Kısmi Siyatik Sinir Ligasyonu: Yeni Tedavilerin Antinosiseptif Etkisini İncelemek için Kronik Nöropatik Ağrının Bir Fare Modeli

Kronik ağrı, dünya çapında önemli bir sağlık sorunudur ve Amerika Birleşik Devletleri'ndeki en pahalı sağlık sorunlarından biridir. Hem farmakolojik hem de farmakolojik olmayan modaliteler multidisipliner bir şekilde kullanıldığında kronik ağrı daha iyi yönetilir¹. Kronik ağrının yönetimi zordur ve bazı durumlarda ağrıyı yeterince tedavi etmez². Bu nedenle, kronik ağrı yönetimini iyileştirmek için yeni ve tamamlayıcı yöntemlere ihtiyaç vardır ve hayvan modelleri yenilikçi tedavileri araştırmak için çok önemlidir.

Kronik nöropatik ağrı, diyabet, enfeksiyonlar, sinir sıkışmaları veya otoimmün hastalıklar dahil olmak üzere somatosensoriyel sistemdeki lezyonlardan veya hastalıklardan kaynaklanır³. Nöropatik ağrı hem periferik hem de santral sensitizasyon mekanizmalarına dayanır ve sinirlerin lezyonundan kaynaklanır. Bu ağrı hem dokunma hem de termal olarak uyarılmış hiperaljezi ve allodinya, devam eden ağrı ve etkilenen ekstremitenin sıcaklığındaki değişiklikler ile karakterize edilebilir⁴. Mekanizmaları daha iyi anlamak ve yeni tedavileri ilerletmek için, kemirgenlerde nöropatik ağrının semptomlarını ve nedenlerini taklit etmek için çeşitli modeller geliştirilmiştir⁵. Örneğin, kemoterapötik ajan enjeksiyonları, spinal sinir ligasyonu (SNL), siyatik sinirin kronik daralma hasarı (CCI), pSNL, korunmuş sinir hasarı, siyatik sinir transeksiyonu ve siyatik sinir triseksiyonu⁶ ile nöropatik ağrı indüklenebilir. Özellikle, siyatik sinirin bağlanması, insanlarda gözlenen nöropatik ağrının, mekanik ve termal aşırı duyarlılık veya etkilenen ekstremitenin sıcaklığındaki değişiklikler, karmaşık bölgesel ağrı sendromunun (CRPS⁾ karakteristiği gibi birçok özelliğini yeniden üretir7. Bu nedenle, bu model CRPS veya kronik nöropatik ağrıya neden olan diğer sinir hasarı etkilerinin incelenmesi için çok uygundur. Model ilk olarak Seltzer tarafından 1990^{yılında geliştirilmiştir} 8 ve ağrı çalışmalarında yeni analjezik bileşikleri araştırmak veya kronik ağrının bilişsel etkilerini değerlendirmek için yaygın olarak kullanılmaktadır ^{9,10,11,12,13}. Model yüksek tekrarlanabilirlik sunar ve kısmi ligasyon periferik uyaranlara davranışsal tepkileri korur⁶.

Şu anda kullanılan modellerin çoğunda pSNL'de gözlenmeyen eksiklikler vardır. CCI modeli, daraltıcının sıkılığına bağlı olarak her hayvan arasında çok daha yüksek bir yaralanma değişkenliğine sahiptir ve ototomi, arka pençe basamaklarını değiştirerek modeli davranışsal analiz için uygun hale getirmez⁶. SNL modeli, sadece ileri teknik beceriler gerektirmekle kalmayıp aynı zamanda ciddi motor eksiklikleri riski taşıyan çok daha karmaşık ve daha uzun bir ameliyattır³. Bu eksiklikler pSNL modelinde görülmez. Tekrarlanabilirliğin kolaylığı, ameliyatın kısa sürmesi ve postoperatif olarak görülen motor defisit riskinin azalması, bu modeli periferik nöropatik ağrıyı incelemek için değerli kılmaktadır ^8,14. Bununla birlikte, kısmi ligasyon prosedürünün kendisi deneyciler arasında değişkenliğe sahip olabilir, bu da bağlanmış sinir liflerinin sayısında daha az tutarlılık sağlar. Bu nedenle, ameliyatın detaylarının sunulması, çalışmalar arasında tekrarlanabilirliği artırmak için çok önemlidir.

