RESEARCH
Peer reviewed scientific video journal
Video encyclopedia of advanced research methods
Visualizing science through experiment videos
EDUCATION
Video textbooks for undergraduate courses
Visual demonstrations of key scientific experiments
BUSINESS
Video textbooks for business education
OTHERS
Interactive video based quizzes for formative assessments
Products
RESEARCH
JoVE Journal
Peer reviewed scientific video journal
JoVE Encyclopedia of Experiments
Video encyclopedia of advanced research methods
EDUCATION
JoVE Core
Video textbooks for undergraduates
JoVE Science Education
Visual demonstrations of key scientific experiments
JoVE Lab Manual
Videos of experiments for undergraduate lab courses
BUSINESS
JoVE Business
Video textbooks for business education
Solutions
Language
tr_TR
Menu
Menu
Menu
Menu
Research Article
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Erratum Notice
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Retraction Notice
The article Assisted Selection of Biomarkers by Linear Discriminant Analysis Effect Size (LEfSe) in Microbiome Data (10.3791/61715) has been retracted by the journal upon the authors' request due to a conflict regarding the data and methodology. View Retraction Notice
Bir alerjen maruziyet odası (AEC) tesisinde bir meydan okuma yürütmek için bir protokol sunulmaktadır. AEC'lerin, alerjik semptomların indüklenmesi için güvenli ve etkili araçlar olduğu veya stabil partikül konsantrasyonlarını ve çevresel koşulları sürdürme yetenekleri nedeniyle alerjen immünoterapisinin etkinlik testinde bir son nokta olduğu kanıtlanmıştır.
Alerjen maruz kalma odaları (AEC'ler), katılımcıların alerjenik ve alerjik olmayan havadaki partiküllere maruz kalmasına izin veren klinik tesislerdir. Kontrollü çevre koşulları altında kararlı partikül konsantrasyonları sağlarlar. Bu hem tanısal amaçlar hem de tedavi etkilerinin izlenmesi açısından büyük önem taşımaktadır.
Burada, ALL-MED AEC'de havadaki alerjenlere (yani, ev tozu akarı [HDM]) duyarlı hale getirilmiş deneklerde güvenli ve etkili bir alerjen mücadelesi gerçekleştirmek için bir protokol ve teknik ön koşullar sunulmaktadır. Bu yöntemle, alerjik semptomların tetiklenmesi doğal maruziyete karşılık gelir. Bu, alerji teşhisi için veya klinik çalışmalarda, özellikle alerjen immünoterapisi (AIT) için makul bir son nokta olarak kullanılabilir. Odadaki kontrollü bir ortam (sıcaklık, nem ve karbondioksit [CO2]) korunmalıdır. Alerjen parçacıkları, AEC içinde zorluk boyunca kararlı seviyelerde eşit olarak dağıtılmalıdır. Bu sunum için HDM alerjenlerine duyarlı allerjik rinit (AR) hastaları çalışmaya alındı. AR semptomları aşağıdaki parametrelerle değerlendirildi: toplam burun semptom skoru (TNSS), akustik rinometri (ARM), pik burun inspiratuar akımı (PNIF) ve burun sekresyon ağırlığı. Prosedürün güvenliği, pik ekspiratuar akış hızı (PEFR) ve ilk saniyedeki zorlanmış ekspiratuar hacim (FEV1) ile değerlendirildi. Alerjik denekler, denemeden sonraki 120 dakika içinde semptomlar geliştirdi. Ortalama olarak, en yoğun semptomlar 60-90 dakika sonra ortaya çıktı ve bir platoya ulaştıktan sonra denemenin sonuna kadar sabit kaldı.
Hava kaynaklı alerjiler büyüyen bir sosyal sorun haline geliyor. Doğru tanı, alerjene özgü immünoterapinin (AIT) etkinliğinin değerlendirilmesi ve farmakoterapilerin anlaşılması bu konunun ele alınmasında kilit noktalardır. Bununla birlikte, bu prosedürlerin standartlaştırılması, stabil alerjen konsantrasyonları, stabil çevre koşulları (örneğin, nem ve sıcaklık) ve tekrarlanabilir bir şekilde alerjik belirtilere neden olma kabiliyeti gerektirir. Alerjen maruz kalma odaları (AEC'ler), dış etkenlerden bağımsız olarak istikrarlı çevresel koşullar sağlar ve dağınık alerjen parçacıklarının konsantrasyonu, AEC'ler 1,2'deki zorluklar sırasında iyi kontrol edilir ve kararlıdır.
