Method Article

Kendi Kendine Birleştirilmiş İnsan Mezenkimal Kök Hücre Agregatlarının Yapımı, Karakterizasyonu ve Rejeneratif Uygulaması

DOI:

10.3791/64697

⸱

March 24th, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Military Stomatology & National Clinical Research Center for Oral Diseases & Shaanxi International Joint Research Center for Oral Diseases, Center for Tissue Engineering, The Fourth Military Medical University, 2Department of Preventive Dentistry, School of Stomatology, The Fourth Military Medical University, 3College of Life Science, Northwest University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, insan mezenkimal kök hücrelerinin kendi kendine toplanmasına dayalı agregalar oluşturmak için bir yöntemi tanımlamakta ve kraniyal kemik defektlerinin rejeneratif tedavisi için morfolojik ve histolojik özellikleri tanımlamaktadır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kendini yenileme yetenekleri ve çok soylu farklılaşma potansiyelleri ile karakterize edilen mezenkimal kök hücreler (MSC'ler), çeşitli kaynaklardan elde edilebilir ve özellikle diş, kemik, kıkırdak ve cildin yenilenmesi için rejeneratif tıp için umut verici adaylar olarak ortaya çıkmaktadır. Özellikle gelişmekte olan mezenkimal yoğunlaşmayı taklit eden hücre kümeleri oluşturan MSC agregasyonunun kendi kendine bir araya getirilen yaklaşımı, korunmuş hücre-hücre etkileşimleri ve mikro çevre nişi olarak hücre dışı matris (ECM) ile birlikte yüksek yoğunluklu kök hücre dağıtımına izin verir. Bu yöntemin verimli hücre aşılamasını ve sağkalımını sağladığı, böylece doku mühendisliğinde eksojen MSC'lerin optimize edilmiş uygulamasını teşvik ettiği ve klinik organ rejenerasyonunu koruduğu gösterilmiştir. Bu makale, göbek kordonu mezenkimal kök hücrelerine (UCMSC'ler) dayalı olarak kendi kendine monte edilen agregaların yapımı ve karakterizasyonu için ayrıntılı bir protokol ve ayrıca kraniyal kemik rejeneratif uygulamasının bir örneğini sunmaktadır. Bu prosedürün uygulanması, doku mühendisliği ve rejeneratif tıp için verimli bir MSC transplantasyon stratejisinin oluşturulmasına rehberlik edecektir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mezenkimal kök hücre (MSC) yoğunlaşması, erken organogenezde 1,2, özellikle kemik, kıkırdak, diş ve ciltoluşumunda vücudun normal büyümesini ve gelişmesini sağlamak için önemli bir aşamadır 1,3,4. Son birkaç on yılda, biyolojik olarak parçalanabilen iskelelerle birlikte kültürlenmiş postnatal MSC'leri kullanan doku mühendisliği tedavileri, osteojenik5 ve kıkırdak rejenerasyonunda6 önemli ilerlemeler kaydetmiştir. Bununla birlikte, iskele....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Tüm hayvan prosedürleri, Dördüncü Askeri Tıp Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır ve Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Ulusal Sağlık Enstitüleri Kılavuzu'na uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Bu çalışma için ticari bir kaynaktan elde edilen dondurularak korunmuş insan UCMSC'leri kullanılmıştır (bkz. İnsan hücrelerinin kullanımı, Dördüncü Askeri Tıp Üniversitesi Etik Kurulu tarafından onaylandı. Prosedürü tanımlamak için UCMSC'ler örnek olarak alınmıştır. Kraniyal defekt, implantasyon prosedürünü tanımlamak için onarım ihtiyacını göstermek için bir örnek olarak a....