Kronik nöropatiyi indüklemek için, siyatik sinirin genişliğinin üçte birini bağlamak için 9-0 emilemeyen bir naylon sütür kullanılır. Ameliyattan sonra, termal ve mekanik uyaranlara verilen yanıtlar abartılır, ameliyat sonrası 1. günde başlar ve 50 günden fazla sürer⁸. Burada, hem termal hem de mekanik hassasiyetler, Hargreaves'in, sıcak plakanın ve von Frey filament testlerinin kullanıldığı 28 gün boyunca değerlendirildi. Tüm davranışsal analizler, uzun süreli aşırı duyarlılığın tutarlılığını göstermiştir. Bu modelin hem morfin hem de ibuprofenin doza bağımlı etkilerine sahip olduğu gösterilmiştir ve bu da klinik öncesi ağrı çalışmaları için çok uygun olduğunu doğrulamaktadır. Özellikle, bu makalede, "sinir camı kancası" olarak adlandırılan benzersiz bir el yapımı cam aletin talimatları açıklanmaktadır. Bu araç, siniri manipüle etmek ve ameliyat sırasında istenmeyen ek sinir yaralanmasını önlemek için forseps yerine kullanılır.

Tüm prosedürler Arizona Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin laboratuvar hayvanlarının kullanımına ilişkin kılavuzlara uygundur (NIH yayını no. 80-23, 1966). Patojen içermeyen, yetişkin C57Bl6 / J fareler (testte ağırlık: 22-28 g), 12 saatlik bir ışık / karanlık döngüsünde iklim kontrollü odalarda standart vivaryum fare kafeslerine (kafes başına beş fare) yerleştirildi ve yiyecek ve su ad libitumuna erişmesine izin verildi. Tüm davranışsal deneyler, tedavi koşullarına kör olmuş deneyciler tarafından gerçekleştirildi.

1. Temel: mekanik hassasiyetin ölçüsü

1. Farelerin varışında, 1 hafta boyunca hayvan tesisine alışmalarına izin verin. Ardından, hayvanları bundan sonra ≥7 gün boyunca deneyci kullanımına alıştırın.
2. Fareleri testten önce 1 saat boyunca von Frey test cihazına alıştırın, şeffaf Pleksiglas kutulara, bir tel örgü üzerine, test odasıyla aynı odaya, tercihen alışkanlık sırasında odada bulunan deneyci ile birlikte yerleştirin.
3. Temel pençe çekilme eşiğini, 3.61 (3.9 mN) filamentten başlayarak, Ek Tablo S1'de açıklanan von Frey filamentlerini kullanarak "yukarı ve aşağı" yöntemiyle belirleyin.
   1. Orta plantar arka pençenin bir dizi kalibre edilmiş ince (von Frey) monofilamentle araştırılmasına verilen geri çekilme tepkisini ölçün. Her bir filamenti, asılı tel örgü kafeslerde tutulan hayvanların pSNL ipsilateral arka pençesinin plantar yüzeyine bir kez dik olarak uygulayın. "Yukarı ve aşağı" yöntem^15'i kullanarak mekanik hassasiyeti değerlendirin: filamentin boyutuna karşılık gelen uyaran mukavemetini sırayla artırarak veya azaltarak geri çekilme eşiğini belirleyin. Her filamenti sırayla bir kez uygulayın.
      NOT: Deneyci, hayvanlar arasında tutarlı sonuçlar elde etmek için ayak tabanlarından herhangi birini uyarmaktan kaçınmalıdır.
   2. Örneğin, hayvan 3.61 filamentine cevap vermezse, daha kalın 4.08 filamentini (9.8 mN) kullanın (bir yanıt görsel olarak etkilenen pençenin geri çekilmesi, sallanması veya yalanması olarak belirtilir); Hayvan ilk kez cevap verdiyse, daha ince 3.22 (1.6 mN) filament kullanın. Hayvanın sırasıyla olumlu veya olumsuz sonraki tepkilere sahip olup olmadığına bağlı olarak azalan veya giderek daha kalın filamentler kullanmaya devam edin. Olumsuz ve olumlu yanıtları Ek Tablo S1'de sunulan veri sayfasında raporlayın. İlk olumlu yanıtı takiben aynı pençeyi 4x farklı filamentlerle test edin.

