Mevcut protokol, floresan mikroküreciklerin (MS) ve kuantum noktalarının (QD) zaman içinde izlenebilen (izlenebilen) canlı balıkların miyokardına verimli ve istikrarlı bir şekilde iletilmesini sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Mevcut protokol, floresan mikroküreciklerin (MS) ve kuantum noktalarının (QD) zaman içinde izlenebilen (izlenebilen) canlı balıkların miyokardına verimli ve istikrarlı bir şekilde iletilmesini sağlar.
Zebra balığı, embriyonik sonrası gelişim ve rejenerasyon sırasında kardiyovasküler oluşumu ve işlevi incelemek için önemli bir model olduğunu kanıtlamıştır. Mevcut protokol, kardiyak lenfatik damarlara interstisyel sıvı ve kalıntı alımını incelemek için zebra balığı miyokardına floresan izleyiciler enjekte etmek için bir yöntemi açıklamaktadır. Bunu yapmak için, canlı zebra balığının miyokardına mikro küreler (200 nm çapında) ve kuantum noktaları (<10 nm çapında) sokulur ve bunlar ex vivo konfokal mikroskopi kullanılarak izlenebilir. Bu izleyiciler daha sonra miyokarddan kardiyak lenfatik damarlara geçişi takip etmek için birkaç saat boyunca aralıklı olarak izlenir. Kuantum noktaları, kalpten uzakta kardiyak lenfatik damarlar yoluyla taşınırken, daha büyük mikro küreler enjeksiyon bölgesinde üç haftadan fazla kalır. Bu intramiyokardiyal enjeksiyon yöntemi, kalbin hedeflenen bir bölgesine lokal olarak hücreleri, proteinleri veya ilgilenilen bileşikleri salmak için kapsüllenmiş MS veya hidrojellerin enjeksiyonu da dahil olmak üzere diğer kullanımlara genişletilebilir.
Lenfatik sistem, doku-sıvı dengesini korumak, yaralanma sonrası bağışıklık tepkisinin modülasyonu ve bağırsaktaki lipitlerin emilmesiiçin gereklidir 1. Biriken kanıtlar, lenfatik sistemin çeşitli hastalık ve gelişimsel bağlamlardaki geniş rollerini desteklemektedir. Bununla birlikte, lenfatik damarların görselleştirilmesi zor olabileceğinden ve işlevleri belirsiz olabileceğinden mekanik çalışmalar engellenmektedir. Erken görüntüleme teknikleri, lenfatik sistemin enjekte edilen izleyicileri interstisyel olarak absorbe etme ve daha sonra bunları lenfatik damar ağı boyunca taşıma konusundaki doğal yeteneğine dayan....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm hayvan prosedürleri, Weill Cornell Medicine'deki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (protokol 2020-0027) tarafından onaylandı ve uygun yönergeleri izledi. Aşağıdaki deneyler, yetişkinler için döllenmeden 14 ila 20 ay sonra ve yavrular için döllenmeden 35 gün sonra erkek ve dişi AB yabani tip zebra balığı ile gerçekleştirildi.
1. İğne çekme ve reaktif hazırlama
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Enjeksiyondan hemen sonra, miyokard duvarının küçük beyaz bir bölgesi görünür olmalıdır (Şekil 3F). Bu bölge, enjekte edilen MS ve QD'nin parlak floresan etiketlemesini gösterecektir (Şekil 4B, E). Ek olarak, prosedürü takiben perikardiyal boşluktaki herhangi bir QD ve MS'den kalbin dış yüzeyinde zayıf ve sporadik floresan punkta olabilir (Şekil 4B, E). Enjekte edilen izleyiciler zaman içinde izlene.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale, zebra balığının miyokardına ekzojen materyal eklemek için bir yöntemi tanımlamıştır. Bu teknik, homeostaz ve rejenerasyonda lenfatik fonksiyonu incelemek için miyokarda QD ve MS eklemek için geliştirilmiştir 2,18. Benzer bir yaklaşım, miyokard enfarktüsünden sonra lenfatiklerin varlığını ve işlevini araştırmak için farelerin miyokardına QD'yi sokmak için de kullanılmıştır19,20
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Balık bakımı için Adedeji Afolalu, Chaim Shapiro, Soji Hosten ve Chelsea Quaies'e (Weill Cornell Medicine), Caroline Pearson'a (Weill Cornell Medicine) makalenin eleştirel okuması için teşekkür ederiz. Jingli Cao (Weill Cornell Medicine), el yazmasının eleştirel okumasına ek olarak prosedürü kaydetmek için diseksiyon kapsamı ve kamera kullanımı için. Transgenik zebra balığı hatları için Nathan Lawson (Massachusetts Üniversitesi Tıp Fakültesi), Brant Weinstein (NICHD), Elke Ober (Kopenhag Üniversitesi) ve Stephan Schulte-Merker (WWU Münster). QD ve görüntüleme konusunda tavsiyeler için Daniel Castranova (NICHD) ve diseksiyon kapsamı vi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kristalizasyon kabı | VWR | 89000-288 | |
| Diseksiyon Kapsamı | Zeiss | 495010-0007-000 | |
| Balık tesisi suyu | N/A | N/A | RO suyu, 226uS iletkenliğe ve 7.35 pH değerine eklenmiş deniz tuzu ve sodyum bikarbonat ile |
| Dumont | 11252-20 | ||
| Cam Kılcal damarlar | WPI | 1B120-3 | filament yok |
| ImageJ | https://imagej.nih.gov/ij/download.html | ||
| İridektomi makası | İnce Bilimsel Araçlar | 15000-00 | |
| Mikroenjektör | Warner Instruments | 64-1735 | |
| Mikro yükleyici femtotips | Eppendorf | 5242 956.003 | |
| Mikropipet çektirme | Sutter Instrument | P-97 | Kapılı pedal girişi |
| Mikroküreler | Thermo Fisher Scientific | B200 | Mavi |
| PBS | Corning | 46-013-CM | |
| Kuantum noktaları (QD) | Thermo Fisher Scientific | Q21061MP | Qtracker705 vasküler etiket |
| Sünger | Oluklu (0,5 & kez; 2,5 cm) herhangi biri (1,5 & kez; 5 &kat; 3 cm) | ||
| Şırınga filtresi | Corning | 431220 | |
| Trikain | Sigma-Aldrich | A5040 | konsantrasyonu: 4 mg / mL |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında