Buradaki protokol, bir mikrodiyaliz sistemi kullanarak uyanık sıçanların hipokampüsünden hücre dışı sıvının ayrıntılı bir gerçek zamanlı dinamik örneklemesini sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Mikrodiyaliz Sistemi Kullanarak Bilinçli Sıçanlardan Hipokampal Hücre Dışı Sıvının Gerçek Zamanlı Dinamik Toplanması
Bu makalede
Özet
Özet
Çeşitli merkezi sinir sistemi (CNS) hastalıkları, hipokampal hücre dışı sıvının (HECF) bileşimindeki değişikliklerle ilişkilidir. Bununla birlikte, bilinçli sıçanlardan gerçek zamanlı olarak HECF elde etmedeki zorluk, CNS hastalığının ilerlemesinin değerlendirilmesini ve etnottıp tedavisinin etkinliğini uzun zamandır kısıtlamıştır. Cesaret verici bir şekilde, dinamik gözlem, kantitatif analiz ve küçük bir örnekleme boyutunun avantajları ile sürekli örnekleme için bir beyin mikrodiyaliz tekniği kullanılabilir. Bu, geleneksel bitkilerden ve canlı hayvanların beynindeki metabolitlerinden gelen bileşikler için hücre dışı sıvı içeriğindeki değişikliklerin izlenmesini sağlar. Bu nedenle bu çalışmanın amacı, Sprague Dawley (SD) sıçanlarının hipokampal bölgesine üç boyutlu bir beyin stereotaksik aparatı ile bir beyin omurilik sıvısı mikrodiyaliz probunu doğru bir şekilde implante etmek ve 20 kDa'dan büyük moleküler ağırlıkları kesmektir. Yüksek kaliteli HECF daha sonra bilinçli sıçanlardan, 2.87 nL / dak - 2.98 mL / dak arasında ayarlanabilir bir örnekleme hızına sahip bir mikrodiyaliz örnekleme kontrol sistemi kullanılarak elde edildi. Sonuç olarak, protokolümüz, CNS ile ilişkili hastalıkların patogenezini daha fazla araştırmak ve ilaç etkinliğini değerlendirmek için bize sınırsız olanaklar sağlayan mikrodiyaliz teknolojisinin yardımıyla uyanık sıçanlarda HECF elde etmek için etkili, hızlı ve dinamik bir yöntem sunmaktadır.
Giriş
Nörodejeneratif hastalık, travmatik beyin hasarı, yüksek irtifa hipoksisine bağlı beyin hasarı ve iskemik inme gibi yüksek morbiditeleri olan santral sinir sistemi (SSS) hastalıkları, dünya çapında artan mortalitenin önemli nedenleridir 1,2,3. Belirli beyin bölgelerindeki sitokinlerin ve protein değişikliklerinin gerçek zamanlı izlenmesi, CNS hastalıklarının ve ilaç tedavisinden sonra beyin farmakokinetik çalışmalarının tanısal doğruluğuna katkıda bulunur. Geleneksel bilimsel araştırmalar, belirli maddelerin tespiti ve farmakokinetik çalışmalar için beyin dokusu homojenatı ve....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Deneysel protokol, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Laboratuvar Hayvanlarının Kullanımı ve Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin gerekliliklerine uygun olarak yürütülmüştür (Kayıt numarası: 2021-11). Bu çalışmada erkek Sprague Dawley (SD) sıçanları (280 ± 20 g, 6-8 haftalık) kullanıldı.
1. Beyin mikrodiyaliz probu implantasyon cerrahisi
- Sıçan anestezisinin indüksiyonu ve bakımı için sırasıyla% 3 ve% 1.5 izofluran kullanın, 0.6 L / dak'da bir hava-oksijen karışımında bir hayvan anestezi sistemi kullanın. Sıçanların hem ağrı refleksi hem de kornea refleksi olmadan derin anestezi yapıldığından emi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Yukarıdaki deneysel protokol ve Tablo 1'de belirlenen örnekleme parametreleri takip edilerek, belirlenen örnekleme hızında su benzeri, renksiz ve şeffaf sıçan HECF elde edilmiştir (Şekil 1K). Elde edilen sıçan HECF'nin ozmotik basıncı 290-310 mOsm / L idi, bu da dolaylı olarak numunelerin kalitesini18,19 sağlayabilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
SSS hastalıklarının patogenezi hala tam olarak anlaşılamamıştır, bu da yeni tedavilerin ve ilaçların geliştirilmesini engellemektedir. Çalışmalar, çoğu MSS hastalığının hipokampal lezyonlarla yakından ilişkili olduğunu göstermiştir20,21,22. Önerilen beyin mikrodiyaliz tekniği, beynin belirli bölgelerini, özellikle de hipokampüsü hedefleyebilir ve bu da onu geleneksel HECF toplama yaklaşımından ayırır. Problar, yapay bir zarın pa.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82104533), Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bölümü (2021YJ0175) ve Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (2020M683273) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar, Tri-Angels D&H Trading Pte'de kıdemli bir ekipman mühendisi olan Bay Yuncheng Hong'a teşekkür etmek istiyor. Ltd. (Singapur) mikrodiyaliz tekniği için teknik hizmetler sağladığı için.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Havayla kurutma fırını | Suzhou Great Electronic Equipment Co., Ltd | GHG-9240A | |
| Hayvan anestezi sistemi | Rayward Life Technology Co., Ltd | R500IE | |
| Hayvan sıcaklığı koruyucu | Rayward Life Technology Co., Ltd | 69020 | |
| Yapay beyin omurilik sıvısı | Pekin leagene biyoteknoloji. Co., Ltd | CZ0522 | |
| Beyin mikrodiyaliz probu | CMA Mikrodiyaliz AB | T56518 | |
| Kateter | ve nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB | T56518 | |
| Covance infüzyon demeti | Instech Laboratories, Inc. | CIH95 | |
| Protez tabanı reçineleri | Şangay Eryi Zhang Jiang Biomaterials Co., Ltd | 190732 | |
| Elektrikli kraniyal matkap | Rayward Life Technology Co., Ltd | 78001 | |
| Elektrikli tıraş makinesi | Rayward Life Technology Co., Ltd | CP-5200 | |
| Hayvanlar için serbest dolaşım tankı | CMA Mikrodiyaliz AB | CMA120 | |
| Heparin sodyum enjeksiyonu | Chengdu Haitong Pharmaceutical Co., Ltd | H51021208 | |
| Iodophor | Sichuan Lekang İlaç Aksesuarları Co., Ltd | 202201 | |
| Isofluran | Rayward Life Technology Co., Ltd | R510-22 | |
| Mikrodiyaliz kateter stylet& | nbsp; CMA Mikrodiyaliz AB | 8011205 | |
| Mikrodiyaliz toplama tüpü | CMA Mikrodiyaliz AB | 7431100 | |
| Mikrodiyaliz kollektörü | CMA Mikrodiyaliz AB | CMA4004 | |
| Mikrodiyaliz fep tüpü | CMA Mikrodiyaliz AB | 3409501 | |
| Mikrodiyaliz in vitro stand | CMA Mikrodiyaliz AB | CMA130 | |
| Mikrodiyaliz mikroenjeksiyon pompası | CMA Mikrodiyaliz AB | 788130 | |
| Mikrodiyaliz şırıngası (1.0 mL) | CMA Mikrodiyaliz AB | 8309020 | |
| Mikrodiyaliz boru adaptörü | CMA Mikrodiyaliz AB | 3409500 | |
| Emilmeyen cerrahi sütürler | Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd | S19004 | |
| Oftalmik forseps | Rayward Life Technology Co., Ltd | F12016-15 | |
| Ozmometre | Lö ser | OM 807 | |
| Sodyum hyaluronat göz damlası | URSAPHARM Arzneimittel GmbH | H20150150 | |
| Stereotaksi cihazı | Rayward Life Technology Co., Ltd | 68025 | |
| Cerrahi makas | Rayward Life Technology Co., Ltd | S14014-15 | |
| Cerrahi makas | Shanghai Bingyu Akışkan teknolojisi Co., Ltd | BY-103 | |
| Şırınga iğnesi | CMA Mikrodiyaliz AB | T56518 | |
| Tripsin çözeltisi | Boster Biyolojik Teknoloji, Ltd. | ||
| Ultrasonik temizleyici | Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd | KMH1-240W8101 |
Kaynaklar
- Erkkinen, M. G., Kim, M. O., Geschwind, M. D. Clinical neurology and epidemiology of the major neurodegenerative diseases. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 10 (4), 033118(2018).
- Salehi, A., Zhang, J. H., Obenaus, A.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