2. Temel: Hargreaves testini kullanarak termal duyarlılık ölçüsü

1. Farelerin varışında, 1 hafta boyunca hayvan tesisine alışmalarına izin verin. Ardından, hayvanları bundan sonra ≥7 gün boyunca deneyci kullanımına alıştırın.
2. Fareleri testten önce 1 saat boyunca Hargreaves test cihazına alıştırın, şeffaf Pleksiglas kutulara, test odasıyla aynı odaya, tercihen alışkanlık sırasında odada bulunan deneyci ile birlikte yerleştirin.
   NOT: Hargreaves testi, hayvanın birkaç saniye sabit durmasını gerektirir. Farelerde, alışkanlık başarılı bir deneyin anahtarıdır. Bu nedenle, fareler 1 saatlik alışkanlıktan sonra çok aktif kalırsa, gerektiğinde daha uzun süre alışmalarına izin verin.
   1. Hargreaves ve ^ark.16 tarafından açıklandığı gibi pençe çekilme gecikmelerini belirleyin. Pleksiglas muhafazalardaki fareleri berrak bir Pleksiglas plaka üzerine yerleştirin.
   2. Radyant bir ısı kaynağını (yüksek yoğunluklu projektör lambası) arka pençenin plantar yüzeyine pSNL'ye ipsilateral olarak odaklayın. Yaklaşık 10 sn'lik bir pençe çekme gecikmesi taban çizgisi elde etmek için ısı kaynağının yoğunluğunu ayarlayın. Ardından, deneyin geri kalanı için yoğunluğu sabit tutun.
   3. Pençe çekildiğinde bir hareket dedektörünün uyaranı ve zamanlayıcıyı otomatik olarak durdurmasını bekleyin. Doku hasarını önlemek için maksimum 33,5 sn'lik bir kesim kullanın.
      NOT: Kesim, herhangi bir ek cilt hasarını önlemek için önceki deneylere ve makalelere dayanarak belirlenir^11,17,18. Bu çalışmada kullanılan yoğunlukla, 33.5, Hargreaves aparatını kullanarak 30 (50 W) uyaran yoğunluğuna karşılık gelen kesimdir. Gözlemlenen davranış gönüllü değil, refleks bir davranıştır.
   4. Hargreaves aparatını kullanarak ve pSNL ipsilateral arka pençenin plantar yüzeyini hedefleyerek taban çizgisi pençe geri çekilme gecikmelerini belirleyin. Termal stimülasyonu başlatın ve geri çekilme gecikmesini kaydedin. Isı uyaranının sıcaklığını etkilemekten kaçınmak için, denemeler sırasında idrarı temizleyin.

