Yöntem makalesi

Murin Fekal İzolasyonu ve Mikrobiyota Transplantasyonu

DOI:

10.3791/64310

⸱

26 Mayıs 2023

 ,  ,  , 
1Division of Clinical Pharmacology, Department of Medicine Vanderbilt University Medical Center and Department of Molecular Physiology and Biophysics, Vanderbilt University, 2Division of Pediatric Nephrology Department of Pediatrics, Vanderbilt University Medical Center, 3Department of Pathology, Microbiology, and Immunology, Vanderbilt University Medical Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Buradaki amaç, kardiyovasküler hastalıklarda dysbiosis mekanizmalarını araştırmak için bir protokolün ana hatlarını çizmektir. Bu yazıda, murin dışkı örneklerinin aseptik olarak nasıl toplanacağı ve nakledileceği, bağırsakların nasıl izole edileceği ve "Swiss-roll" yönteminin nasıl kullanılacağı, ardından gastrointestinal sistemdeki değişiklikleri sorgulamak için immün boyama teknikleri tartışılmaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bağırsak mikrobiyota dysbiosis, kardiyovasküler ve metabolik bozuklukların patofizyolojisinde rol oynar, ancak mekanizmaları iyi anlaşılmamıştır. Fekal mikrobiyota transplantasyonu (FMT), hastalık patofizyolojisinde total mikrobiyota veya izole türlerin doğrudan rolünü tanımlamak için değerli bir yaklaşımdır. Tekrarlayan Clostridium difficile enfeksiyonu olan hastalar için güvenli bir tedavi seçeneğidir. Preklinik çalışmalar, bağırsak mikrobiyotasını manipüle etmenin, dysbiosis ve hastalık arasındaki mekanik bağlantıyı incelemek için yararlı bir araç olduğunu göstermektedir. Fekal mikrobiyota transplantasyonu, kardiyometabolik hastalıkların yönetimi ve tedavisi için yeni bağırsak mikrobiyota hedefli terapötiklerin aydınlatılmasına yardımcı olabilir. Kemirgenlerde yüksek başarı oranına rağmen, transplantasyonla ilişkili translasyonel değişiklikler devam etmektedir. Buradaki amaç, bağırsak mikrobiyomunun deneysel kardiyovasküler hastalıklardaki etkilerini incelemede rehberlik etmektir. Bu çalışmada, murin çalışmalarında fekal mikrobiyotanın toplanması, işlenmesi, işlenmesi ve transplantasyonu için ayrıntılı bir protokol tanımlanmıştır. Toplama ve işleme adımları hem insan hem de kemirgen donörleri için açıklanmıştır. Son olarak, kardiyovasküler hastalıklarda ve ilgili bağırsak mikrobiyota mekanizmalarında bağırsaklara özgü morfoloji ve bütünlük değişikliklerini değerlendirmek için İsviçre yuvarlanma ve immün boyama tekniklerinin bir kombinasyonunu kullanmayı tanımladık.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kalp hastalığı ve inme de dahil olmak üzere kardiyometabolik bozukluklar, önde gelen küresel ölüm nedenleridir1. Fiziksel hareketsizlik, yetersiz beslenme, ilerleyen yaş ve genetik bu hastalıkların patofizyolojisini modüle etmektedir. Biriken kanıtlar, bağırsak mikrobiyotasının tip 2 diyabet2, obezite3 ve hipertansiyon4 dahil olmak üzere kardiyovasküler ve metabolik bozuklukları etkilediği kavramını desteklemektedir ve bu da bu hastalıklar için yeni terapötik yaklaşımların geliştirilmesinde bir anahtar tutabilir.

Mikrobiyotanın hastalıklara neden olduğu kesin mekanizmalar hala bilinmemektedir ve mevcut çalışmalar kısmen metodolojik farklılıklar nedeniyle oldukça değişkendir. Fekal mikrobiyota transplantasyonu (FMT), hastalık patofizyolojisinde total mikrobiyota veya izole türlerin doğrudan rolünü tanımlamak için değerli bir yaklaşımdır. FMT, hayvan çalışmalarında bir fenotipi indüklemek veya bastırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır. Örneğin, kalori alımı ve glikoz metabolizması, dışkı maddesinin hasta bir donörden sağlıklı bir alıcıya aktarılmasıyla modüle edilebilir 5,6. İnsanlarda, FMT'nin tekrarlayan Clostridium difficile enfeksiyonu olan hastalar için güvenli bir tedavi seçeneği olduğu gösterilmiştir7. Kardiyovasküler hastalık yönetiminde kullanımını destekleyen kanıtlar ortaya çıkmaktadır; Örneğin, yağsız ve metabolik sendromlu hastalardan FMT, insülin duyarlılığını artırır8. Bağırsak dysbiosis ayrıca hem insan hem de kemirgen çalışmalarında yüksek tansiyon ile ilişkilidir 9,10,11. Mikropsuz farelere yüksek tuzlu bir diyetle beslenen farelerden elde edilen FMT, alıcıları inflamasyona ve hipertansiyona yatkınlaştırır12.

Kemirgenlerde FMT başarısının yüksek oranına rağmen, translasyonel zorluklar devam etmektedir. Obezite ve metabolik sendromu tedavi etmek için FMT kullanan klinik çalışmalar, bu bozukluklar üzerinde minimal veya hiç etki göstermemektedir13,14,15. Bu nedenle, kardiyometabolik bozuklukların tedavisi için bağırsak mikrobiyotasını hedef alan ek terapötik yolları tanımlamak için daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır. Bağırsak mikrobiyotası ve kardiyovasküler hastalık ile ilgili mevcut kanıtların çoğu ilişkiseldir. Açıklanan protokol, hem hastalık hem de bağırsak mikrobiyotası arasındaki ilişkiyi göstermek ve bağırsak bağırsağının tüm bölümlerinin bütünlüğünü doğrudan değerlendirmek için FMT ve İsviçre yuvarlanma tekniğinin bir kombinasyonunun nasıl kullanılacağını tartışmaktadır16,17,18.

Bu yöntemin genel amacı, bağırsak mikrobiyomunun deneysel kardiyovasküler hastalıklardaki etkilerini incelemek için rehberlik sağlamaktır. Bu protokol, fizyolojik çeviriyi teşvik etmek ve bulguların titizliğini ve tekrarlanabilirliğini artırmak için deneysel tasarımda daha fazla ayrıntı ve önemli hususlar sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Vanderbilt Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi, bu makalede açıklanan tüm prosedürleri onayladı. Jackson Laboratuvarı'ndan satın alınan 3 aylıkken C57B1/6 erkek fareler, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na uygun olarak barındırıldı ve bakımı yapıldı.

1. İnsan dışkı örneklerinin toplanması, depolanması ve işlenmesi

  1. Denek klinikteyse steril bir kap kullanarak bir dışkı örneği toplayın. Dışkı numunelerini, işleme hazır olana kadar toplandıktan sonraki 36 saat içinde 4 °C'de soğutun. Alternatif olarak, özellikle evde kullanım için, ortam sıcaklığında kolay ve genişletilmiş DNA stabilitesi için piyasada bulunan bir araç kullanarak dışkı örnekleri toplayın.
  2. Biyogüvenlik seviyesindeki bir duman davlumbazını %10'luk bir ağartıcı çözeltisi veya Çevre Koruma Ajansı onaylı başka bir dezenfektan ile sterilize edin.
  3. Dışkıyı soğuk depolamadan çıkarın ve duman davlumbazına getirin; ~ 1 g alikot yapmak için tek kullanımlık bir spatula kullanın ve işleme için tamamen hazır olana kadar -80 ° C'lik bir dondurucuda saklayın.
  4. Tüm tek kullanımlık eşyaları biyolojik tehlike çöpüne atın. Tüm yüzeyleri (başlık ve işlemcinin dokunduğu tüm yüzeyler) ve kaputtan çıkarılan öğeleri dezenfekte edin.