Alerjen meydan okuma testi, havadaki alerjilerin teşhisinin temelidir, çünkü spesifik bir alerjenin alerjik hastalığın semptomları ve ciddiyeti ile klinik ilgisinin doğrudan kanıtını sağlar. Klasik allerjik tanı nazal, konjonktival ve bronşiyal provokasyonları içerir 3,4,5. Bununla birlikte, bir AEC'deki alerjen meydan okuma testi, doğal alerjen maruziyetine en yakıntest gibi görünmektedir 6.
Bu çalışma, doğal maruziyete karşılık gelen önemli alerjik semptomları tetiklemek için bir AEC'de çeşitli hava kaynaklı alerjenleri olan katılımcılara meydan okumanın güvenli ve etkili bir yöntemini sunmayı amaçlamaktadır. Bu yöntem, AIT'nin etkinlik testinde bir son nokta olarak alerjik rinit ve astım da dahil olmak üzere solunum yolu hastalıklarının patolojik özelliklerinin indüklenmesi için uygundur ve farmakolojik tedavilerin klinik gelişimine katkıda bulunabilir ve hızlandırabilir 2,3,7,8,9,10.
Dünyada bir düzineden fazla AEC vardır11. Bununla birlikte, AEC'ler birbirleriyle karşılaştırılabilir değildir, çünkü ayrı ayrı tasarlanmıştır, farklı alerjen türleri kullanırlar (örneğin, ev tozu akarı [HDM], huş ağacı poleni, çim poleni, kedi, paçavra poleni veya Japon sedir poleni) ve dağıtılmış parçacıklar için farklı ölçüm sistemlerine sahiptirler 12,13,14,15,16,17,18,19 . Bu nedenle, her AEC bireysel alerjenler için doğrulanmalıdır. AEC doğrulaması, alerjenin uygun konsantrasyonunun güvenli olmasını ve semptomların hastalarda indüklenmesini sağlar. ALL-MED AEC, HDM alerjenleri20 için onaylanmıştır.
ALL-MED AEC, Polonya'nın Wroclaw kentindeki Tıbbi Araştırma Enstitüsü'nde bulunmaktadır. Tesis, bir deneme sırasında 15-20 kişiyi rahatça ağırlayabilir. Tesis, dış ortamdan gelen parçacıkların girmesini önlemek için bir hava kilidi ile erişilen 12m2'lik bir alana sahip bir odadan oluşmaktadır. Ekipman (koltuklar, duvarlar vb.) eko-deri, plastik ve metal gibi yıkanabilen, yapışkan olmayan, erişilebilir yüzeylerden oluşur. Sandalyeler hareketlidir ve farklı kurulumlara izin verir. Görüntüleme penceresi ve mikrofon iletişimi, nesnelerin sürekli izlenmesini sağlar (Şekil 1). Partikül birikimi bir lazer partikül sayacı (LPC) ile ölçülür. Parçacıklar, 0-20 μm, 20-50 μm ve 50-100 μm dahil olmak üzere farklı aralıklara ayrılabilir ve sonuçlar, belirli bir zaman birimi boyunca (örneğin, her dakika) metreküp başına partikül (p / m3) olarak verilir. AEC'nin yanında, hastaların odaya girmeden önce testlere tabi tutulduğu iki aksesuar odası vardır. Kurtarma ekipmanı, tesiste bulunan bir defibrilatör ve diğer resüsitasyon cihazlarından oluşur. Her zorluk sırasında bir doktor da dahil olmak üzere en az iki sağlık çalışanı bulunmaktadır.
Bu makale, Polonya'daki Wroclaw Tıp Üniversitesi'ndeki Biyoetik Komitesi'nin yönergelerine uyan bir protokol sunmaktadır. Tüm katılımcılar yasal olarak yetkindi ve çalışmaya katılmak için yazılı bilgilendirilmiş onam verdiler. Ayrıca, herhangi bir zamanda herhangi bir sebep göstermeksizin geri çekilme seçeneğine sahip oldukları konusunda bilgilendirildiler.
1. AEC'nin temizlenmesi
NOT: Temizlik, deney gününden daha erken yapılabilir.
2. AEC'nin Çalıştırılması
NOT: Kabindeki atmosfer, deneme sırasında parametrelerin sabit olduğunu tespit eden bir mühendis tarafından düzenli olarak izlenmelidir. Katılımcılar girmeden önce parametreler stabilize edilmelidir.
