NOD faresinde spontan otoimmün tiroidit olduğu gibi, Hashimoto tiroiditinin çeşitli hayvan modelleri oluşturulmuştur. H-2h4 fareler, HT indüksiyonu için basit ve güvenilir bir modeldir. Bu makalede SAT murin modelinin daha iyi anlaşılması için bu yaklaşım anlatılmakta ve patolojik süreç değerlendirilmektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Fare Spontan Otoimmün Tiroidit Modelinin Oluşturulması
Bu makalede
Düzeltme bildirimi
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Özet
Özet
Son yıllarda, Hashimoto tiroiditi (HT) en sık görülen otoimmün tiroid hastalığı haline gelmiştir. Lenfosit infiltrasyonu ve spesifik serum otoantikorlarının saptanması ile karakterizedir. Potansiyel mekanizma hala net olmasa da, Hashimoto tiroidit riski genetik ve çevresel faktörlerle ilişkilidir. Şu anda, deneysel otoimmün tiroidit (EAT) ve spontan otoimmün tiroidit (SAT) dahil olmak üzere çeşitli otoimmün tiroidit modelleri vardır.
Farelerde EAT, tiroglobulin (Tg) ile kombine edilmiş lipopolisakkarit (LPS) ile aşılanmış veya tam Freund adjuvanı (CFA) ile desteklenmiş HT için yaygın bir modeldir. EAT fare modeli, birçok fare türünde yaygın olarak kurulmuştur. Bununla birlikte, hastalığın ilerlemesi, farklı deneylerde değişebilen Tg antikor yanıtı ile daha olasıdır.
SAT, NOD'deki HT çalışmasında da yaygın olarak kullanılmaktadır. H-2h4 fare. BAŞINI SALLA. H2h4 fare, obez olmayan diyabetik (NOD) farenin B10 ile çaprazlanmasından elde edilen yeni bir türdür. A (4R), iyot beslenen veya beslenmeyen HT için önemli ölçüde indüklenir. İndüksiyon sırasında, NOD. H-2h4 fare, tiroid foliküler dokusunda lenfosit infiltrasyonunun eşlik ettiği yüksek bir TgAb seviyesine sahiptir. Bununla birlikte, bu tür fare modeli için, iyot indüksiyonu sırasında patolojik süreci kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için çok az çalışma vardır.
Bu çalışmada HT araştırması için bir SAT fare modeli oluşturulmuş ve uzun bir iyot indüksiyonu döneminden sonra patolojik değişim süreci değerlendirilmiştir. Bu model sayesinde, araştırmacılar HT'nin patolojik gelişimini daha iyi anlayabilir ve HT için yeni tedavi yöntemlerini tarayabilirler.
Giriş
Kronik lenfositik tiroidit veya otoimmün tiroidit olarak da bilinen Hashimoto tiroiditi (HT), ilk olarak 1912'de bildirilmiştir1. HT, lenfosit infiltrasyonu ve tiroid foliküler dokusunda hasar ile karakterizedir. Laboratuvar testleri temel olarak anti-tiroglobulin antikoru (TgAb) ve anti-tiroid peroksidaz antikoru (TPOAb)2 dahil olmak üzere tiroide özgü antikorların artması olarak kendini gösterir. HT insidansı %0.4-%1.5 aralığında olup, tüm tiroid hastalıklarının %20-25'ini oluşturmaktadır ve bu değer son yıllarda artmıştır3. Ek olarak, çok sayıda çalışma HT'nin papiller tiroid karsinomunun (PTC<....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Aşağıda açıklanan protokol, Sichuan Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından oluşturulan bakım ve kullanım kılavuzları tarafından onaylanmıştır.
1. Hazırlık
- Tüm fareleri 12 saatlik açık-karanlık döngüleri altında belirli patojensiz koşullarda barındırın (sırasıyla 07:00 ve 19:00'da başlar). Oda sıcaklığını 22 °C'de tutun. Yatak malzemelerini her hafta değiştirin. Yeterli miktarda standart kemirgen chow ve su sağlayın.
