Yöntem makalesi

HPLC, Akasya Armandii Caulis'in Özgünlüğünü Tanımlamak için Çok Desen Tanıma için Kimyasal Parmak İzi ile Birleştirildi

DOI:

10.3791/64690

⸱

11 Kasım 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, The Second Class Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutics, National Administration of Traditional Chinese Medicine, Chengdu Medical College, 2Pengzhou Second People's Hospital

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, Akasit Armandii Caulis ve zina maddelerinin gerçek çeşitlerini etkili bir şekilde tanımlamak için yeni bir strateji sağlayan kimyasal parmak izi çoklu desen tanıma ile birlikte yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) oluşturmak için bir protokol sunuyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çin tıbbi materyallerini ve ilgili zina maddelerini tanımlamak için bir yöntem, Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, evrensel olarak kullanılan geleneksel Çin tıbbı) örnek alınarak oluşturulmuştur. On parti gerçek Chuanmutong çeşidi ve beş parti ilgili zina yapan, küme analizi (CA), ana bileşen analizi (PCA) ve ortogonal kısmi en küçük kareler ayrım analizi (OPLS-DA) dahil olmak üzere kemometri ile birleştirilmiş yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) parmak izlerine dayanarak analiz edildi ve karşılaştırıldı. Ek olarak, β-sitosterol içeriği belirlendi. Chuanmutong'un kontrol kimyasal parmak izi kuruldu ve 12 ortak tepe noktası tespit edildi. 10 parti gerçek Chuanmutong çeşidinin parmak izi ile kontrol parmak izi arasındaki benzerlik 0.910-0.989 iken, beş parti zina yapanın benzerliği sadece 0.133-0.720 idi. Kromatogramdaki ortak zirvelere dayanarak, 15 parti numune PCA tarafından üç içerik seviyesine sınıflandırıldı ve CA tarafından dört kategoriye ayrıldı ve otantik Chuanmutong ile Chuanmutong'un zina maddeleri arasında net bir ayrım yapıldı. Ayrıca, otantik Chuanmutong'u ve Chuanmutong'un zina yapanlarını etkili bir şekilde tanımlayabilen yedi diferansiyel bileşen, OPLS-DA aracılığıyla bulundu. 10 parti gerçek Chuanmutong çeşidinin β-sitosterol içeriği 97.53-161.56 μg / g iken, beş zina partisinin β-sitosterol içeriği büyük ölçüde değişmiştir, bunların arasında Akasma peterae Hand'in β-sitosterol içeriği de bulunmaktadır.-Mazz. ve Akasma gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. ve Wils. otantik Chuanmutong çeşitlerinden önemli ölçüde daha düşüktü. Bu çalışmada oluşturulan HPLC indeks bileşeni içeriği ve kimyasal parmak izi çoklu desen tanıma yöntemi, otantik Çin tıbbi materyallerini ve ilgili zina maddelerini etkili bir şekilde tanımlamak için yeni bir strateji sunmaktadır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chuanmutong, Akasma armandii Franch'ın kuru Caulis'i. veya Akasma montana Buch.-Ham.,kliniklerde yaygın olarak kullanılan geleneksel bir Çin tıbbıdır 1,2,3. İdrar problemlerinin, ödemin, dil ve ağızdaki yaraların, süt salgısının azalmasının, eklem sertliğinin ve nemli ısının neden olduğu kas ağrılarının tedavisinde kullanılır4. Chuanmutong her zaman, çoğunlukla güneybatı Çin'de, özellikle de en iyi kalitenin bulunabileceği Sichuan'da dağıtılan vahşi çeşitlerden elde edilmiştir 5,6. Otantik çeşitler ile yakından ilişkili zina yapanları, benzer özelliklerinden dolayı ayırt etmek zordur 7,8,9,10. Çin Farmakopesinin 2020 baskısındaki Chuanmutong'un kalite standardı, yalnızca içerik belirleme olmadan özellikleri, mikroskobik tanımlamayı ve ince tabaka tanımlamayı şart koşar, bu da zina yapanları etkili bir şekilde tanımlayamaz ve bu nedenle potansiyel riskleri vardır. Dahası, Chuanmutong ve ilgili bitkileri karşılaştıran ve tanımlayan az sayıda rapor vardır. Sonuç olarak, Chuanmutong'un özgünlüğünü sağlamak için bir kalite kontrol yöntemi daha fazla çalışmaya değer.

