Burada sunulan protokol, görüntü kılavuzluğunda optik koherens tomografi (OCT) için veri toplama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır ve oküler hastalıkların çoklu kemirgen modellerinde uygulanmasını gösterir.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Burada sunulan protokol, görüntü kılavuzluğunda optik koherens tomografi (OCT) için veri toplama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır ve oküler hastalıkların çoklu kemirgen modellerinde uygulanmasını gösterir.
Yaşa bağlı makula dejenerasyonu, glokom, retinitis pigmentosa ve üveit gibi oküler hastalıklara her zaman retinal yapısal değişiklikler eşlik eder. Fundusu etkileyen bu hastalıklar her zaman fotoreseptör hücreleri, retinal ganglion hücreleri, retina kan damarlarındaki hücreler ve koroidal vasküler hücrelerdeki hücreler dahil olmak üzere retinadaki belirli hücre tiplerinde tipik anormallikler gösterir. Noninvaziv, yüksek verimli ve uyarlanabilir görüntüleme teknikleri hem klinik uygulama hem de temel araştırmalar için gereklidir. Görüntü kılavuzluğunda optik koherens tomografi (OCT), fundus fotoğrafçılığı ve yüksek çözünürlüklü OKT'yi bir araya getirerek, küçük lezyonların yanı sıra retina mimarisindeki önemli değişikliklerin doğru teşhisini sağladığı için bu gereksinimleri karşılar. Bu çalışma, görüntü kılavuzluğunda OCT için veri toplama ve veri analizi prosedürlerini detaylandırır ve koroidal neovaskülarizasyon (CNV), optik sinir ezilmesi (ONC), ışığa bağlı retina dejenerasyonu ve deneysel otoimmün üveit (EAU) kemirgen modellerinde uygulamasını gösterir. Bu teknik, göz alanındaki araştırmacıların kemirgen retinal yapısal değişikliklerini rahat, güvenilir ve izlenebilir bir şekilde tanımlamasına yardımcı olur.
Fundusu etkileyen oküler hastalıklar her zaman retinadaki fotoreseptör hücreleri, retinal ganglion hücreleri, retina kan damarlarındaki hücreler ve koroidal kan damarlarındaki hücreler gibi belirli hücre tiplerinde tipik anormallikler sergiler ve bu da daha sonra hastaların görme keskinliğini etkileyebilir1. Geri dönüşü olmayan görme bozukluğunu önlemek için zamanında tanı ve uygun tedaviler gereklidir1. Optik koherens tomografi (OKT), diğerlerinin yanı sıra yaşa bağlı makula dejenerasyonu, retinitis pigmentosa, glokom, üveit ve retina dekolmanı dahil olmak üzere bir dizi oküler hastalığı değerlendirmek için klinikte yaygın olarak kullanılmaktadır 2,3,4. Bu tür noninvaziv, yüksek verimli ve uyarlanabilir görüntüleme tekniği, deney hayvanlarında hastalık koşullarının zamanında değerlendirilmesi için de gereklidir5,6,7,8,9,10.
Görüntü kılavuzluğunda optik koherens tomografi (OCT), 1.8 μm uzunlamasına çözünürlükte ve 2 μm eksenel çözünürlükte hayvan retinalarının kesitsel görüntülerini üretmek için interferometri kullanır. Retinal mimari değişikliklerin araştırılmasında en az üç avantajı vardır: 2,3,4,5,6,7,8,9,10. Birincisi, araştırmacıların aynı hayvan retinasındakiilgilenilen yeri dinamik olarak takip etmelerini sağlayan invaziv olmayan bir tekniktir 5,6,7,8,9,10. İkincisi, bu özellik her deney için örneklem boyutunu önemli ölçüde azaltır3. Bu arada, 2,3,4,5,6,7,8,9,10 araştırma projelerinde önemli ölçüde zaman ve emek tasarrufu sağlar. Üçüncüsü, görüntü kılavuzlu OCT, OCT görüntülerini yakalarken renkli fundus görüntüleri elde eder ve böylece kullanıcılar için doğru ve güvenilir sonuçlar sağlar.
Bu makale, görüntü kılavuzluğunda OCT için görüntü toplama ve veri analizi prosedürlerini açıklar ve koroidal neovaskülarizasyon (CNV)11,12, optik sinir ezilmesi (ONC)13,14,15,16, ışığa bağlı retina dejenerasyonu 17,18,19,20,21 fare ve sıçan modellerinde uygulamasını detaylandırır ve deneysel otoimmün üveit (EAU)22,23. Bu çok yönlü teknikle, araştırmacılar yüksek çözünürlüklü OCT görüntülerinin yanı sıra fundus görüntülerini de rahat ve verimli bir şekilde yakalayabilirler.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm hayvan prosedürleri, Görme ve Oftalmoloji Araştırmaları Derneği'nin Oftalmik ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımına İlişkin Beyanı'na uygundur ve Wenzhou Tıp Üniversitesi (WMU) Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. Sıçanlara ve farelere, 12 saatlik karanlık / aydınlık bir döngüde 18 lux çevresel ışık yoğunluğu ile su ve yiyeceğe ücretsiz erişim verildi.