- NaI'nin stok çözeltisini suda hazırlarken, 2.5 g bileşiği tartın ve% 5'lik bir stok çözeltisi vermek için vorteks altında 50 mL steril, saf su içinde çözün. Bu ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Histolojik değişiklikler kadın ve erkeklerde, iyot alımının süresinde ve NaI çözeltisinde çarpıcı şekilde farklıydı. Şekil 1'de gösterildiği gibi, NOD'nin ~% 10'u. H-2h4 fareleri, 24 haftalıkken iyot indüksiyonu olmadan bile SAT geliştirdi ve tüm fareler sonunda tiroidit geliştirdi. Düzenli su verildiğinde, erkekler ve kadınlar arasındaki histolojik değişikliklerde anlamlı bir fark yoktu. İçme suyuna NaI ilavesi tiroidit gelişimini hızlandırdı. % 0.005,% 0.05 ve% 0.5'lik çözeltilerde, SAT, N.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
HT, tiroid bezine sızan lenfositlerin neden olduğu, tiroide özgü antikorlar üretirken tiroid fonksiyonunu daha da bozan otoimmün sistem bozukluğuna bağlı olarak ortaya çıkar. HT hastalarında serum TSH, TgAb ve TPOAb düzeyleri anlamlı olarak yüksektir27. Şu anda, otoimmün tiroiditin etiyolojisini incelemek için iki ana murin modeli yaygın olarak kullanılmaktadır: EAT ve SAT29. EAT fareleri çoğunlukla in vivo anormal bir bağışıklık ortamı oluşturmak için proteinler v.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Tüm yazarlar birbiriyle çelişen çıkarları olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
İnsan TPO'suna karşı fare monoklonal antikorları (pozitif kontrol olarak kullanılır) Dr. P. Carayon ve Dr. J. Ruf (Marsilya, Fransa) tarafından sağlanmıştır. Yazarlar bu çalışmadaki tüm katılımcılara ve araştırma ekibimizin üyelerine teşekkür eder. Bu çalışma kısmen Batı Çin Hastanesi Doktora Sonrası Askıya Alma Fonu, Sichuan Üniversitesi, Çin (2020HXBH057) ve Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Destek Programı (Proje No. 2021YFS0166) tarafından desteklenmiştir
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Butorphanol tartrate | Supelco | L-044 | |
| Deksmedetomidin hidroklorür ve nbsp; | Sigma-Aldrich | 145108-58-3 | |
| Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) kuyusu | Sigma-Aldrich | M9410-1CS | |
| Etanol | macklin | 64-17-5 | |
| Freund' s Adjuvan, Komple | Sigma-Aldrich | F5881 | |
| Freund' s Adjuvan, Eksik | Sigma-Aldrich | F5506 | |
| Keçi Anti-Fare IgG ve nbsp; | invitrojen | SA5-10275 ve nbsp; | |
| Midazolam çözeltisi | Supelco | M-908 ve nbsp; | |
| Fare / sıçan tiroksin (T4) ELISA | Calbiotech | DKO045 | |
| Paraformaldehit | macklin | 30525-89-4 | |
| Propidyum iyodür | Sigma-Aldrich | P4864 | |
| Sodyum İyot | Sigma-Aldrich | 7681-82-5 | |
| Tiroglobulin | Sigma-Aldrich | T1126 | |
| Tiroglobulin ELISA Kiti | Termo Bilimsel | EHTGX5 | |
| TSH ELISA | Calbiotech | DKO200 | |
| Ksilen | macklin | 1330-20-7 |
Kaynaklar
- Ralli, M., et al. Hashimoto's thyroiditis: An update on pathogenic mechanisms, diagnostic protocols, therapeutic strategies, and potential malignant transformation. Autoimmunity Reviews. 19 (10), 102649(2020).
- Zhang, Q. Y., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
Düzeltme
Formal Correction: Erratum: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model
Posted by JoVE Editors on 6/05/2023. Citeable Link.
An erratum was issued for: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model. The Protocol section was updated.
Step 3.1.1 of the Protocol was updated from:
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
to
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
NOTE: The specific concentrations of each component in the anesthesia mixture are: midazolam 13.33µg/100µL, medetomidine 2.5µg/100µL, and butorphanol 16.7µg/100µL. For specific dosages used in mice, the doses are: midazolam 4µg/g, medetomidine 0.75µg/g, and butorphanol 1.67µg/g. Anesthesia depth was confirmed when the mouse's limb muscles relaxed, the whiskers had no touch response, and there was loss of pedal reflex.
Step 3.1.2 of the Protocol was updated from:
After the mice are anesthetized, cut off their whiskers with ophthalmic scissors to prevent blood from flowing down the whiskers and causing hemolysis. Fix the mouse with one hand and press the skin of the eye to make the eyeball protrude. Quickly remove the eyeball and draw 1 mL of blood into the microcentrifuge tube via a capillary tube.
to
After the mice are anesthetized, prepare the peripheral blood samples, by fixing the mouse with one hand and pressing the eye skin to protrude the eyeball. Then, insert the capillary tube into the inner corner of the eye and penetrate at a 30-45 degree angle to the plane of the nostril. Apply pressure while gently rotating the capillary tube. Blood will flow into the tube via capillary action.
Step 3.2.1 of the Protocol was updated from:
Dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
to
Humanely euthanize the animal according to the institutional policies. Then, dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