3. Taban çizgisi: sıcak plaka testini kullanarak termal hassasiyet ölçümü

1. Testten önce hayvanları 1 saat boyunca test odasına alıştırın.
   NOT: Oda sıcaklığı önemli olduğundan ve sıcak plaka testine verilen yanıtları etkileyebileceğinden, alışma süresi boyunca ve test süresi boyunca odanın sıcaklığının tutarlı bir şekilde 22 ° C civarında olduğundan emin olun.
2. Sıcak plakayı 52 ° C'ye ayarlayın, çünkü bu sıcaklığın ideal olarak caydırıcı bir termal tepki¹⁹ ortaya çıkardığı gösterilmiştir.
3. Hayvanı test odasına yerleştirin ve bir kronometre başlatın.
4. Gürültülü davranışları gözlemleyin (yani, pençe çekilmesi, yalama, sallama). pSNL ameliyatı arka bacağı etkilediğinden, ön ayaklarda gözlenen davranışları göz ardı edin (özellikle ön ayak yalama).
5. Nosifensif davranış gözlenir gözlenmez kronometreyi durdurun.
6. Hayvanı odadan çıkarın ve gecikmeyi bu davranışa kaydedin.
   NOT: Doku hasarını önlemek için hayvanları en fazla 30 sn sonra hazneden çıkarın. Ek olarak, gözlemlenen davranışın gönüllü bir davranış değil, refleks bir davranış olduğuna dikkat etmek önemlidir.
7. Kokuların davranışsal etkisini azaltmak için test odasını hayvanlar arasında% 70 etanol ile temizleyin. Isı uyaranının sıcaklığını etkilemekten kaçınmak için, test edilen her hayvan arasındaki herhangi bir idrarın aparatını temizleyin.
8. Sonuçları doğrulamak için, hayvanlar test edildikten sonra gözden geçirilmek üzere test sırasında hayvanların videolarını sıcak plaka odasına kaydedin.
   NOT: Gecikme sürelerini ölçmek için video incelemesini kullanarak, deneyci testi tekrar tekrar gözlemleyebilir ve gerçek zamanlı gözlem sırasında gözden kaçmış olabilecek nosifensif davranışları yakından analiz edebilir.

4. Preoperatif hazırlık

NOT: Ameliyattan sonra fareleri kurtarmak için temiz kafeslerin mevcut olduğundan emin olun. Ameliyat bölgesini %70 etanol ile temizleyin, ellerinizi %70 etanol ile dezenfekte edin, steril eldivenler kullanın, uygun kişisel koruyucu ekipman (KKD) giyin (laboratuvar önlüğü, saç filesi, ayakkabı örtüleri) ve ameliyat boyunca steril teknikler uygulayın.

1. Ameliyatta kullanılacak aletleri (Ek Şekil S1) ve ek kaynakları (gazlı bez) önceden otoklavlayarak hazırlayın.
2. Uçucu izofluran kullanarak anesteziyi indükleyin ve cerrahi bir düzlemi korumak için gerektiği gibi ayarlayın. Oksijenin uygun bir akış hızında olduğundan emin olun.
3. Hayvanın uyuşturulmasını sağlamak için, pençe refleksinin yokluğundan emin olmak için ayak parmaklarını cımbızla arka pençeye sıkıştırın ve yağlama oftalmik merhem uygulamadan önce kornea göz kırpma refleksini kontrol edin.
   NOT: Analjezikler, analiz edilmek istenen ağrı yolunu değiştirebileceğinden, hatta ağrı araştırma hedeflerine^uygun olarak ölçülen davranışı nötralize edebileceğinden ve geçersiz kılabileceğinden bu çalışmada önerilememektedir 20,21,22.
4. Ameliyatın hangi tarafta yapılacağını seçtikten sonra (solda burada gösterilmiştir), hayvanın arka bacağını uyluk bölgesi etrafında, patellaya doğru, kalçaya doğru ve femur üstünde tıraş edin. 3x'i klorheksidin ile bir yönde, ılık steril salin ile dönüşümlü olarak üç ayrı gazlı bezle silin.
   NOT: İleriye dönük olarak, tutarlılığı korumak için her hayvanın ameliyatı aynı tarafta gerçekleştirdiğinden emin olun.
5. Tercih edilen bacağın etrafında steril bir alan oluşturmak için bacağı 10 cm x 10 cm steril bir örtüden yapılmış bir yarıktan geçirin.

