Burada sunulan, farelerde sol koroner arterin kalıcı olarak bağlanması için cerrahi bir prosedürdür. Bu model, miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojiyi ve ilişkili inflamatuar yanıtı araştırmak için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Burada sunulan, farelerde sol koroner arterin kalıcı olarak bağlanması için cerrahi bir prosedürdür. Bu model, miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojiyi ve ilişkili inflamatuar yanıtı araştırmak için kullanılabilir.
İskemik kalp hastalığı ve ardından gelen miyokard enfarktüsü (MI), Amerika Birleşik Devletleri'nde ve dünyada mortalitenin önde gelen nedenlerinden biridir. Miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojik değişiklikleri araştırmak ve gelecekteki tedavileri tasarlamak için MI'nin araştırma modellerine ihtiyaç vardır. Farelerde sol koroner arterin (LCA) kalıcı ligasyonu, MI sonrası kardiyak fonksiyonu ve ventriküler yeniden şekillenmeyi araştırmak için popüler bir modeldir. Burada LCA'nın kalıcı ligasyonu ile daha az invaziv, güvenilir ve tekrarlanabilir bir cerrahi murin MI modeli tanımlanmıştır. Cerrahi modelimiz kolay geri dönüşümlü genel anestezi, trakeotomi gerektirmeyen endotrakeal entübasyon ve torakotomiden oluşmaktadır. MI'den sonraki 28. günde ekokardiyografi kalp fonksiyonlarını ve kalp yetmezliği parametrelerini ayırt edecektir. Kardiyak fibrozis derecesi Masson trikrom boyama ve kardiyak MRG ile değerlendirilebilir. Bu MI modeli, MI sonrası patofizyolojik ve immünolojik değişiklikleri incelemek için yararlıdır.
Kardiyovasküler hastalık, her yıl 17,9 milyon yaşam iddia eden ve küresel ölümlerin yüzde 31'ini oluşturan önemli bir halk sağlığı sorunudur1. En sık görülen kardiyovasküler anomali tipi koroner kalp hastalığıdır ve miyokard enfarktüsü (MI) koroner kalp hastalığının başlıca belirtilerinden biridir2. MI genellikle hassas bir plağın yırtılmasına bağlı olarak koroner arterin trombotik tıkanıklığındankaynaklanır 3. Ortaya çıkan iskemi, etkilenen miyokardda derin iyonik ve metabolik değişikliklere ve ayrıca sistolik fonksiyonda hızlı bir azalmaya neden olur. MI, kardiyomiyositlerin ölümüyle sonuçlanır, bu da ventriküler disfonksiyona ve kalp yetmezliğine yol açabilir4.
Hastalarda MI üzerine yapılan araştırmalar, MI5'li hastalardan elde edilen dokuların azlığı nedeniyle sınırlıdır. Bu nedenle, MI'nin murin modelleri hem hastalık mekanizmalarını incelemede hem de potansiyel terapötik hedeflerin geliştirilmesinde yararlıdır. MI'nin şu anda mevcut murin modelleri, geri dönüşümsüz iskemi modellerini (LCA ve ablasyon yöntemleri) ve reperfüzyon modellerini (iskemi / reperfüzyon, I / R) 6'yı içermektedir. Farelerde sol koroner arterin (LCA) kalıcı ligasyonu en çok kullanılan yöntemdir ve 7,8,9 hastalarında MI'nin patofizyolojisini ve immünolojisini taklit eder. Kalıcı MI, elektriksel hasar veya kriyoyaralanma içeren ablasyon yöntemleri ile de indüklenebilir. Ablasyon yöntemleri,10 numaralı kesin yerde eşit büyüklükte enfarktüs üretebilir. Öte yandan, skar oluşumu, enfarktüs morfolojisi ve moleküler sinyal mekanizmaları ablasyon yöntemleri arasında farklılık gösterebilir10,11. Murin I/R yöntemi, reperfüzyon tedavisinin klinik senaryosunu temsil ettiği için bir diğer önemli MI modelidir12. I / R modeli, değişken enfarktüs boyutu, ilk yaralanma yanıtlarını ayırt etmede zorluk ve reperfüzyon6 gibi zorluklarla ilişkilidir.
LCA ligasyon yöntemleri yaygın olarak kullanılmasına rağmen düşük sağkalım oranları ve postoperatif ağrı ile ilişkilidir13. Bu protokol, farelerin hazırlanması ve entübasyonunu, LCA ligasyonunu, ameliyat sonrası bakımı ve MI'nin doğrulanmasını içeren LCA ligasyonunun murin cerrahi MI modelini göstermektedir. Hayvan, orofarenksi bir laringoskop kullanarak aydınlatılarak entübe edilir, bu da prosedürü daha kolay, daha güvenli ve daha az travmatikhale getirir 15. Fare, prosedür boyunca ventilatör desteğinde ve izofluran anestezisi altında tutulur. Ayrıca, MI sonrası kalp fonksiyonlarını ve kardiyak fibrozisi değerlendirmek için sırasıyla ekokardiyografi ve Masson trikrom boyama yapılır. Genel olarak, bu yöntem, MI sonrası patofizyoloji ve inflamasyonu incelemek için kullanılabilecek güvenilir ve tekrarlanabilir bir cerrahi murin MI modeli sağlar.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu çalışma protokolü, Pittsburgh Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır. Bu deneyler için 24-30 g ağırlığındaki sekiz (sahte n = 4 ve MI n = 4) 1 yaşındaki dişi C57BL / 6J fareleri kullanıldı. Farelerin yaklaşık% 100'ü ve en az% 80'i sırasıyla ilk 24 saat ve 28 gün içinde hayatta kaldı.