Chuanmutong'un kimyasal bileşenleri esas olarak oleanan tipi pentasiklik triterpenoidlerden ve bunların glikozitlerinden, flavonoidlerinden ve organik asitlerinden oluşur11,12,13,14. Bunlar arasında, oleanolik asit, β-sitosterol, stigmasterol ve ergosterol, diürezi teşvik etmek ve straanguriayı hafifletmek için potansiyel farmakodinamik maddeler olabilecek farklı yoğunluklarda diüretik etkilere sahiptir15,16. Kimyasal parmak izleri, numunelerde bulunan birçok kimyasal bileşenin yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC), gaz kromatografisi (GC) vb. ile ayrılması ve algılanmasıyla elde edilir. Chuanmutong'un özelliklerini analiz etmek için uygun istatistiksel analiz yöntemlerinin benimsenmesi, geleneksel Çin tıbbının genel kalite kontrolünü ve bilimsel tanımlamasını belirleyebilir17,18,19.

Bu çalışmada, 10 parti Chuanmutong otantik çeşidi ve beş parti zina eden toplanmıştır. Kaliteleri, küme analizi (CA), ana bileşen analizi (PCA), ortogonal kısmi en küçük kareler ayrım analizi (OPLS-CA) ve farmakodinamik bileşenin içerik belirlemesi dahil olmak üzere çok desenli tanıma ile birleştirilmiş HPLC parmak izi yöntemi ile karşılaştırılmış ve analiz edilmiştir. Bu protokol, otantik çeşitleri yüksek özgüllükle tanımlamak için bir yöntem, otantik çeşitlerin ve Çin tıbbi malzemelerinin zina maddelerinin bilimsel olarak tanımlanması için yeni bir strateji oluşturur.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Kimyasal parmak izi algılama yöntemleri