2. Fare dışkı örneklerinin aseptik toplanması

NOT: Sterilize edilmiş aletler de dahil olmak üzere aseptik teknikler kullanın.

  1. CO2 boğulma ile fareyi ötenazi yapın. Farenin göğsüne ve yanlarına% 70 etanol püskürtün ve gastrointestinal sistemi açığa çıkarmak için cildi ve periton boşluğunu dikkatlice açın.
  2. Çekumu izole edin ve ikiye bölmek için steril cerrahi makas kullanın. Kısaca, çekumu açığa çıkarın ve ileumdan 0.5 cm proksimal olarak ve kolon ile birleşme noktasında distal olarak 0.5 cm kesin. İzole çekumu steril bir Petri kabına aktarın.
  3. Çekal içeriğini steril tüplere aktarmak için steril bir spatula kullanın ve alikotları -80 ° C'lik bir dondurucuda saklayın19.
    NOT: Bağırsaktaki bakterilerin çoğunluğu anaeroblar olduğundan, oksijene maruz kalmak, bir oda atmosferinde izolasyon prosedürü sırasında organizmalara zarar verebilir veya öldürebilir. Bu nedenle, dışkı örnekleri, bakterilerin yaşayabilirliğini korumak için anaerobik odalarda izole edilmelidir.

3. Fekal madde nakli

  1. Taze veya önceden dondurulmuş dışkı peletlerini steril salin içinde 1:20 (w:v) oranında ve vortekste homojenize edilene kadar tekrar askıya alın.
  2. Büyük partikül maddeleri gidermek için homojenatı 30 μm gözenekli naylon filtreden geçirin. 5 dakika boyunca 79 × g'da santrifüj yapın ve transplantasyon için kullanmak üzere süpernatantı toplayın.
  3. Ardışık 3 gün boyunca mikropsuz alıcı fare başına bulamacın 100 μL'sini oral gavaj, ardından 2 hafta boyunca her 3 günde bir gavaj. Alıcının kendi endemik mikrobiyotasını ortadan kaldırmak için ilk önce antibiyotiklerle tedavi edilmişlerse, bağırsak mikrobiyotasının mekanizmalarını incelemek için geleneksel fareleri kullanın. Örneğin, dışkı bulamacının gavajından önce oral gavaj ile alıcı farelere günde 5 gün boyunca seftriakson (400 mg / kg) uygulayın.
    NOT: Çalışmalar, kan basıncı20 de dahil olmak üzere kardiyovasküler değişiklikleri ortaya çıkarmak için bu tedavinin en az 2 haftasının gerekli olduğunu göstermektedir.
  4. Mikropsuz alıcı farelerin gnotobiyotik film izolatörlerinde tek barındırıldığından ve steril yiyecek ve su ile beslendiğinden emin olun.

4. Sistolik kan basıncı ölçümleri

NOT: Geleneksel olarak barındırılan 3 aylık C57Bl/6 farelerden FMT alan gnotobiyotik farelere, 2 hafta boyunca düşük doz anjiyotensin II (140 ng/kg/dak) infüzyonu için ozmotik mini pompalar (Alzet, model 2002) implante edildi. Kan basıncı kuyruk manşeti ile haftalık olarak izlendi. Ozmotik mini pompaların implante edilmesi için protokol daha önce bildirilmiştir21. Kuyruk manşeti aşağıda kısaca özetlendiği gibi yapılmıştır. Kuyruk manşeti gibi kan basıncını ölçmek için invaziv olmayan bir yöntem, gnotobiyotik farelerde FMT çalışmaları için uygundur. Kuyruk manşetinin nasıl yapılacağına dair ayrıntılı adımlar daha önce açıklanmıştır22.

