Burada, zebra balığı (Danio rerio), tükürük ve memeli eti tüketimine karşı alerjik reaksiyonları değerlendirerek alfa-Gal sendromu (AGS) ile ilgili alerjik reaksiyonları ve bağışıklık tepkilerini incelemek için bir model olarak kullanılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kene tükürüğü biyomoleküllerine yanıt olarak alerjik reaksiyonların incelenmesi için zebra balığı hayvan modeli
Bu makalede
Özet
Özet
Keneler, patojen bulaşarak hastalığa neden olan ve ısırıkları dünya çapında insan sağlığını etkileyen alerjik reaksiyonlarla ilişkili olabilecek eklembacaklı vektörlerdir. Bazı bireylerde, glikan Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R'ye (α-Gal) karşı yüksek seviyelerde immünoglobulin E antikorları kene ısırıkları ile indüklenmiştir. Kene tükürüğünde bulunan glikan α-Gal'i içeren glikoproteinler ve glikolipidlerin aracılık ettiği anafilaktik reaksiyonlar, alfa-Gal sendromu (AGS) veya memeli eti alerjisi ile ilişkilidir. Zebra balığı (Danio rerio), farklı patolojilerin incelenmesi için yaygın olarak kullanılan bir omurgalı modeli haline gelmiştir. Bu çalışmada, zebra balığı, α-Gal ve memeli eti tüketimine yanıt olarak alerjik reaksiyonların incelenmesi için bir model olarak kullanılmıştır, çünkü insanlar gibi bu glikanı sentezlemezler. Bu amaçla, Ixodes ricinus kene tükürüğü ve memeli eti tüketimine yanıt olarak davranış kalıpları ve hemorajik anafilaktik tip alerjik reaksiyonlar değerlendirildi. Bu deneysel yaklaşım, AGS de dahil olmak üzere kene kaynaklı alerjilerin incelenmesi için zebra balığı hayvan modelini destekleyen geçerli verilerin gizlenmesini sağlar.
Giriş
Keneler, hastalıklara neden olan patojenlerin vektörleridir ve aynı zamanda dünya çapında insanların ve hayvanların sağlığını etkileyen alerjik reaksiyonların nedenidir 1,2. Kene beslemesi sırasında, kene tükürüğündeki biyomoleküller, özellikle proteinler ve lipitler, konakçı savunmalarından kaçınarak bu ektoparazitlerin beslenmesini kolaylaştırır3. Glikan Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) modifikasyonlarına sahip bazı tükürük biyomolekülleri, kene ısırmasından sonra, sadece bazı bireylerde α-Gal Sendromu (AGS)4 olarak bilinen yüksek anti-α-Gal IgE antikor seviye....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan tüm yöntemler, Castilla La Mancha Üniversitesi Hayvan Deneyleri Etik Komitesi tarafından "İnaktive edilmiş M. bovis aşısına karşı bağışıklık tepkisinin değerlendirilmesi ve zebra balığı model numarası PR-2017-05-12'de M. marinum ile meydan okuma" çalışması kapsamında onaylanmıştır.
Keneler, kolonideki kenelerin temsili örneklerinin ortak kene patojenleri için PCR tarafından test edildiği laboratuvar kolonisinden elde edildiPatojenlerin yokluğunu doğrulamak için Çek Cumhuriyeti Bilimler Akademisi Biyoloji Merkezi (IP BC CAS), Çek Cumhuriyeti.Tüm hayvan deneyleri, Çek Cumhuriyeti Hayvan Koruma Kanunu No. 246....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Burada sunulan protokol, daha önce yayınlanmış deneylerin çeşitli yönlerine dayanmaktadır27,30 ve zebra balığı modelinin AGS çalışması ve α-Gal'e karşı bağışıklık tepkisi için kurulduğu ve doğrulandığı laboratuvarımızda gerçekleştirilen sonuçlar, çünkü hem insanlar hem de zebra balığı bu molekülü sentezlememektedir13. Bu model, kene tükürüğüne karşı konakçı yanıtının bir sonucu olarak çeşitli alerjik reaksiyonların karakterizasyonuna ve de.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Zebra balığı, bağışıklık tepkisinin moleküler mekanizmaları, patojen hastalıkları, yeni ilaç testleri ve enfeksiyonlara karşı aşılama ve korunma çalışmaları için çok uygun bir araç olan uygun maliyetli ve kullanımı kolay bir modeldir33,34,35. Zebra balıklarının davranışları üzerine yapılan çalışma yararlıdır, çünkü önceki çalışmalar bazı balık türlerinin stresli olduklarında tankın dibinde hareketsiz kaldığını, bu da yiyecek tük.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
SaBio grubu üyelerine, balık deney tesisi ile deneysel tasarımdaki işbirlikleri ve teknik yardımları için ve Juan Galcerán Sáez'e (IN-CSIC-UMH, İspanya) zebra balığı sağladığı için teşekkür ederiz. Bu çalışma Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación MCIN/AEI/10.13039/501100011033, İspanya ve AB-FEDER (Grant BIOGAL PID2020-116761GB-I00) tarafından desteklenmiştir. Marinela Contreras, Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades, İspanya tarafından IJC2020-042710-I hibesi ile finanse edilmektedir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1.5 mL tüp | VWR | 525-0990 | |
| Tüm Hazırlık DNA / RNA | Qiagen | 80284 | |
| Su sporları tesisleri | |||
| BCA Protein Test Kiti ve nbsp; | Thermo Fisher Scientific | 23225 | |
| Dissection seti | VWR | 631-1279 | |
| Köpek Maması - Kırmızı Klasik | Acana | ||
| ELISA tabakları-96 kuyulu | Thermo Fisher Scientific | 10547781 | |
| Gala1-3Gal-BSA 3 (α-Gal) | Dextra | NGP0203 | |
| iScript Ters Transkripsiyon Supermix | Supermix 1708840 | ||
| Mikrolitre şırıngalar | Hamilton | 7638-01 | |
| Plaka okuyucu | herhangi bir | ||
| Fosfat tamponlu tuzlu su | Sigma | P4417-50TAB | |
| pilokarpin hidroklorür ve nbsp; | Sigma | P6503 | |
| Pipet ucu P10 | VWR | 613-0364 | |
| Pipet ucu P1000 | VWR | 613-0359 | |
| Birinci sınıf gıda tropikal balık | DAPC | ||
| Sünger Hayvan Tutucu | Hurda köpükten yapılmıştır | ||
| Stereomikroskop | herhangi bir | ||
| Termal Döngüleyici, Gerçek Zamanlı PCR, | herhangi bir | ||
| Trikain metansülfonat (MS-222) | Sigma | E10521 |
Kaynaklar
- de la Fuente, J., Estrada-Pena, A., Venzal, J. M., Kocan, K. M., Sonenshine, D. E. Overview: Ticks as vectors of pathogens that cause disease in humans and animals. Frontiers in Bioscience: A Journal and Virtual Library. 13 (18), 6938-6946 (2008).
- de la Fuente, J., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