  1. Kromatografik koşullar
    1. Asetonitril (A)/su (B) mobil fazını hazırlayın. HPLC yazılımında aşağıdaki gibi bir gradyan programı ayarlayın: 0-20 dakika,% 3 A-% 10 A; 20-25 dk, %10 A-%13 A; 25-65 dk, %13 A-%25 A; 65-75 dk, %25 A-%40 A; 75-76 dk, %40 A-%3 A; 76-85 dk, %3 A-%3 A.
    2. Mobil fazın akış hızını 1,0 mL/dak'da tutun.
    3. Kromatografik ayrımı, 30 °C'de tutulan bir C18 sütununda (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) gerçekleştirin.
    4. Enjeksiyon hacmini 10 μL'ye ayarlayın.
    5. Örnekleri 205 nm dalga boyunda tespit edin.
      NOT: Kromatografik koşulların özel ayarları için, yüksek performanslı sıvı kromatografisinin çalışma yazılımının çalışma prosedürlerine bakın (Malzeme Tablosu).
  2. Numune çözeltisinin hazırlanması
    1. Hammaddeleri, iç çapı 850 μm ± 29 μm olan naylon bir ağdan geçirerek eşit parçacık boyutuna kadar öğütün.
    2. 2 g öğütülmüş hammaddeyi (doğru tartılmış) bir tıpa ile 50 mL'lik konik bir şişeye yerleştirin ve 50 mL metanol ekleyin. Durdurucuyu şişeye yerleştirin ve 30 dakika boyunca ultrasonicate (600 W, 40 kHz).
    3. Ardından, şişeyi oda sıcaklığına (RT) soğutun. Numuneleri tekrar tartın ve kaybedilen ekstraktanı değiştirerek ilk ağırlığı telafi edin.
    4. Tıbbi ekstraktları içeren metanol çözeltisinin 4 mL'sini 10 mL'lik hacimsel bir şişeye dökün. 6 mL H2O ekleyin, karıştırın ve 10 dakika boyunca yerleşmesine izin verin.
    5. Son olarak, süpernatantı 0,45 μm'lik bir filtre membranından süzün ve bekleme moduna alın.
  3. Parmak izi algılama yöntemlerinin doğrulanması
    1. Numuneyi yukarıda açıklandığı gibi hazırlayın (adım 1.2) ve günde altı kez HPLC analizine (adım 1.1) tabi tutun. Hassasiyeti değerlendirmek için, adım 1.3.5'te açıklandığı gibi göreli tutma süresinin ve göreli tepe alanlarının göreli standart sapmasını (RSD) hesaplayın.
    2. RT'de depolanan aynı örnek çözeltiyi 0, 2, 4, 6, 8, 12 ve 24 saat boyunca analiz ederek numune çözeltisinin kararlılığını değerlendirin ve adım 1.3.5'te açıklandığı gibi göreceli tutma süresinin ve göreceli tepe alanlarının RSD'sini hesaplayın.
    3. Aynı numunenin altı kopyasını (CMT-4) alın, numune çözeltisini yukarıdaki prosedüre göre hazırlayın (adım 1.2) ve adım 1.1'i izleyerek HPLC'de parmak izini tespit edin. Göreli bekletme süresinin ve göreli tepe alanlarının RSD'sini hesaplayın ve adım 1.3.5'te açıklandığı gibi tekrarlanabilirliğini değerlendirin.
    4. Ardından, referans tepe noktası olarak Şekil 1B'deki tepe numarası 10'u kullanın ve adım 1.3.5'te açıklandığı gibi her bir ortak tepe noktasının göreli tutma süresinin ve göreli tepe alanının RSD'sini hesaplayın.
    5. Her ortak tepe noktasının göreli bekletme süresini ve göreli tepe alanını hesaplamak için aşağıda belirtilen formülleri kullanın:
      T re = T karakteristiği/Treferans
      A re = A karakteristik/Areferansı
      Burada T re = göreceli tutma süresi, T karakteristiği = karakteristik tepe tutma süresi, Treferansı = referans tepe tutma süresi, A re = göreceli tepe alanı, A karakteristik = karakteristik tepe alanı ve A referans = referans tepe alanı.
      NOT: Geleneksel Çin tıbbı parmak izlerinin kurulması genellikle elde edilmesi kolay ve yüksek çözünürlüğe sahip bir kromatografik tepe noktası seçmeyi gerektirir. Bu, parmak izlerini tanımlamak ve kararlılıklarını ve tekrarlanabilirliklerini incelemek için bir referans tepe noktası olarak kullanılır.

2. Chuanmutong parmak izinin kurulması ve benzerlik analizi

  1. 10 parti otantik örnek ve Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC), Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd gibi beş parti zina içeren kullanın. ve Wils. (DC), Akasma peterae El.-Mazz. (DE), Akasma gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils (XS) ve Clematis finetiana Levl. et Vaniot. (SMT) parmak izi analizi için örnek olarak.
  2. Örnek çözümleri adım 1.2'de açıklandığı gibi hazırlayın. Adım 1.1'de açıklanan koşullara göre HPLC ile tüm örnek çözümlerin parmak izi analizini gerçekleştirin.
  3. İlgili verileri geleneksel Çin tıbbının kromatografik parmak izlerinin benzerlik değerlendirme sistemine aktarın (SESCF-TCM, 2012 versiyonu). Sistem, tüm numunelerin kromatogramlarında makul yüksekliğe ve iyi çözünürlüğe sahip pikleri ortak pikler olarak belirleyecektir.
    NOT: SESCF-TCM yazılımı, Çin Farmakope Komisyonu (http://114.247.108.158:8888/login) web sitesine kayıt olduktan sonra indirilebilir.
    1. Yazılımda, menüdeki Referans Spektrumunu Ayarla düğmesini tıklatın.
    2. Ardından Parametre Ayarları penceresinde, Zaman Penceresi Genişliği'ni 0,5 olarak ayarlayın ve Medyan Yöntemi olarak Denetim Spektrumu Oluşturma Yöntemi'ni seçin.
    3. Ana menüde Çok Noktalı Kalibrasyon'a tıklayın, ardından Tam Spektrumlu Tepe Eşleştirme olarak Tepe Eşleştirme'yi seçin.
    4. Son olarak, otantik Chuanmutong türlerinin referans kromatografik parmak izini oluşturmak için Kontrol Oluştur'a tıklayın.
  4. 10 parti otantik Chuanmutong örneğinin ve beş parti zina yapanın tutma süresini ve tepe alanını analiz için SESCF-TCM'ye aktarın. Özel işlemler aşağıdaki gibidir:
    1. Yazılımda, ana menüdeki Referans Spektrumunu Ayarla düğmesine tıklayın.
    2. Parametre Ayarları penceresinde, otantik Chuanmutong türlerinin referans kromatografik parmak izini referans olarak ayarlayın, Medyan Yöntem olarak Kontrol Spektrumu Oluşturma Yöntemini seçin ve Zaman Penceresi Genişliğini 0,5 olarak ayarlayın.
    3. Ana menüde Çok Noktalı Kalibrasyon'a tıklayın, ardından Tam Spektrumlu Tepe Eşleştirme olarak Tepe Eşleştirme'yi seçin.
    4. Son olarak, Chuanmutong'un referans kromatogram parmak izlerine dayanarak benzerliği hesaplamak için Benzerliği Hesapla'ya tıklayın. Son olarak, Çin Tıbbı Kromatografik Parmak İzi Değerlendirme Sistemi'ni (2012 versiyonu) kullanarak parmak izlerinin benzerliğini hesaplayın.
      NOT: Belirli işlemler için, Çin Tıbbı Kromatografik Parmak İzi Değerlendirme Sistemi'nin (2012 sürümü) çalışma özelliklerine bakın.