5. Cerrahi prosedür

1. İnce cerrahi makas kullanarak (Ek Şekil S1F), uyluğun lateral yönünün orta hattında cildin 2 mm'lik küçük bir kesimini yapın. Fasyayı kırmak ve kesi alanını genişleterek bir boşluk oluşturmak için makası cildin altına dairesel bir hareketle kaydırın.
2. Bağlama forsepslerini (Ek Şekil S1H) kullanarak, uyluk kaslarında 1 cm derinliğinde 90°'lik bir açıyla dikey olarak keskin bir kesi oluşturun.
3. İnce küçük makası (Ek Şekil S1G) aynı insizyona, yine 90° açıyla yerleştirin ve kasları ayırmak için yavaşça açın. Siyatik sinir görselleştirilene kadar bunu yapmaya devam edin.
4. Parlak ve ince görünebilen, dikey uyluğa paralel olarak uzanan, kalçadan dize doğru uzanan siyatik siniri bulun. Devam etmeden önce makası ve bağlama forsepslerini vücuttan çıkarın.
5. Siniri alttan izole etmek için ekstra ince forseps (Ek Şekil S1D) ve sinir cam kancasını (Ek Şekil S1E) kullanın. Siniri, kalçaya en yakın ve dizden en uzak olan femur trokanterine yakın bir bölgede çevreleyen bağ dokularından dikkatlice serbest bırakın.
6. Sinirin cam çubuk üzerinde durmasına izin verin ve çubuğun ucunun sinirin yuvarlanmasını önlediğinden emin olun.
7. Siyatik sinirin genişliğinin 1 / 3'ünü 9-0 naylon bir sütür kullanarak bağlamak için cerrahi bir düğüm yerleştirin, ortak peroneal, tibial ve sural sinir dallarına bölünmeden önce³.
   NOT: Dallanma, siyatik sinir dizden aşağıya, kalçadan uzağa doğru ilerlerken meydana gelir. Sinirin bu üç dalı üç farklı innervasyona sahip olduğundan, tüm hayvan ameliyatlarında aynı sinir eksikliklerini sağlamak için cerrahi düğümü dallanmadan önce yerleştirmek zorunludur.
8. İplikleri sıkıca çekerken iplikleri düğüme yakın tutmaya özen gösterin, böylece sinirin cam çubuktan kaymasını önlemek ve daha fazla gerilme yaralanmasını önlemek için siniri aşırı kuvvetle çekmemek için.
9. Düğüm tamamlandıktan sonra siniri cam çubuktan dikkatlice kaydırın ve ayrılmış kasların altındaki seviyede orijinal yerine geri yerleştirin.
10. Kas insizyonunu emilebilir bir poliglikolik 5-0 sütür kullanarak dikin. Ayrı olarak, emilemeyen bir polipropilen 6-0 sütür kullanarak cildi dikin.
11. Ameliyat ve anestezi durma zamanını kaydedin. Yeni bir temiz kafese geri döndürmeden önce fareyi kurtarma kafesinde tek başına uyandırmasına izin verin.
    NOT: Ameliyat boyunca, anestezinin yeterli bakımını doğrulamak ve nefes almasını ve vücut perfüzyonunu (kırmızı, pembe, soluk) izlemek için hayvanın ayak parmaklarını sıkıştırın. Solunum önemli ölçüde azalırsa veya hayvan soluk görünüyorsa, anestezi akışını azaltmayı veya oksijen akışını arttırmayı düşünün ve hayvanı yeniden sulandırmak için deri altından enjekte etmeye hazır salinle dolu bir şırınga bulundurun. Her zaman, hayvanın vücut sıcaklığını korumak için altına yerleştirilmiş bir ısı kaynağı olmalıdır.

6. Kontrol hayvanları için sahte cerrahi prosedürü

1. Cerrahi prosedürün 5.1-5.11 adımlarını izleyin; 5.4-5.9 arasındaki adımları hariç tutun.

7. Cerrahi sonrası davranış testleri

NOT: Deneycinin herhangi bir tedaviye kör olduğundan emin olun. Kronik nöropatik ağrı, ameliyattan sonraki 2 hafta boyunca gelişecektir, bundan sonra ilgili bileşiklerin uygulanmasını takiben davranış testleri yapılabilir.