  1. Kısaca, fareleri gnotobiyotik izolatörlerden alın ve kuyruk manşet makinesi platformunu ve fare tutucuyu önceden ısıtın.
  2. Bilinçli fareleri ısıtılmış platformdaki kısıtlamalara yerleştirin ve kuyruk manşeti pletismografisini kullanarak en az üç tur sistolik basınç ölçümü toplayın. Stresi azaltmak amacıyla fareleri kısıtlanmaları için eğitmek üzere uygun ölçüm günlerinden art arda 3 gün önce aşağıdaki adımları uygulayın.
    1. Fareyi yavaşça önceden ısıtılmış tutucuya yerleştirin ve kuyruğu dışarıda bırakın. Fareyi zorlamamak için sıkıştırmadan üstünü dikkatlice bantlayın.
    2. Farenin tutucuda durmasına izin verin; Alışmak için bir tabaka ile kaplı 3-5 dakika boyunca platforma yerleştirin.
  3. Her hayvan için ortalama bir sistolik basınç için tüm turlardan elde edilen ölçümlerin ortalaması.

5. FMT'nin kardiyovasküler değişikliklere göre değerlendirilmesi

  1. Kan basıncı ölçümünü takiben, fareleri ötenazi yapın ve bölüm 2'de açıklandığı gibi çekal içeriklerini aseptik olarak toplayın.
  2. Bağırsak mikrobiyotasının kardiyometabolik sağlıktaki rolünü incelemek için bağırsakları ve kalp, aort, karaciğer, mezenterik arterler ve böbrekler dahil olmak üzere diğer dokuları toplayın. Dokuları hasat etmek için, faredeki dokuyu bulun ve bunları çıkarmak için makas kullanın.
  3. FMT23'ten sonra bağırsak mikrobiyotasının engraftasyonunu doğrulamak için donör ve alıcı farelerden toplanan dışkı örnekleri / çekal içerikleri üzerinde metagenomik bir dizileme analizi yapın. Mikrobiyotanın başarılı kolonizasyonunun ilk kanıtı, donör ve alıcının mikrobiyotasının benzer olduğunu doğrulamaktır.
  4. Morfolojik ve hücresel ekspresyon değişikliklerini incelemek için immünoboyama ve histoloji ile birlikte hasat edilen bağırsak dokusu üzerinde Swiss-roll tekniğini (bakınız bölüm 6) kullanın24.