3. Chuanmutong parmak izinin çok desenli tanıma analizi

  1. Küme analizi (CA)
    1. 10 parti otantik Chuanmutong örneğinin parmak izlerinde 12 ortak zirvenin tepe alanlarını ve bunların beş parti zina maddesini değişken olarak kullanın ve bunları sistematik küme analizi (CA) için istatistiksel analiz yazılımına girin.
    2. Gruplar Arası yöntemini seçin ve Chuanmutong ve zina yapanların küme analizi diyagramını çizmek için sınıflandırma temeli olarak Pearson korelasyon katsayısını kullanın. Özel işlemler aşağıdaki gibidir:
      1. İstatistiksel analiz yazılımında, verileri içe aktarmak için Dosya'ya tıklayın.
      2. Menüde Analiz'e tıklayın ve ardından Sınıflandırma'da Sistem Kümeleme'ye tıklayın.
      3. Ortak tepe alanını değişken olarak seçin ve küme sayısını dört olarak ayarlayın.
      4. Yöntem'e tıklayın, kümeleme yöntemini Gruplar Arası Bağlantı olarak seçin, ölçüm aralığını Pearson Korelasyonu olarak seçin ve CA haritasını çizmek için Tamam'a tıklayın.
  2. Ana bileşen analizi (PCA)
    1. Otantik çeşitlerin ve zina maddelerinin göreceli ortak tepe alanını PCA analizi için analiz yazılımına aktarın ve örnek farklılıklarının puan matrisi haritasını değerlendirmek için PCA puan haritasını kullanın. Özel işlemler aşağıdaki gibidir:
      1. Veri analiz yazılımını açın, menüden Dosya'ya tıklayın ve yeni bir normal proje oluşturun. HPLC sisteminden bir elektronik tablodaki 12 yaygın tepe noktasının tepe alanını (örneğin, excel biçimi) içe aktarın. Ardından, veri içe aktarma işlemini tamamlamak için Son'a tıklayın.
      2. Model türünü PCA ile ayarlamak üzere yeni bir model oluşturmak için Yeni'ye tıklayın. Verileri sığdırmak için Otomatik Sığdır'a ve Ekle'ye tıklayın, ardından PCA puan haritasını almak için Puanlar'a tıklayın.
  3. Ortogonal kısmi en küçük kareler ayrımcılığı analizi (OPLS-DA)
    1. Otantik Chuanmutong çeşitlerinin ve zina yapanların göreceli ortak tepe alanı zirvelerini daha fazla analiz etmek ve tüm örneklerin OPLS-DA sınıflandırma puan haritasını çizmek için süpervizyon modu ile Ortogonal kısmi en küçük kareler ayrımcılığı analiz yöntemini kullanın. Özel işlemler aşağıdaki gibidir:
      1. Veri analiz yazılımında, bir dosyayı içe aktarmak ve yeni bir normal proje oluşturmak için menüdeki Dosya'ya tıklayın. HPLC sisteminden bir elektronik tablodaki 12 yaygın tepe noktasının tepe alanını içe aktarın, ardından veri içe aktarma işlemini tamamlamak için Son'a tıklayın.
      2. Model türünü PCA ile ayarlamak üzere yeni bir model oluşturmak için Yeni'ye tıklayın. Verileri sığdırmak için Otomatik Sığdır'a ve Ekle'ye tıklayın. Ardından PCA puan haritasını almak için Skorlar'a tıklayın.
      3. OPLS-DA ile model türünü ayarlamak için Yeni'ye tıklayın ve Model Bir olarak Yeni'yi seçin.
      4. Ölçek'e tıklayın ve türü Herkes için Par ile ayarlayın. Önce Otomatik Sığdır'a tıklayın ve ardından OPLS-DA puan haritasını almak için Puanlar'a tıklayın.
    2. Chuanmutong'daki her ortak zirvenin sınıflandırma sonuçları üzerindeki etkisini ve otantik Chuanmutong materyalleri ile ilgili zina maddeleri arasındaki farkı belirlemek için, analiz için projeksiyondaki değişken önemi (VIP) kullanın.
    3. Chuanmutong'un farklı bileşenlerinin VIP haritasını çizin. Her değişkenin sınıflandırma üzerindeki etkisini değerlendirmek ve gruplar arasındaki farklılıklara önemli ölçüde katkıda bulunan bileşenleri taramak için elde edilen VIP haritasını kullanın. Özel işlemler aşağıdaki gibidir:
      1. Veri analizi yazılımında, menüden Analiz Et'e tıklayın ve Permütasyonlar'a tıklayın, permütasyon sayısını 200 olarak ayarlayın ve OPLS-DA skor haritasının R2 ve Q2'sini alın.
      2. VIP haritasını almak için VIP'ye tıklayın ve VIP Tahmini'ni seçin.