1. Hem termal hem de mekanik aşırı duyarlılığı ve potansiyel tersine çevrilmesini değerlendirmek için von Frey, Hargreaves veya sıcak plaka testini kullanın.
2. Kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından açıklanan son nokta kriterlerini karşılayan herhangi bir hayvanı çalışmadan çıkarın.
3. Davranış testinin sonunda kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi tarafından açıklanan prosedürleri izleyerek hayvanları ötenazi yapın.

8. Veri analizi

1. von Frey:
   1. Chaplan ve meslektaşları²³ tarafından açıklandığı gibi Dixon'un parametrik olmayan yöntemini kullanarak verileri analiz edin ve verileri ortalama geri çekilme eşiği olarak ifade edin.
      1. Referans verilen yazılımın ana sayfasında (bakınız Malzeme Tablosu), çalışma için kullanılan tüm filamentleri seçin (2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 ve 4.56). Grup panelinde, son simülasyona karşılık gelen filamenti seçin. Boş kutuda, olumlu (X) ve olumsuz (o) yanıtları bildirin. Gözlemlenen yanıt düzeninin solundaki kutuda bildirilen eşikleri yazın.
         NOT: Bir desen ve niceleme örneği Ek Şekil S2'de sunulmuştur.
2. Hargreaves ve sıcak plaka:
   1. Daha fazla istatistiksel analiz için gecikme sürelerini bir elektronik tabloda raporlayın.
   2. Sonuçları, zamanın bir fonksiyonu olarak hassasiyetlerin (eşikler veya gecikmeler) ortalaması olarak çizin.

9. Sinir cam kancasının nasıl yapılacağına dair talimatlar

NOT: Bu süreç boyunca yangın güvenliği uygulayın. Gerektiğinde ısıya dayanıklı eldivenler veya gözlükler gibi uygun koruma kullanın.

1. Bunsen brülörünü açın.
2. Cam çubuğun (A) bir ucunu ateşe bir elinizle tutun. Bu cam çubuk eridikçe, çubuk A üzerindeki eriyen camı yönlendirmek ve çekmek için diğer elinizde başka bir cam çubuk (B) kullanın. cam çubuk A'yı ateşten çıkarın ve erimiş kısmın ucunun doğal olarak içe doğru yuvarlanmasına izin vererek küçük bir top şekli oluşturun. Bu şekli yönlendirmek için B cam çubuğunu kullanın.

Kronik nöropatik ağrı, C57Bl6/J erkek farelerin siyatik sinirinin kısmi bağlanması ile indüklendi (Şekil 1A). Mekanik duyarlılık von Frey filamentleri ve "yukarı-aşağı" yöntemi kullanılarak değerlendirildi. Isıya karşı termal duyarlılık, Hargreaves ve sıcak plaka testleri kullanılarak değerlendirildi. Tüm veriler, pSNL cerrahisinin zaman içinde sahte hayvanlara etkisini veya farklı dozlarda morfin ve ibuprofenin etkilerini karşılaştırmak için Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri ile analiz edildi.

pSNL ameliyatı geçiren fareler, 28 gün boyunca sahte hayvanlara kıyasla mekanik uyaranlara karşı daha düşük eşikler göstermiştir (Şekil 1B). Termal aşırı duyarlılık değerlendirmesi ile benzer sonuçlar elde edildi; radyant ısı uyaranına maruz kaldıktan sonra pençe çekilme gecikmeleri pSNL hayvanlarında artmıştır (Şekil 1C) ve hayvanlar 52 ° C'lik bir plakaya yerleştirildiğinde geri çekilme gecikmeleri artmıştır (Şekil 1D).