6. Bağırsak bağırsağı İsviçreli rulolar yapmak

  1. 1. Gün
    1. % 70 etanol ile püskürtülen uygun şekilde ötenazi yapılmış bir farede, fare bağırsağını anal taraftan (retroperitoneumda sabitlenmiş) mide tarafına disseke edin. İzole gastrointestinal sistemin tamamını fosfat tamponlu salin (PBS) içeren bir Petri kabına yerleştirin. Proksimal ucu mide ucundan yavaşça tutun ve çevresindeki yağ ve bağ dokusunu elle çıkarın.
    2. İnce bağırsağı (ekten) izole edin ve her uzunlukta Z tipi zikzak yapın. Daha sonra, daha önce tarif edildiği gibi duodenum, jejunum ve ileumu art arda elde etmek için kesin25. Bağırsağın çekumun altındaki bölümünü keserek kolonu izole edin.
    3. Duodenum, jejunum, ileum ve kolonu kesin.
    4. Bağırsağı yırtmamak için PBS'yi bir şırınga ve top uçlu bir iğne ile kullanarak bağırsağı yıkayın ve yıkayın.
    5. Bağırsağı filtre kağıdına koyun. Kağıdı bölümün adıyla (örneğin, duodenum) etiketleyin ve ardından proksimal için sağ üst köşede 'P' veya sağ alt köşede distal için 'D' olarak etiketleyin.
    6. Bağırsağı bilyalı uçlu makasla uzunlamasına kesin. Filtre kağıdındaki bağırsağı açın. Gerektiğinde daha fazla PBS ile yıkayın.
    7. Bağırsağı iki filtre kağıdı arasına sıkıştırın. Filtre kağıtlarını bağırsağın yakınındaki dört noktadan / köşeden zımbalayın.
    8. % 10 formalin nötr tampon çözeltisine (4.0 g sodyum fosfat, monobazik, 6.5 g sodyum fosfat, dibazik,% 37 formaldehit, 900 mL damıtılmış su) batırın. Gece boyunca oda sıcaklığında 5 rpm'de bir platform rocker kullanarak çalkalayın.
  2. 2. Gün
    1. Damıtılmış suda% 2 agaroz hazırlayın ve alüminyum folyo ile kaplı bir beher içinde bir karıştırma çubuğu ile ısıtın.
    2. Dokuları almak; Üst filtre kağıdını sıyırın. Bağırsağı proksimal taraftan yuvarlayın, böylece proksimal taraf önce içeri girer ve lümen slaytta da içeride olacak şekilde içe doğru yuvarlayın. Gerektiğinde 30 G iğne veya iki ile sabitleyin.
    3. Tek kullanımlık lisansüstü transfer pipetleri kullanarak 1 mL agarozu aspire edin ve dokulardaki hava kabarcıklarını önlerken agarozu düz bir yüzeyde haddelenmiş bir bağırsak bölümüne dökün.
    4. Agarozun soğumasına ve katılaşmasına izin verin. Doku bölümünün etrafındaki ekstra agarozu kesmek için bir tıraş bıçağı kullanın.
    5. Bağırsak bölümlerini doku işleme / gömme kasetlerine koyun (agaroz nedeniyle artan yüksekliği karşılamak için normal olanlardan daha büyük). 4 °C'de %70 etanol içine batırın.
    6. Parafine gömülü doku slaytları hazırlayın ve aşağıda belirtildiği gibi immün boyamaya devam edin.

7. Bağırsak bağırsak sisteminin immün boyaması

  1. Deparafinizasyon
    1. Bir rafta slaytlarla aşağıdaki banyolardan geçin: 3 dakika boyunca ksilen, 3 dakika boyunca tekrar taze ksilen, 3 dakika boyunca% 100 etanol (1: 1) içeren ksilen, 3 dakika boyunca% 95 etanol, 3 dakika boyunca% 70 etanol ve 3 dakika boyunca% 50 etanol.
    2. Soğuk akan musluk suyuyla hafifçe durulayın. Musluk suyu banyosunda saklayın.
  2. Antijen geri kazanımı
    1. Deparafinizasyonu takiben, slaytları 20 dakika boyunca 100 ° C'de antijen geri kazanım tamponu banyosunda (pH 6'da 0.01M trisodyum sitrat dihidrat ve% 0.05 Ara-20) bir rafta kaynatın.
    2. Soğuk musluk suyu altında çalıştırın.
  3. Boy -ama
    1. Slaytları banyodan çıkarın ve mendili altta ıslak laboratuvar mendilleri / kağıt havlular bulunan bir slayt kutusuna yüzü yukarı bakacak şekilde yerleştirin. Hidrofobik bir işaretleyici kalemle dokunun etrafına bir anahat çizin.
    2. Tris tamponlu salin (TBS) +% 0.025 Triton X-100'ü dokuya bırakın ve 5 dakika boyunca inkübe edin. Bu adımı yineleyin.
    3. Oda sıcaklığında 2 saat boyunca TBS +% 10 fetal sığır serumu (FBS) +% 1 sığır serum albümini (BSA) ile bloke edin. Slaytları yan taraflarına çevirin ve laboratuvar mendilindeki engelleme tamponunu çıkarın.
    4. Birincil antikor çözeltisi ekleyin ve en az 2 saat veya bir gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin. TBS +% 0.025 Triton X-100 ile hafifçe yıkayın, bölümün üzerine ~200 μL hafifçe pipetleyin.
    5. İkincil antikor çözeltisi ekleyin ve oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin. Slaytları TBS ile 3 x 5 dakika durulayın, adım 7.3.4'te olduğu gibi pipetle durulayın.
    6. Montaj ortamı ve bir kapak kayması ile monte edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yukarıda açıklanan adımlar Şekil 1'de özetlenmiştir. Fare çekal içeriği veya insan dışkısı, mikropsuz farelere (100 μL) gavage ile verilecek bir bulamaç hazırlamak için steril salin içinde yeniden askıya alınır, önce art arda 3 gün, sonra her 3 günde bir. Protokolün sonunda, kan basıncı kuyruk-manşet yöntemiyle ölçülür, fareler ötenazi yapılır ve bağırsak mikrobiyotasındaki değişikliklerin ve kardiyovasküler ve metabolik değişikliklerin değerlendirilmesi için dokular toplanır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bağırsak mikrobiyotasının kardiyovasküler ve metabolik hastalıklardaki nedensel rolünü incelemek için değerli bir yaklaşım, toplam mikrobiyotayı veya ilgilenilen türleri mikropsuz farelere aktarmaktır. Burada, hipertansif bozukluklarda bağırsak mikrobiyotasının rolünü incelemek için insanlardan dışkı örnekleri toplamak için protokolleri ve geleneksel olarak barındırılan fareleri mikropsuz farelere dönüştürüyoruz.