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Agregalar, deneysel iş akışına göre UCMSC'lerden başarıyla oluşturulabilir (Şekil 1). Agregaların kalitesi, kullanımdan önce morfolojik gözlem ve histolojik analiz yoluyla değerlendirilmelidir. Oluşan lameller yapı, mikroskobik gözlemle dokuma bir desen oluşturmak üzere hücreler birbirine geçecek şekilde tam ve yoğun olmalıdır (Şekil 2A). Kenar kıvırma, toplama sırasında keşfedilebilir; aşırı kıvrılma kenarları, hücresel boşluklar bırakarak başarısız ag.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doku mühendisliği biyoteknolojisindeki ilerlemelerle birlikte, yüksek plastisiteye sahip ve optimal rejenerasyonu sağlayabilen uzun süreli hayatta kalan hücreleri içeren implante edilebilir bir yapı oluşturma stratejileri birçok bilim insanının odak noktası olmuştur. MSC'lerin sadece hücre yöntemleri, sitokinlerle tamamlanan iskeleler 6,24 veya kök hücreler ve iskelelerin5 kombinasyonu gibi çeşitli mevcut .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81930025, 82100969 ve 82071075) ve Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı'ndan (2022YFA1104400 ve 2021YFA1100600) alınan hibelerle desteklenmiştir. Temel Tıp Ulusal Deneysel Öğretim Gösteri Merkezi'nin (AMFU) yardımı için minnettarız.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
% 0.25 Tripsin-EDTA (1x)SigmaT4049Hücre geçişi
Otomatik Dehidrasyon MakinesiLEICAASP200sDehidrat agrega
SantrifüjEppendorf5418RSantrifüj
Santrifüj tüpüThermo Nunc339650Santrifüj
Kültür kabıUCMSC'lerin Termo 150466 Kültürü
EtanolSCR10009218Dehidrat agrega
Ölümcül sığır serumuSijiqing11011-8611UCMSC Kültürü
ForcepJZ JD1080Hasat agregası
GluteraldehitProandy10217-1Agrega
Hematoksilen ve Eozin Boyama Kitifiksasyonu beyotimeC0105SHE boyama
HeksametildisilazanenSCR80068416Kuru agrega yüzeyi
Hoechst33342Sigma14533Hücre çekirdeği boyası
L-glutaminSigmaG5792UCMSC Kültürü
Canlı/ölü Canlılık/Sitotoksisite Kiti InvitrogenL3224Canlı / ölü hücre lekesi
Masson'un Boyama KitiZHCCD069Masson Boyama
Minimum Esansiyel Orta Alfa bazik (1x)GibcoC12571500BTUCMSC Kültürü
ParafinLeica39601006Doku gömme
ParaformaldehitSaint-BioD16013Agrega
PBS (1x)MeilunbioMA0015UCMSC'lerin
Penisilin / StreptomisinProcell Yaşam BilimleriPB180120UCMSC'lerin Kültürü
Pentobarbital sodyumSigmaP3761Hayvan anestezisi
PolisporinPfizerGöz kurumasını önleyin
Taramalı Elektron MikroskobuHitachis-4800SEM gözlemi
MakasJZY00030Hayvan cerrahi insizyonu
Altı kuyulu plakaTermo140675UCMSC Kültürü
DikişJinhuanF603Yakın yaralar
SütürXy4-0Yakın yaralar
Termostatik ekipmanHibev-0001-0005Su banyosu
UCMSCBai'ao & nbsp;UKK220201Ticari olarak UCMSC'ler
C VitaminiDiyibioDY40138-25gAgrega
KsilenSCR10023418Dehidrat agregasını
fiksasyonu, indükleyen

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hall, B. K., Miyake, T. Divide, accumulate, differentiate: cell condensation in skeletal development revisited. The International Journal of Developmental Biology. 39 (6), 881-893 (1995).
  2. Hall, B. K., Miyake, T.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mesenchymal Stem CellsStem Cell AggregatesSelf Assembled AggregatesTissue EngineeringRegenerative MedicineCell EngraftmentExtracellular MatrixCell Cell InteractionsUmbilical Cord MSCsCranial Bone Regeneration
Video Coming Soon

Related Articles