4. Chuanmutong'da HPLC ile β-sitosterol tayini

  1. Kromatografik koşullar (bkz. adım 1.1)
    1. Mobil fazı hazırlayın: metanol su (97:3).
    2. Mobil fazın akış hızını 1,0 mL/dk olarak ayarlayın.
    3. Kromatografik ayrımı, 30 °C'de tutulan bir C18 sütununda (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) gerçekleştirin.
    4. Enjeksiyon hacmini 10 μL'ye ayarlayın.
    5. Bileşeni 204 nm dalga boyunda tespit edin.
  2. Numune çözeltisinin hazırlanması
    1. Metanol içinde karşılık gelen referans standardının doğru tartılmış bir miktarını çözerek β-sitosterol (0.1 mg / mL) stok standardı çözeltisini hazırlayın.
    2. Hammaddenin analiz numunesini, 180 μm iç çapa 7,6 μm olan naylon ağdan geçirerek homojen parçacık boyutuna ±.
    3. 2 g öğütülmüş hammaddeyi (doğru tartılmış) yuvarlak tabanlı bir şişeye yerleştirin ve üzerine 50 mL kloroform ekleyin.
    4. Şişeyi bir reflü kondenserine bağlayın ve 60 dakika boyunca kaynar su banyosunda (orta kaynama) ısıtın. Ekstraksiyon çözeltisini 15-20 μm filtre kağıdı ile filtreleyin.
    5. Filtrasyonu yaklaşık 10 dakika boyunca kaynar su banyosunda (orta derecede kaynama) kuruluğa yakın bir şekilde buharlaştırın.
    6. Kalıntıyı çözün ve metanol kullanarak hacmi 5 mL'ye kadar yükseltin. Son olarak, süpernatantı 0,45 μm'lik bir filtre zarından geçirin ve bekleme moduna geçirin.
  3. Yöntem doğrulama
    1. Alt adım 4.2.1'de hazırlanan β-sitosterol stok çözeltisini alın,% 100 metanol ile seyreltin ve 100 μg / mL, 80 μg / mL, 60 μg / mL, 50 μg / mL, 40 μg / mL, 30 μg / mL ve 20 μg / mL konsantrasyonlarında çözeltiler hazırlayın.
    2. Pik alanı belirlemek için numuneleri adım 4.1'de açıklanan kromatografik koşullar altında enjekte edin, enjeksiyon hacmine tepe alanı ile regresyon analizi yapın ve doğrusallığını değerlendirmek için regresyon denklemini ve korelasyon katsayısını elde edin.
    3. Örnekleri yukarıda açıklandığı gibi hazırlayın (adım 4.2) ve aynı gün altı kez HPLC analizine (adım 4.1) tabi tutun. Ardından, hassasiyeti değerlendirmek için tepe alanlarının RSD'sini hesaplayın.
    4. Adım 4.1'de açıklandığı gibi RT'de 0, 2, 4, 6, 8, 12 ve 24 saat boyunca depolanan aynı örnek çözeltileri analiz ederek numune çözeltisinin kararlılığını değerlendirin. Ardından, adım 1.3.5'te açıklandığı gibi tepe alanlarının RSD'sini hesaplayın.
    5. Aynı numuneyi (CMT-4) adım 4.2'de açıklandığı gibi hazırlanmış seksuplikatta çözerek ve adım 4.1'de açıklandığı gibi HPLC analizine tabi tutarak tekrarlanabilirliği inceleyin. Ardından, altı örnekte β-sitosterol içeriğinin RSD'sini hesaplayın.
    6. Standart toplama yöntemini kullanarak yöntemin doğruluğunu değerlendirin. Bunun için, β-sitosterol içeriğinin% 80,% 100'ünde ve% 120'sinde numunelere β-sitosterol referans çözeltileri ekleyin ve her koşulu adım 4.1'de açıklandığı gibi üç kez tekrarlayın. Ortalama kurtarma ve RSD'yi hesaplayarak yöntemin doğruluğunu değerlendirin.
      NOT: İyileşme oranının (RR) hesaplama formülü aşağıdaki gibidir:
      RR % = [(M t - M 0) / Ms] × 100
      Burada M t = standardı ekledikten sonra β-sitosterolün kalitesi, M 0 = numune çözeltisinin kalitesi ve Ms = eklenen β-sitosterolün kalitesi.
  4. Numunelerin β-sitosterol içeriğinin belirlenmesi
    1. Adım 4.2'ye göre numune çözeltileri hazırlamak için 10 parti otantik Çin tıbbi materyali ve beş parti ilgili zina maddesi alın.
    2. Daha sonra, adım 4.1'de açıklanan koşullar altında tepe alanını belirlemek için her bir numune çözeltisini ve β-sitosterol referans çözeltisini enjekte edin ve harici standart tek noktalı yöntemi kullanarak her numunenin β-sitosterol içeriğini hesaplayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chuanmutong'un kromatografik parmak izi ve benzerlik analizi (SA)