Farelerde, aerobik bir odada işlenmiş aseptik olarak toplanan çekal içeriklerini ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar tarafından finansal veya başka türlü hiçbir çıkar çatışması beyan edilmez.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Ulusal Translasyonel Bilimleri Geliştirme Merkezi'nden Vanderbilt Klinik ve Translasyonel Bilim Ödülü Hibesi UL1TR002243 (AK'ye) tarafından desteklenmiştir; Amerikan Kalp Derneği Hibe POST903428 (J.A.I.'ye); ve Ulusal Kalp, Akciğer ve Kan Enstitüsü Hibeleri K01HL13049, R03HL155041, R01HL144941 (AK'ye) ve NIH hibe 1P01HL116263 (V.K.'ye). Şekil 1 , Biorender kullanılarak oluşturulmuştur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Alexa Fluor 488 Tyamid SuperBoostThermoFisherB40932
Anaerobik odaCOY7150220
Apolipoprotein AINovus BiologicalsNBP2-52979
Arter Makası - Top UcuGüzel Bilim Araçları14086-09
Çamaşır suyu çözeltisiFisher Scientific14-412-53
Sığır Serum AlbüminiFisher ScientificB14
CD3 antikoruThermoFisher  14-0032-82
CD68 monoklonal antikorThermoFisher14-0681-82
SantrifüjFisher Scientific75-004-221
CODA yüksek verimli monitörKent Scientic CorporationCODA-HT8
Kriyojenik şişelerFisher Scientific10-500-26
Tek kullanımlık lisansüstü transfer pipetleriFisher Bilimsel137119AM
Tek kullanımlık şırıngalarFisher Scientific14-823-2A
EtanolFisher ScientificAA33361M1
Besleme İğnesiGüzel Bilim Araçları18061-38
Filtre kağıdı sayfasıFisher Scientific09-802
Formalin (%10)Fisher Scientific23-730-581
Yüksek tuzlu diyetTekladTD.03142
OMNIgene.GUTDNAgenotekOM-200 + ACP102
Ozmotik mini pompalarAlzet  MODEL 2002
PAP KalemMillipore SigmaZ377821-1EA
Petri kabıFisher ScientificAS4050
Pipet uçlarıFisher Scientific21-236-18C
PipetlerFisher Scientific14-388-100
Seril Fosfat tamponlu tuzlu suFisher ScientificAAJ61196AP
Akıllı spatulaFisher ScientificNC0133733
Dışkı toplama cihazıFisher Scientific50-203-7255
TBS TamponFisher ScientificR017R.0000
Triton X-100Millipore Sigma
9036-19-5
Varimix platform rockerFisher Scientific09047113Q
Vorteks karıştırıcıFisher Scientific02-215-41
KsilenFisher Scientific1330-20-7, 100-41-4