1. Oküler hayvan modellerinin hazırlanması
2. OCT modülü kurulumu
3. OCT deneyleri için hayvan hazırlığı
4. Görüntü Kılavuzlu OCT Görüntüleme
NOT: Yazılım arayüzü üç bölüme ayrılmıştır: parlak alan görüntüsü, OCT kontrol sekmeleri ve OCT ekranı (Şekil 2).
5. Kalınlık ölçümü ve kantitatif analiz
NOT: Bu OCT yerleşik analiz yazılımına sahiptir. OCT görüntüleri bu yazılım kullanılarak bölümlere ayrılabilir ve analiz edilebilir (Şekil 3).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Görüntü kılavuzluğunda OCT, farelerde lazerle indüklenen koroidal neovaskülarizasyonda (CNV) lazer noktasının gelişimini izlemek için kullanılabilir. Şekil 1'de gösterildiği gibi, yenidoğan kan damarları Bruch zarından ve retina pigment epitel (RPE) tabakasından geçti ve lazer yaralanmasından sonra fibrotik bir skar oluşturdu11,12. Bu lezyon noktası tam boyutlu tarama (Şekil 4A) veya yarım boyutlu tarama...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu protokol, görüntü kılavuzlu OCT'nin görüntü toplama ve kalınlık ölçümü için talimatlar sağlar. Araştırmacılar, oküler hastalıkların en popüler dört kemirgen modelini göstererek, görüntü kılavuzluğunda OCT'nin ciddi retinal yapısal değişiklikleri incelemede mükemmel performans sağladığını buldular. Öyle ki, yüksek çözünürlüklü görüntülerle, OCT görüntülerinde de çok küçük lezyonlar kolaylıkla bulunabilir. Görüntü kılavuzluğunda OCT'nin yardımıyla, laboratuvardaki bir grup ayrıca bir mi...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların hiçbirinin açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Yazarlar, Devlet Anahtar Oftalmoloji, Optometri ve Görme Bilimi Laboratuvarı üyelerine teknik destekleri ve el yazması ile ilgili faydalı yorumları için teşekkür eder. Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82101169, 81800857, 81870690), Çin'in Zhejiang İl Doğa Bilimleri Vakfı (LGD22H120001, LTGD23H120001, LTGC23H120001), Wenzhou Programı Çin Bilim ve Teknoloji Bürosu (Y20211159), Guizhou Bilim ve Teknoloji Destek Projesi (Qiankehezhicheng [2020] 4Y146) ve Devlet Anahtar Oftalmoloji Laboratuvarı Projesi, Optometri ve Görme Bilimi (No. K03-20220205).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| BALB/c fare | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd | Hayvan modeli hazırlıkları | |
| C57BL/6JNifdc fare | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd | Hayvan modeli hazırlıkları | |
| Carbomer Eye Gel | Fabrik GmbH Bausch & Lomb | Korneayı nemlendirin | |
| Komple Freund' s adjuvan | Sigma | F5881 | EAU deneyi |
| Deneysel platform | Phoenix Teknoloji Grubu | Hayvan modeli hazırlıkları | |
| hIRBP161-180 | Şanghay Sangon Biyoloji Mühendisliği Teknolojisi & Hizmetler A.Ş. | EAU deneyi | |
| : Ketamin, | Ceva Sante, Animale, | Genel anestezi | |
| Lazer kutusu | , Haag-Streit Grubu, | Merilas 532α | Hayvan modeli hazırlıkları |
| Lewis sıçan | Pekin Hayati Nehir Laboratuvarı Hayvan Teknolojisi Co, Ltd | Hayvan modeli preparatları | |
| Mycobacterium Tuberculosis< / em> H37RA | Sigma ve nbsp; | 344289 | EAU deneyi |
| Phoneix Micron IV | Technology Group | Hayvan modeli hazırlıkları | |
| Doku forseps | Suzhou Mingren Medical Instrument Co., Ltd | MR-F101A-5 | Hayvan modeli hazırlıkları |
| Tropicamid Fenilefrin Göz Damlası | SANTEN OY, Japonya | Göz dilatasyonu | |
| Vannas makası | Suzhou Mingren Medical Instrument Co., Ltd | MR-S121A | Hayvan modeli hazırlıkları |
| Xylazine | Ceva Sante Animale | Genel anestezi |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste