Bu protokol, önceden deneyim veya eğitim gerektirmeyen ve çoğu moleküler biyoloji laboratuvarında kolayca erişilebilen malzemeler kullanılarak çok düşük bir maliyetle yürütülebilen sağlam bir fide aşılama yöntemini açıklamaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Ölçeklenebilir, esnek ve uygun maliyetli fide aşılama
Bu makalede
Özet
Özet
Erken evre fide aşılama, bitkilerdeki kök-sürgün ilişkilerini incelemek için moleküler genetikte popüler bir araç haline gelmiştir. Küçük model bitki Arabidopsis thaliana'nın erken aşamadaki fidelerinin aşılanması, fidelerinin büyüklüğü ve kırılganlığı nedeniyle teknik olarak zor ve zaman alıcıdır. Yayınlanmış yöntemlerin giderek artan bir koleksiyonu, bu tekniği değişen başarı oranları, zorluk ve ilişkili maliyetlerle tanımlamaktadır. Bu makalede, silikon elastomer karışımı kullanılarak şirket içi yeniden kullanılabilir bir aşılama cihazı yapmak için basit bir prosedür ve bu cihazın fide aşılama için nasıl kullanılacağı açıklanmaktadır. Bu yayın sırasında, her bir yeniden kullanılabilir aşılama cihazı, üretilecek sarf malzemesinde sadece 0,47 $ 'a mal oluyor. Bu yöntemi kullanarak, yeni başlayanlar ilk başarılı aşılanmış fidelerini baştan sona 3 haftadan daha kısa bir sürede alabilirler. Bu son derece erişilebilir prosedür, bitki moleküler genetik laboratuvarlarının fide aşılamasını deneysel süreçlerinin normal bir parçası olarak kurmalarına izin verecektir. Kullanıcıların bu aşılama cihazlarının oluşturulmasında ve tasarımında sahip oldukları tam kontrol nedeniyle, bu teknik istenirse domates veya tütün gibi daha büyük bitkilerde kullanım için kolayca ayarlanabilir.
Giriş
Aşılama, MÖ 500 yılına kadar yerleşik bir tarım uygulaması haline gelen eski bir bahçecilik tekniğidir1. Verimi artırmak için farklı bitki çeşitlerini aşılamak, bu tekniğin ilk kullanımıydı ve bugün bu amaçla kullanılmaya devam ediyor. Son on yılda, aşılama, moleküler biyologların bitkilerde uzun mesafeli sinyalleşmeyi incelemeleri için bir araç olarak giderek artan miktarda dikkat çekmiştir 2,3,4,5. Yetişkin bitkileri aşılamak nispeten kolay olsa da, çimlenmeden hemen sonra bitkileri aşılamak zordur. Buna rağmen, baz....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Cihaz hazırlama
- Silikon elastomer çözeltisini kare bir Petri kabına (100 mm x 100 mm) dökerek silikon aşılama cihazını yapın. Üreticinin yönergelerini izleyerek 15 mL elastomer çözeltisi hazırlayın.
NOT: Silikon elastomer kitleri tipik olarak silikon bazlı bir sıvı ve birlikte karıştırıldığında silikonun katılaşmasına izin veren bir kürleme maddesi içerir. - Kare Petri kabını, birbirinden eşit uzaklıkta dört düz 29 G tel parçası yerleştirerek hazırlayın (Şekil 1A). Telin kalıbın tabanıyla aynı hizada durduğundan emin olun. Teli tamamen düzleştirmek için, ağır ve düz bir nesneyle (örneğin, metal bir boru rafı) s....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Aşılama şeridinin tasarımının çeşitli yönleri, en az miktarda teknik beceri gerektiren optimal aşılama koşullarını belirlemek için test edilmiştir (Tablo 1). Tüm greftleme çalışmaları, daha önce ideal bir aşılama ortamı olduğu bildirilen %0,5 sakkaroz MS besiyeri üzerinde tamamlandı11,12.
Şerit üzerinde çimlenme ile optimum fide büyümesi sağlanamaz
Silikon şeridin ilk yinelemesinde, teller silikon t.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Özet ve önem
Greft birliğinin oluşması, anaç ve filiz arasında doğrudan ve kesintisiz temas gerektiren başarılı aşılama için çok önemlidir. Arabidopsis gibi küçük bitkilerin fidelerinin minyatür boyutu ve kırılganlığı, bu gereksinimi karşılamayı teknik olarak zorlaştırmaktadır. Erken Arabidopsis fide aşılama yöntemlerinde geliştirilen bir teknik, greft bileşkesi10'u desteklemek için hem filiz hem de anacı kısa bir silikon boru tasmasına yerleştirmekti. Bu yönt.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Arabidopsis fidelerinin aşılanmasında ilk eğitim ve rehberlik için Javier Brumos'a teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 15 mL konik tüpler | VWR International Inc | 10026-076 | |
| ACETONE (HPLC & ACS Sertifikalı Solvent) 4 L | VWR | BJAH010-4 | |
| BactoAgar | Sigma | A1296-500g | |
| Dow SYLGARD 184 Silikon Kapsülleyici Şeffaf 0,5 kg Kit | Dow | 2646340 | |
| D-Sükroz (Moleküler Biyoloji), 1 kg | Fisher Scientific | BP220-1 | |
| Eppendorf Geçmeli Kapaklı Mikrosantrifüj Flex-Tüp Tüpleri (1,5 mL), 500'lük paket | Fisher Scientific | 20901-551 / 05-402 | |
| Fisherbrand Yüksek Hassasiyetli #4 Stil Neşter Saplı | Fisher Scientific | 12-000-164 | |
| Fisherbrand Kurşunsuz Otoklav Bandı | Fisher Scientific | 15-901-111 | |
| Fisherbrand kare petri kapları | Fisher Scientific | FB0875711A | |
| Leica Zoom 2000 Stereo Mikroskop | Mikroskop Merkezi | L-Z2000 | |
| Mikro Gözenekli Bant | 3M | B0082A9FEM | |
| Murashige ve Skoog Bazal Orta | Sigma | M5519-10L | |
| Parafilm | Genesee Scientific | 16-101 | |
| potasyum hidroksit | VWR International Inc | AA13451-36 | |
| Redi-toprak Fiş ve Fide Karışımı | Sun Gro Bahçecilik | SUN239274728CFLP | |
| Scotts Osmocote Plus | Hummert International | 7630600 | |
| Cerrahi Tasarım No. 22 Karbon Neşter Bıçağı | Fisher Scientific | 22-079-697 | |
| Tween 20, 500 mL | Fisher Scientific | BP337500 | |
| CIMBIZ DUMONT STYL55 DUMOXEL POLS 110 MM | VWR | 102091-580 |
Kaynaklar
- Mudge, K., Janick, J., Scofield, S., Goldschmidt, E. E. A history of grafting. Horticultural Reviews. 35, 437-493 (2009).
- Holbrook, N. M., Shashidhar, V. R., James, R. A., Munns, R. Stomatal control in tomato with ABA-deficient roots: Response of grafted plants to soil dry....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