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Virani, S. S., et al. Heart disease and stroke statistics-2021 update: a report From the American Heart Association. Circulation. 143 (8), 254(2021).
  2. Wu, H., et al. The gut microbiota in prediabetes and diabetes: a population-based cross-sectional study. Cell Metabolism. 32 (3), 379-390 (2020).
  3. Crovesy, L., Masterson, D., Rosado, E. L. Profile of the gut microbiota of adults with obesity: a systematic review. European Journal of Clinical Nutrition. 74 (9), 1251-1262 (2020).
  4. Avery, E. G., et al. The gut microbiome in hypertension: recent advances and future perspectives. Circulation Research. 128 (7), 934-950 (2021).
  5. Perez-Matute, P., Iniguez, M., de Toro, M., Recio-Fernandez, E., Oteo, J. A. Autologous fecal transplantation from a lean state potentiates caloric restriction effects on body weight and adiposity in obese mice. Scientific Reports. 10 (1), 9388(2020).
  6. Zoll, J., et al. Fecal microbiota transplantation from high caloric-fed donors alters glucose metabolism in recipient mice, independently of adiposity or exercise status. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 319 (1), 203-216 (2020).
  7. Hvas, C. L., et al. Fecal microbiota transplantation is superior to fidaxomicin for treatment of recurrent Clostridium difficile infection. Gastroenterology. 156 (5), 1324-1332 (2019).
  8. Kootte, R. S., et al. Improvement of insulin sensitivity after lean donor feces in metabolic syndrome is driven by baseline intestinal microbiota composition. Cell Metabolism. 26 (4), 611-619 (2017).
  9. Li, J., et al. Gut microbiota dysbiosis contributes to the development of hypertension. Microbiome. 5 (1), 14(2017).
  10. Shi, H., et al. Restructuring the gut microbiota by intermittent fasting lowers blood pressure. Circulation Research. 128 (9), 1240-1254 (2021).
  11. Zhong, H. J., et al. Washed microbiota transplantation lowers blood pressure in patients with hypertension. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 11, 679624(2021).
  12. Ferguson, J. F., et al. High dietary salt-induced dendritic cell activation underlies microbial dysbiosis-associated hypertension. JCI Insight. 5 (13), 126241(2019).
  13. Yu, E. W., et al. Fecal microbiota transplantation for the improvement of metabolism in obesity: The FMT-TRIM double-blind placebo-controlled pilot trial. PLoS Medicine. 17 (3), 1003051(2020).
  14. Leong, K. S. W., et al. Effects of fecal microbiome transfer in adolescents with obesity: the gut bugs randomized controlled trial. JAMA Network Open. 3 (12), 2030415(2020).
  15. Zhang, Z., et al. Impact of fecal microbiota transplantation on obesity and metabolic syndrome-a systematic review. Nutrients. 11 (10), 2291(2019).
  16. Laubitz, D., et al. Dynamics of gut microbiota recovery after antibiotic exposure in young and old mice (a pilot study). Microorganisms. 9 (3), 647(2021).
  17. Xiao, L., et al. High-fat feeding rather than obesity drives taxonomical and functional changes in the gut microbiota in mice. Microbiome. 5 (1), 43(2017).
  18. Brunt, V. E., et al. Suppression of the gut microbiome ameliorates age-related arterial dysfunction and oxidative stress in mice. The Journal of Physiology. 597 (9), 2361-2378 (2019).
  19. Choo, J. M., Rogers, G. B. Gut microbiota transplantation for colonization of germ-free mice. STAR Protocols. 2 (3), 100610(2021).
  20. Kim, T. T., et al. Fecal transplant from resveratrol-fed donors improves glycaemia and cardiovascular features of the metabolic syndrome in mice. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 315 (4), 511-519 (2018).
