL streptomisin) ile desteklenir. Deneye başlamadan önce tüm medyayı ve takviyeleri 30 dakika boyunca 37 ° C'lik bir su banyosuna yerleştirin. Deney bir biyogüvenlik başlığı içinde, eldiven ve laboratuvar önlüğü giyilerek yapılmalıdır.
  2. Ortamı bir pipet kullanarak aspire edin ve 100 μL 50 μM peptit veya 10 μM doksorubisin (Dox) pozitif kontrol olarak üç nükte halinde 96 oyuklu plakada kaplanmış üç farklı kanser hücresi türünü içeren kuyucuklara ekleyin. Plakayı 72 saat boyunca inkübatöre geri koyun (adım 2.1'de belirtildiği gibi aynı koşullar altında).
  3. 72 saat sonra, 96 oyuklu plakaya 20 μL 3- (4,5-dimetiltiyazol-2-il) -5- (3-karboksimetoksifenil) -2- (4-sülfofenil) -2H-tetrazolyum (MTS) ekleyin. Plakayı alüminyum folyo ile sarın ve plakayı nemlendirilmiş bir atmosferde 37 ° C'de 1-4 saat inkübe edin.
    NOT: MTS, canlı hücreleri (işlenmemiş veya peptitlerle muamele edilmiş) görselleştirmek için kullanılan bir boyadır, çünkü yalnızca canlı hücreler MTS tetrazoliyumunu 490 nm'de ölçülebilen renkli formazan boyasına dönüştürür.
  4. Formazan ürününün absorbansını bir mikroplaka okuyucuda 490 nm'de (A490) ölçün (bkz. Malzeme Tablosu). Deney için boş olarak MTS ile karıştırılmış ortamı dahil edin. Negatif kontroller olarak tek başına su (peptitler suda çözünür olduğundan) ve 0.1 N HCl (WCH3'ün çözünmesi için HCl gerektiğinden) kullanın.
  5. Bir elektronik tablo programı kullanarak aşağıdaki denklemi (Eşitlik 1) kullanarak hücre sağkalım yüzdesini ölçün (Malzeme Tablosuna bakınız). Prosedür, Mandal ve ark.20 tarafından kullanılanla aynıdır.
    figure-protocol-2Eşitlik (1)

3. c-Src kinaz aktivite deneyi

NOT: Src kinaz aktivite testi, Chhikara ve ark.22'nin prosedürüne göre üç kopya halinde ticari bir test kiti (Malzeme Tablosuna bakınız) kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Metillenmiş amino asidin tek başına kinaz üzerindeki etkisini ve başka bir metillenmiş veya metillenmemiş amino asit ile karşılaştırmak için kontrol olarak WCH3 ve RCH3'ü tek başına kullanın.

  1. 384 oyuklu düşük hacimli siyah bağlayıcı olmayan yüzey yuvarlak tabanlı bir mikroplakada, tahlil kitinin bir parçası olan kinaz tamponunda 0.7 nM His6-Src kinaz alanı içeren 2.5 μL reaksiyon kokteylini, 2.5 μL önceden seyreltilmiş peptitlere ekleyin. % 10 DMSO'da (4x hedef konsantrasyon). Üreticinin protokolünü izleyerek bir mikroplaka çalkalayıcı (10 rpm) kullanarak oda sıcaklığında 5 dakika inkübe edin.
    NOT: Reaksiyon kokteyli, kinaz tamponu (200 mM HEPES, pH 7.5), MgCl2 (16 mM), DMSO (% 4), EGTA (8 mM), 2-merkaptoetanol (43 mM) ve Brij-35'ten (% 0.04) oluşur. Bu deneyin kinaz reaksiyonunun optimal substratı (AEEEIYGEFEAKKKK) 'dir.
  2. Plakaya 5 μL ATP/substrat (40 μM/600 μM) kokteyli ekleyin ve oda sıcaklığında bir mikroplaka çalkalayıcı üzerinde 30 dakika inkübe edin.
  3. Bu arada, 8 nM ADP izleyici ve 10 μg/mL boya konjuge ADP2 antikoru içeren 1x ADP tespit karışımını ( Malzeme Tablosuna bakınız) durdurmak için hazırlayın ve kitten tampon B'yi (1x) tespit edin. 1x ADP tespit karışımından 10 μL ekleyerek kinaz reaksiyonunu (adım 3.2) durdurun ve oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin.
  4. 580 nm'de uyarma, 630 nm'de emisyon ve 10 nm bant genişliğine sahip bir mikroplaka okuyucu kullanarak floresan yoğunluğunu ölçün. Eq (2)'ye göre enzim inhibisyonu yüzdesini elde etmek için cihazdan bağıl floresan birimleri (RFU'lar) elde edin.
    figure-protocol-3Eşitlik (2)
  5. Şirketin web sitesinde listelenen IC50 değerini hesaplayın23.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W-RCH3, WCH3-R CH3, W-R(CH3)2,W CH3-R, WCH3-R(CH3)2 ve kontrol W-R peptitleri, Fmoc katı faz peptit sentezi kullanılarak sentezlendi (Şekil 3

figure-results-1

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Src kinazın inhibisyonu ve bunun sonucunda kanser hücrelerinin öldürülmesi için burada üretilen ve test edilen peptitler, doğal olmayan amino asitler olan metillenmiş triptofan ve / veya metillenmiş arginin içeriyordu. Dietil eter eklendikten sonra beyaz çökeltinin oluşumu, bu peptitlerin sentezinde kritik bir adımdır. Bununla birlikte, tüm sentetik peptitler bir çökelti oluşturamaz; bu nedenle, bir çökelti oluşmadığında bile, başarılı peptit sentezi, sıvı kromatografisi-kütle spektromet...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Suudi Arabistan'ın Cidde kentindeki Kral Abdülaziz Üniversitesi (KAU) Bilimsel Araştırma Dekanlığı'na (DSR) bu projeyi hibe no kapsamında finanse ettiği için teşekkür ederiz. (G: 031-130-1443).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1,4-DithiothreitolSigma-Aldrich10708984001Peptit sentezi
Katı faz sentezi için Aldrich fritli filtre hunisiSigma-AldrichZ283304Peptit sentez kabı
Alexa594 TracerBell Brook Labs, Madison, WI3013
AnisolSigma-Aldrich8014520500
CellTiter 96 AQueous One  Çözüm  Hücre Proliferasyon Testi reaktifleri PromegaG3582Hücre proliferasyon testi (MTS reaktifi)
Diklorometan,% 99.9, Ekstra KuruFishersciAC326850025
Fmoc-ADMA (Pbf) -OHSigma-Aldrich8521070001
Fmoc-Arg (Me, Pbf) -OHSigma-Aldrich8521050001
Fmoc-Arg (Pbf) -OHSigma-Aldrich8520670025
Fmoc-Trp (Boc) - OHSigma-Aldrich47561-25G-F
HPLC C18 sütunu Shimadzu  (RP-HPLC sistemi)su/asetonitril gradyanı
IRDye QC-1 söndürücüBell Brook Labs, Madison, WI3013
Mikroplaka okuyucu SpectraMax M2eMoleküler cihazlar
Microsoft ExcelMicrosoftelektronik tablo yazılımı
N,N-Diizopropilaminlamin (DIPEA)Sigma-Aldrich496219
N,N-Dimetilformamid, susuz, %99,8FishersciAA43997M1
Piperidin %20Sigma-Aldrich80645
Rink Amid reçinesi (100-200 ağ)Sigma-Aldrich8550010025
TiyoanisolSigma-Aldrich92358
Transcreener ADP2 FI TestiBell Brook Labs, Madison, WI3013c-Src kinaz aktivite test kiti

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sung, H., et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 71 (3), 209-249 (2021).
  2. Cancer. World Health Organization. , Available from: https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/cancer#:~:text=Cancer%20a%20leading%20cause,and%20rectum%20and%20prostate%20cancers (2022).
  3. Negi, P., Cheke, R. S., Patil, V. M. Recent advances in pharmacological diversification of Src family kinase inhibitors. Egyptian Journal of Medical Human Genetics. 22 (1), 52(2021).
  4. Huang, X. L., et al. Role of receptor tyrosine kinases mediated signal transduction pathways in tumor growth and angiogenesis-New insight and futuristic vision. International Journal of Biological Macromolecules. 180, 739-752 (2021).
  5. Mohammed, S., et al. Sublethal doxorubicin promotes migration and invasion of breast cancer cells: role of Src Family non-receptor tyrosine kinases. Breast Cancer Research. 23 (1), 76(2021).
  6. Biscardi, J. S., Ishizawar, R. C., Silva, C. M., Parsons, S. J. Tyrosine kinase signalling in breast cancer: epidermal growth factor receptor and c-Src interactions in breast cancer. Breast Cancer Research. 2 (3), 1-8 (2000).
  7. Ortiz, M. A., et al. Src family kinases, adaptor proteins and the actin cytoskeleton in epithelial-to-mesenchymal transition. Cell Communication and Signaling. 19 (1), 67(2021).
  8. Hill, Z. B., Perera, B. G., Andrews, S. S., Maly, D. J. Targeting diverse signaling interaction sites allows the rapid generation of bivalent kinase inhibitors. ACS Chemical Biology. 7 (3), 487-495 (2012).
  9. Wu, S., Fu, L. Tyrosine kinase inhibitors enhanced the efficacy of conventional chemotherapeutic agent in multidrug resistant cancer cells. Molecular Cancer. 17 (1), 25(2018).
  10. Ayala-Aguilera, C. C., et al. Small molecule kinase inhibitor drugs (1995-2021): Medical indication, pharmacology, and synthesis. Journal of Medicinal Chemistry. 65 (2), 1047-1131 (2022).
  11. Lyczek, A., et al. Mutation in Abl kinase with altered drug-binding kinetics indicates a novel mechanism of imatinib resistance. Proceedings of the National Academy of Sciences. 118 (46), 2111451118(2021).
  12. Musumeci, F., Schenone, S., Brullo, C., Botta, M. An update on dual Src/Abl inhibitors. Future Medicinal Chemistry. 4 (6), 799-822 (2012).
  13. Roskoski, R. Properties of FDA-approved small molecule protein kinase inhibitors: A 2020 update. Pharmacological Research. 152, 104609(2020).
  14. Cohen, P., Cross, D., Jänne, P. A. Kinase drug discovery 20 years after imatinib: Progress and future directions. Nature Reviews Drug Discovery. 20 (7), 551-569 (2021).
  15. Feng, S., Chen, J. K., Yu, H., Simon, J. A., Schreiber, S. L. Two binding orientations for peptides to the Src SH3 domain: development of a general model for SH3-ligand interactions. Science. 266 (5188), 1241-1247 (1994).
  16. Alexandropoulos, K., Cheng, G., Baltimore, D. Proline-rich sequences that bind to Src homology 3 domains with individual specificities. Proceedings of the National Academy of Sciences. 92 (8), 3110-3114 (1995).
  17. Feng, S., Kasahara, C., Rickles, R. J., Schreiber, S. L. Specific interactions outside the proline-rich core of two classes of Src homology 3 ligands. Proceedings of the National Academy of Sciences. 92 (26), 12408-12415 (1995).
  18. Polverini, E., Rangaraj, G., Libich, D. S., Boggs, J. M., Harauz, G. Binding of the proline-rich segment of myelin basic protein to SH3 domains: Spectroscopic, microarray, and modeling studies of ligand conformation and effects of posttranslational modifications. Biochemistry. 47 (1), 267-282 (2008).