Hassasiyet, tekrarlanabilirlik ve kararlılığın nispi tutma süresinin RSD değerleri sırasıyla% 0.46,% 1.65 ve% 0.53'ün altındaydı; göreceli tepe bölgesinin RSD değerleri sırasıyla% 4.23,% 3.56 ve% 3.96'nın altındaydı. Şekil 1A, B'de gösterildiği gibi, 10 otantik Chuanmutong örneğinde HPLC parmak izlerinde 12 farklı ortak tepe noktası (tepe 1'den tepe 12'ye) vardı. 10 numaranın zirve alanı ni...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Araştırma için örnek koleksiyonu, Çin tıbbi malzemelerinin özgünlüğünü tanımlamada çok desenli tanıma oluşturmanın ilk önemli adımıdır. Pazar araştırması sayesinde, Sichuan Ya'an, Liangshan ve Leshan'ın Chuanmutong'un vahşi kaynaklarının ana üretim alanları olduğunu gördük. Aynı cinsin ilgili çeşitleri de aynı coğrafi dağılıma sahiptir 6,20; CC, DC, DE, XS ve SMT genellikle Chuangmutong16,21 olarak kötüye...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Sichuan Geleneksel Çin Tıbbı İdaresi Projesi (no. 2020JC0088, no. 2021MS203) tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Asetik asitZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Çin2017381038
AsetonitrilSigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Şangay, ÇinWXBD5243V
β-SitosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Çin20210201
  C18 sütunuYuexu Material Technology Co., Ltd., Şangay, ÇinWelch Ultimate LP
ChuanmutongGuoqiang Çin Bitkisel Parçalar Co., Ltd., Sichuan, Çin 19020103CMT-1
ChuanmutongHongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Çin 200701CMT-2
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Çin 200701CMT-3
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Çin 200901CMT-4
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Çin 210701CMT-5
ChuanmutongHaobo Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Çin 210401CMT-6
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Çin 200901CMT-7
ChuanmutongWusheng İlaç Group Co., Ltd., Sichuan, Çin 201201CMT-8
ChuanmutongLimin Çin Bitkisel Parçaları Co, Ltd., Sichuan, Çin 201001CMT-9
ChuanmutongYuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Sichuan, Çin210501CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. WangMadzi Köprüsü, Sanlang İlçesi, Tianquan İlçesi, Sichuan, Çin -CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.Heilin Köyü, Qiliping İlçesi, Hongya İlçesi, Sichuan, Çin -DC
Akasma peterae El.-Mazz.Huangmu Köyü, Huangmu İlçesi, Hanyuan İlçesi, Sichuan, Çin -DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et WilsMixedang Dağı, Huangwan İlçesi, Emei İlçesi, Sichuan, Çin -XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.Wannian Köyü, Huangwan İlçesi, Emei İlçesi, Sichuan, Çin -SMT
Elektronik dengeHaozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Şangay,  Çin FA1204
ErgosterolMeisai Biyolojik Technology Co, Ltd, Chongqing, Çin20210201
EtanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Çin2021112602
Etil asetatZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Çin2017042043
Formik asitKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Çin2016062901
Yüksek performanslı sıvı kromatografisiAgilent, ABD.1260
IBM SPSS Statistics sürüm 26.0International Business Machines Corporation,ABD-Metanol
Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Şangay, ÇinWXBD6409V
MetanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Çin202010302
N-Bütil AlkolZhiyuan Kimyasal Reaktif Co., Ltd., Tianjin, Çin2020071047
Petrol eteriZhiyuan Kimyasal Reaktif Co., Ltd., Tianjin, Çin2020090125
Fosforik asitComeo Kimyasal Reaktif Co., Ltd., Tianjin, Çin20200110
SESCF-TCM versiyonu 2012Ulusal Farmakope Komisyonu, Çinhttp://114.247.108.158:8888/login
StigmasterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Çin20210201
TriklorometanSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Şangay, Çin20200214
Umetrics SIMCA sürümü 14.1.0.2047Umetrics,İsveç-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download
Ultra saf su makinesiYoupu Ultrapure Technology Co., Ltd., Sichuan, ÇinUPH-II-10T
Ultrasonik temizleyiciKunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, ÇinKH3200E