  21. Lu, H., et al. Subcutaneous angiotensin II infusion using osmotic pumps induces aortic aneurysms in mice. Journal of Visualized Experiments. (103), e53191(2015).
  22. Wang, Y., Thatcher, S. E., Cassis, L. A. Measuring blood pressure using a noninvasive tail cuff method in mice. Methods in Molecular Biology. 1614, 69-73 (2017).
  23. Ishimwe, J. A., et al. The gut microbiota and short-chain fatty acids profile in postural orthostatic tachycardia syndrome. Frontiers in Physiology. 13, 879012(2022).
  24. Bialkowska, A. B., Ghaleb, A. M., Nandan, M. O., Yang, V. W. Improved Swiss-rolling technique for intestinal tissue preparation for immunohistochemical and immunofluorescent analyses. Journal of Visualized Experiments. (113), e54161(2016).
  25. Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine. Laboratory Animals. 15 (1), 57-59 (1981).
  26. Ishimwe, J. A., Garrett, M. R., Sasser, J. M. 1,3-Butanediol attenuates hypertension and suppresses kidney injury in female rats. American Journal of Physiology. Renal Physiology. 319 (1), 106-114 (2020).
  27. Bokoliya, S. C., Dorsett, Y., Panier, H., Zhou, Y. Procedures for fecal microbiota transplantation in murine microbiome studies. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 11, 711055(2021).
  28. Van Beusecum, J. P., Xiao, L., Barbaro, N. R., Patrick, D. M., Kirabo, A. Isolation and adoptive transfer of high salt treated antigen-presenting dendritic cells. Journal of Visualized Experiments. (145), e59124(2019).
  29. Harrison, D. G., Marvar, P. J., Titze, J. M. Vascular inflammatory cells in hypertension. Frontiers in Physiology. 3, 128(2012).
  30. Sylvester, M. A., et al. Splenocyte transfer from hypertensive donors eliminates premenopausal female protection from ANG II-induced hypertension. American Journal of Physiology. Renal Physiology. 322 (3), 245-257 (2022).
  31. Reikvam, D. H., et al. Depletion of murine intestinal microbiota: effects on gut mucosa and epithelial gene expression. PLoS One. 6 (3), 17996(2011).
  32. Le Roy, T., et al. Comparative evaluation of microbiota engraftment following fecal microbiota transfer in mice models: age, kinetic and microbial status matter. Frontiers in Microbiology. 9, 3289(2019).
  33. Sun, J., et al. Fecal microbiota transplantation alleviated Alzheimer's disease-like pathogenesis in APP/PS1 transgenic mice. Translation Psychiatry. 9 (1), 189(2019).
  34. Kim, M., et al. Critical role for the microbiota in CX(3)CR1(+) intestinal mononuclear phagocyte regulation of intestinal T cell responses. Immunity. 49 (3), 151-163 (2018).
  35. Hintze, K. J., et al. Broad scope method for creating humanized animal models for animal health and disease research through antibiotic treatment and human fecal transfer. Gut Microbes. 5 (2), 183-191 (2014).
  36. Wilde, E., et al. Tail-cuff technique and its influence on central blood pressure in the mouse. Journal of the American Heart Association. 6 (6), 005204(2017).
  37. Liu, X., et al. High-fiber diet mitigates maternal obesity-induced cognitive and social dysfunction in the offspring via gut-brain axis. Cell Metabolism. 33 (5), 923-938 (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Fekal Mikrobiyota TransplantasyonuBa rsak MikrobiyotasKardiyometabolik Hastal kSwiss Roll Y ntemiGerm Free FarelerSekal erikKuyruk Man eti PletismografisiBa rsak MorfolojisiBakteriyel Biyo e itlilik

İlgili makaleler