  19. Weng, Z., et al. Structure-function analysis of SH3 domains: SH3 binding specificity altered by single amino acid substitutions. Molecular and Cellular Biology. 15 (10), 5627-5634 (1995).
  20. Mandal, D., Nasrolahi Shirazi, A., Parang, K. Cell-penetrating homochiral cyclic peptides as nuclear-targeting molecular transporters. Angewandte Chemie. 50 (41), 9633-9637 (2011).
  21. Hussein, W. M., Skwarczynski, M., Toth, I. Peptide Synthesis: Methods and Protocols. , Humana Press. (2020).
  22. Chhikara, B. S., et al. Phenylpyrazalopyrimidines as tyrosine kinase inhibitors: Synthesis, antiproliferative activity, and molecular simulations. Molecules. 25 (9), 2135(2020).
  23. TRANSCREENER ADP2 Fl Assay. BellBrook Labs. , Available from: https://www.bellbrooklabs.com/wp-content/uploads/2021/03/Tech-Manual-ADP2-Fl-v031621.pdf (2022).
  24. Sanner, M. F., et al. Cyclic peptides as protein kinase inhibitors: Structure-activity relationship and molecular modeling. Journal of Chemical Information and Modeling. 61 (6), 3015-3026 (2021).
  25. Nahhas, A. F., Nahhas, A. F., Webster, T. J. The physical properties of tripeptide stereocomplex nano-formations. Journal of Biomedical Nanotechnology. 16 (10), 1495-1503 (2020).
  26. Nahhas, A. F., Chang, R., Webster, T. J. Introducing unnatural amino acids-containing tripeptides as antimicrobial and anticancer agents. Journal of Biomedical Nanotechnology. 14 (5), 987-993 (2018).
  27. Deng, G., et al. Tryptophan-containing dipeptide derivatives as potent PPARγ antagonists: design, synthesis, biological evaluation, and molecular modeling. European Journal of Medicinal Chemistry. 43 (12), 2699-2716 (2008).
  28. Chetty, V. T., Sharma, A. M. Can PPARγ agonists have a role in the management of obesity-related hypertension. Vascular Pharmacology. 45 (1), 46-53 (2006).
  29. Skeggs, L. T., Kahn, J. R., Shumway, N. P. The preparation and function of the hypertensin-converting enzyme. Journal of Experimental Medicine. 103 (3), 295-299 (1956).
  30. Lunow, D., Kaiser, S., Brückner, S., Gotsch, A., Henle, T. Selective release of ACE-inhibiting tryptophan-containing dipeptides from food proteins by enzymatic hydrolysis. European Food Research and Technology. 237 (1), 27-37 (2013).
  31. Weber, J., Wilke-Mounts, S., Grell, E., Senior, A. E. Tryptophan fluorescence provides a direct probe of nucleotide binding in the noncatalytic sites of Escherichia coli F1-ATPase. The Journal of Biological Chemistry. 269 (15), 11261-11268 (1994).
  32. Iavarone, A. T., Patriksson, A., vander Spoel, D., Parks, J. H. Fluorescence probe of Trp-cage protein conformation in solution and in gas phase. Journal of the American Chemical Society. 129 (21), 6726-6735 (2007).
  33. Nongonierma, A. B., Fitzgerald, R. J. Inhibition of dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) by tryptophan containing dipeptides. Food & Function. 4 (12), 1843-1849 (2013).
  34. Bjelke, J. R., et al. Dipeptidyl peptidases 8 and 9: specificity and molecular characterization compared with dipeptidyl peptidase IV. The Biochemical Journal. 396 (2), 391-399 (2006).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Src Kinase InhibitionMethylated DipeptidesSolid Phase Peptide SynthesisAnti Cancer PeptidesTyrosine Kinase ActivityAcellular AssaysPeptide PermeabilityCancer Cell LinesPeptide FunctionalizationIC50 Measurement