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
  2. Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).
  3. Pan, L. L., et al. a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway. Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).
  4. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , The Medicine Science and Technology Press of China. China., Beijing. 38(2020).
  5. Wang, D. G., Guo, J. L. Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii. Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696(2007).
  6. Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).
  7. Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. Study on the identification of Caulis Clematidis Armandii. Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).
  8. Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).
  9. Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii. Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).
  10. Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence. Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).
  11. Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham. Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).
  12. Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. Studies on four compounds from Clematis Montana. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).
  13. Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I). Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).
  14. Li, X., et al. Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review. Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245(2021).
  15. Ye, X., et al. Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats. China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).
  16. Kuang, Y., et al. Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).
  17. Li, Y., et al. Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).
  18. Li, Y., et al. Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).
  19. Li, H. H., et al. Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition. Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281(2021).
  20. Dong, L. J., et al. Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii. Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).
  21. Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. Morphological and histological identification of Chuanmutong. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).
  22. Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. Quality Research of Chuanmutong. Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).
  23. Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. Research on the Quality Standard of Chuanmutong. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).
  24. Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).
  25. Qing, L. S., et al. Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).
  26. Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS. Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

HPLC Parmak ziChuanmutong KimliklendirmesiK me AnaliziTemel Bile en AnaliziOPLS DABeta Sitosterol eri iin T bbi Materyalleri

İlgili makaleler