Kronik nöropatik ağrının saptanmasını takiben, ameliyattan 14 gün sonra, farklı dozlarda morfin veya ibuprofenin antinosiseptif etkilerini değerlendirdik. Farelere intraperitoneal olarak tuzlu su çözeltisi veya iki farklı dozda morfin (1 ve 5 mg / kg) enjekte edildi. Her iki morfin enjekte edilen grupta da pSNL kaynaklı aşırı duyarlılığın tersine çevrilmesi görüldü ve bu oran 1 (1 mg / kg) ila 2 saat (5 mg / kg) arasında sürdü (Şekil 2A). Mekanik aşırı duyarlılık, morfin enjeksiyonundan 4 saat sonra başlangıç çizgisine geri döndü. Farelere intraperitoneal olarak iki farklı dozda ibuprofen (10 ve 30 mg / kg) uygulandığında, sonuçlar salin enjekte edilen farelere kıyasla mekanik aşırı duyarlılığın azaldığını göstermiştir (Şekil 2B). İbuprofenin antinosiseptif etkileri 2 saate kadar sürdü. Genel olarak, sonuçlar pSNL cerrahisinin uzun süreli kronik nöropatik ağrıya neden olduğunu göstermiştir. Ayrıca, bu modelin farklı analjezik dozlarına duyarlı olduğunu gösterebildik.