1. Farelerin hazırlanması ve endotrakeal entübasyonu
2. Sol koroner arterin kalıcı ligasyonu
3. Ameliyat sonrası bakım
4. Ekokardiyografik Değerlendirme
NOT: MI'den sonraki 28. günde kalp yetmezliği parametrelerini değerlendirmek için ekokardiyografi yapıldı.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Şekil 1, sahte (Şekil 1A) ve MI (Şekil 1B) farelerinin ekokardiyografik değerlendirmesi sırasında temsili aktif EKG ve solunum sinyallerini göstermektedir. Ekokardiyografik veriler elde edilmeden önce aktif EKG ve solunum sinyallerinin doğrulanması önemlidir. Şekil 2, LCA ligasyonundan 28 gün sonra kardiyak fonksiyonel parametrelerin ekokardiyografik ölçümünü göstermektedir. Şekil 2, s...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
MI'nin murin modeli kardiyovasküler araştırma laboratuvarlarında popülerlik kazanmaktadır ve bu çalışma tekrarlanabilir ve klinik olarak ilgili bir MI modelini tanımlamaktadır. Bu protokol, LCA ligasyon sürecini çeşitli şekillerde geliştirir. Başlangıç olarak, ksilazin / ketamin veya sodyum pentobarbital14,15 gibi enjekte edilebilir ameliyat öncesi anesteziklerin kullanımından kaçınılır. Sadece izofluran anestezisi kullanıldı, bu da hayvan sağkalım oranlarını art...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların açıklayacağı herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüsü hibeleri (R01HL143967, R01HL142629, R01AG069399 ve R01DK129339), AHA Dönüşümsel Proje Ödülü (19TPA34910142), AHA Yenilikçi Proje Ödülü (19IPLOI34760566) ve ALA İnovasyon Projesi Ödülü (IA-629694) (PD'ye) tarafından desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 22 G kateter iğnesi | Exel INT | 26741 | Torasentez |
| 24 G kateter iğnesi | Exel INT | 26746 | Endotrakeal entübasyon |
| 4-0 naylon sütür | Covetrus | 29263 | Kasların ve cildin dikilmesi |
| 8-0 naylon sütür | S& T | 3192 | LAD Anestezik Buharlaştırıcıların Ligasyonu |
| Veteriner donanımlı | VE-6047 | Anestezik destek | |
| Hayvan fizyolojisi monitörü | Fujifilm | VEVO 3100 | Kalp atış hızını, solunum hızını ve vücut ısısını izleyin |
| Betadine çözeltisi | PBS hayvan sağlığı | 11205 | Antispetik |
| Buprenorfin | Covetrus | 55175 | Analjezik |
| Diseksiyon mikroskobu | OMANO | OM2300S-V7 | Dürbün |
| Elektrikli tıraş bıçağı | Wahl | 79300-1001M | Tıraş |
| Elektrodu jeli | Parker Laboratuvarları | W60698L | Elektriksel olarak iletken jel |
| Etanol | Decon Laboratuvarları | 22-032-601 | Dezenfektan |
| Forseps | FST | 11065-07 | Paslanmaz Çelik |
| Gazlı | Bez Kürü | CAR-6339-PK | Steril |
| Isı lambası | Satco | S4998 | Ameliyat sonrası bakım |
| Isıtma yastığı | Kent scientific | Surgi-M | Sıcaklık kontrolü |
| Sıcak Boncuk sterilizatörü | Çimlendirici 500 | 11503 | Cerrahi aletin sterilizasyonu |
| İzofluran | Covetrus | 29405 | Anestezi |
| Masson’ s trikrom boyama kiti | Thermoscientific | 87019 | Kardiyak Fibrozis |
| Ölçümü Mikro İğne Tutucu | FST | 12500-12 | Paslanmaz Çelik |
| Mikro makas | FST | 15000-02 | Paslanmaz Çelik |
| Oftalmik merhem | Dechra | Puralube Vet | Steril oküler kayganlaştırıcı |
| Tarama Jeli | Parker Laboratuvarları | Aquasonic 100 | Sulu ultrason iletim jeli |
| Makas | FST | 14060-11 | Paslanmaz Çelik |
| Küçük Hayvan Laringoskop | Penn-Century | Model LS-2-M | Orofarenksin aydınlatılması |
| Küçük hayvan ventilatörü | Harvard cihazı | 557058 | Ventilatör desteği |
| Cerrahi ışık | Cole parmer | 41723 | Aydınlatıcı Genişliği (inç): 7 |
| Vevo 3100 klinik öncesi görüntüleme platformu | Fujifilm | VEVO 3100 | Ekokardiyografi |
| VevoLAB yazılımı | Fujifilm | VevoLAB 3.2.6 | Ekokardiyografi veri analizi |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.