Şekil 1: Siyatik sinirin kısmi bağlanmasına bağlı olarak farelerde uzun süreli termal ve mekanik aşırı duyarlılık. Isıya termal duyarlılık (Hargreaves ve sıcak plaka testi) ve von Frey filamentlerine mekanik duyarlılık, kronik nöropatik ağrı (pSNL) modelinde aşırı duyarlılığın indüksiyonunu ve kalıcılığını incelemek için değerlendirildi. Siyatik sinirin bağlanmasından önce bazal değerler ölçüldü ve ameliyattan sonraki 28 gün boyunca aşırı duyarlılık değerlendirildi. (A) Resim, siyatik sinirin kısmi ligasyonunu temsil etmektedir. (B) Mekanik geri çekilme eşikleri, her zaman noktasında sahte ve pSNL fareler arasında karşılaştırılmıştır. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, pSNL'nin anlamlı bir etkisini ortaya koymuştur (F (1, 10) = 222.3, p < 0.0001, n = koşul başına 5-7). Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, 1. ve 28. günler arasında hipersensitivitede anlamlı bir artış olduğunu gösterdi (p < 0.05). (C) Hargreaves testi ile ölçülen termal geri çekilme gecikmeleri, sahte ve pSNL fareler arasında karşılaştırıldı. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, pSNL'nin anlamlı bir etkisini ortaya koymuştur (F(1, 8) = 113.8; p < 0.0001, n = koşul başına 4-6). Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, 2. ve 14. günlerde hipersensitivitede anlamlı bir artış gösterdi (p < 0.05). (D) Sıcak plaka testi ile ölçülen termal geri çekilme gecikmeleri, sahte ve pSNL fareler arasında karşılaştırılmıştır. Sıradan iki yönlü ANOVA, pSNL'nin anlamlı bir etkisini ortaya koydu (F (1, 32) = 19.10, p = 0.0001, n = koşul başına 4-6). Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, pSNL ameliyatını takip eden 4 haftada ısıya karşı anlamlı bir duyarlılık artışı gösterdi (p = 0.0026). Veriler S.E.M. kısaltmaları ± ortalama olarak sunulmuştur: pSNL = siyatik sinirin kısmi ligasyonu; BL = taban çizgisi. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: pSNL ile indüklenen mekanik aşırı duyarlılığın intraperitoneal morfin veya ibuprofen enjeksiyonu ile doza bağlı olarak tersine çevrilmesi. Mekanik aşırı duyarlılık (von Frey filamentleri kullanılarak), pSNL'nin bir fare modelinde morfin veya ibuprofenin potansiyel antinosiseptif etkilerini incelemek için değerlendirildi. Başlangıç değerleri (pre-pSNL) siyatik sinir ligasyonundan önce elde edildi. Kronik nöropatik ağrının belirlenmesini takiben, 14. günde pSNL kaynaklı aşırı duyarlılığı (post-pSNL) sağlamak için hayvanlar ikinci kez temel alındı. Daha sonra, iki doz morfin (1/5 mg / kg) veya ibuprofen (10/30 mg / kg) intraperitoneal olarak enjekte edildi. Mekanik aşırı duyarlılığın potansiyel tersine çevrilmesi, enjeksiyonları takiben 4 saat içinde değerlendirildi. (A) Mekanik çekilme eşikleri, salin durumu ile iki doz morfin arasında karşılaştırıldı. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, 1 mg / kg morfinin anlamlı bir etkisini (F (1, 11) = 11.16, p = 0.0066, n = 6-7 koşul başına) ve 5 mg / kg morfinin anlamlı bir etkisini (F (1, 10) = 21.78, p = 0.0009, n = 6 koşul başına) ortaya koymuştur. Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, her iki doz için enjeksiyondan 1 saat sonra mekanik aşırı duyarlılıkta anlamlı bir azalma olduğunu, ancak 2 saatte 5 mg / kg durumu için sadece anlamlı bir etki olduğunu göstermiştir (* p < 0.05). (B) Mekanik çekilme eşikleri, salin durumu ile iki doz ibuprofen arasında karşılaştırıldı. Geisser-Sera düzeltmesi ile tekrarlanan iki yönlü ANOVA ölçümleri, 10 mg / kg iburofen (F (1, 11) = 7.788, p = 0.0176, n = 6-7 koşul başına) ve 30 mg / kg ibuprofenin anlamlı bir etkisini (F (1, 10) = 18.79, p = 0.0015, n = 6 koşul başına anlamlı bir etki ortaya koymuştur. Sidak'ın çoklu karşılaştırma testi, her iki doz için enjeksiyondan 1 ve 2 saat sonra mekanik aşırı duyarlılıkta anlamlı bir azalma olduğunu göstermiştir (* p < 0.05). Veriler S.E.M. kısaltmaları ± ortalama olarak sunulmuştur: pSNL = siyatik sinirin kısmi ligasyonu; IP = intraperitoneal. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil S1: Cerrahi aletler. İki resim, ameliyat için kullanılan farklı aletleri göstermektedir. (A) İnce Castroviejo iğne tutucu; (B) Castroviejo iğne tutucu; (C) Mikro Adson forseps; (D) ekstra ince Graefe forseps; (E) sinir cam kancası; (F) ince makas (11,5 cm); (G) ince makas (9 cm); (H) forseps bağlama; (I) iris forseps. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil S2: Von Frey filament testi ile ölçülen pençe çekilme tepkilerinin temsili modeli. Bu deneme için, fare ilk üç stimülasyona cevap vermedi, ancak 4.56 filament ile dördüncü stimülasyonda pençesini geri çekti. Olumlu yanıtı (x) takiben, daha ince bir filament kullanıldı (4.31), ardından fare başka bir filamente cevap vermeyene kadar daha küçük boyutlu filamentler izledi (bu durumda, 4.08). Deneyci, filamentlerin boyutunu, yanıt yokluğuna kadar birer birer azaltmalıdır (o). Yanıt eksikliğini takiben, deneyci olumlu bir yanıt elde edene kadar daha kalın bir filament kullandı ve pozitif cevabı takiben boyutlarını azalttı (burada 4.31 filament ile elde edildi). İlk olumlu yanıtı takiben dört uyaran yapıldı; Her bir stimülasyonun kronolojik deseni, panel A'da kırmızı sayılarla açıklanmıştır. Bu durumda, hayvan 3.61 filamenti ile olumlu bir tepki göstermediği için 2.44 ila 3.22 filamentleri asla kullanılmamıştır. (B) Yanıt kalıbı daha sonra Allodynia yazılımında dolduruldu, filamentlerin uygulandığı sırayla (000xx0x0), beyaz renkle vurgulanan kutuda rapor edildi. Elde edilen eşik daha sonra yazılım tarafından hesaplandı (2.60839). Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Tablo S1: von Frey testi için veri toplama sayfası. Bu tablo, deneycilerin von Frey filamentlerini kullanırken yanıt kalıplarını doldurmalarını sağlar. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Yazarların bildirecek çıkar çatışması yoktur. Makalenin yazarlarından hiçbiri başka bir şekilde herhangi bir ücret veya geri ödeme veya onur ödülü almamıştır. Yazarlar bu çalışma ile ilişkili herhangi bir satıcı veya ilaç şirketi ile bağlantılı değildir.