3. Güvenlik önlemleri
4. Kabinde muayene ve klinik sonlanım noktaları
NOT: Dahil etme ve hariç tutma kriterlerinin yanı sıra katılımcı özellikleri için Ek Tablo 1'e bakınız. Katılımcılar, ALL-MED AEC 20'nin doğrulamasına göre,120 dakikalık bir süre boyunca 5.000 p /m3 konsantrasyonunda HDM alerjenlerine maruz bırakıldı.
AEC ortamı, operasyon süresi boyunca alerjen sayısı (p / m3), sıcaklık, nem ve CO 2 konsantrasyonu açısından izlendi (Şekil 2). HDM alerjen düzeyleri stabil bulundu (Şekil 2A). Ek olarak, hiçbir alerjenin dağıtılmadığı, 0-20 μm aralığında partiküller ve maksimum 50 p /m3 partikül sayısı ile bir çalışma gösterilmiştir (Şekil 2A). AEC'ye giren katılımcılardan kaynaklanan bir parçacık akışı vardı, bu da boş bir odaya kıyasla 15 katılımcı için yaklaşık 100 p /m3 ile sonuçlandı. Sonuç olarak, deneme sırasında LPC tarafından ölçülen değerler, yaklaşık 100 p /m3'lük bir akışa sahip hedef konsantrasyonu içeriyordu.
Eşleştirilmiş veriler Mann-Whitney U testi ile karşılaştırıldı. Değerler p < 0.05 olan tüm testler için istatistiksel olarak anlamlı kabul edildi. İstatistiksel hesaplamalar yapıldı ve grafikler bir grafik programı kullanılarak oluşturuldu.
Pozitif ve negatif sonuçlar arasındaki farkı göstermek için çalışmaya iki grup dahil edildi: alerjik rinit (AR) semptomları olan sekiz HDM alerjik birey ve alerjisi olmayan yedi sağlıklı kontrol (HC) bireyi. Ek Tablo 1, dahil etme ve hariç tutma kriterlerinin yanı sıra katılımcı özelliklerini de sunmaktadır. Katılımcılar, ALL-MED AEC 20'nin doğrulamasına göre,120 dakikalık bir süre boyunca 5.000 p /m3'lük bir konsantrasyonda HDM'ye maruz bırakıldı.
Tüm katılımcılara aşağıdaki testler (ARM, PNIF, PERF, sspirometri) uygulandı ve TNSS sorularını tamamladı ve burun akıntıları toplandı. TNSS ve nazal akıntı ağırlığı AR bireylerde HC grubuna göre anlamlı derecede yüksekti (Şekil 4A, B). TNSS, 60 dakikalık maruziyetten sonra tepe değerlerine ulaştı ve daha sonra platolaştı (p < 0.0001). Ek olarak, burun sekresyon ağırlığı AR grubunda anlamlı olarak yüksekti (p < 0.0001). Akustik rinometride hava yolu açıklığında bozulma fark edildi. MCA, AR grubunu HC grubuyla karşılaştırırken 60 dakikadaki ilk ölçümden sonra önemli ölçüde azaldı. Bu noktadan meydan okumanın sonuna kadar, değerler sabit kaldı (p < 0.001). Bu, aynı konsantrasyonlarda (p < 0.01) önemli bir azalmanın gözlendiği PNIF ölçümleriyle aynı fikirdedir (Şekil 4C, D).
FEV1 ve PEFR, AEC mücadelesi sırasında ölçülmüştür (Şekil 4E, F). Ek olarak, katılımcılar PEFR'lerini mücadeleden sonra 4 saat ve 24 saat evde ölçtüler ve sonuçları posta ile geri gönderdiler. Değerler normal aralıktaydı ve meydan okuma sırasında ve sonrasında 24 saate kadar sabit kaldı. AR'li alerjik denekler ile HC'ler arasında istatistiksel olarak anlamlı bir fark bulunmamıştır, bu da HDM alerjen maruziyetinin her iki grupta da akciğer fonksiyonu üzerinde hiçbir etkisi olmadığını düşündürmektedir.

Şekil 1: AEC'nin şematik düzeni. Katılımcılar hava kilidinden girerler. Parçacıklar, bilgisayar kontrollü bir besleyici tarafından hava delikleri sistemi aracılığıyla dağıtılır. AEC koşulları (partikül konsantrasyonu, CO2 konsantrasyonu, nem ve sıcaklık) bir LPC tarafından sürekli olarak izlenir. Katılımcılar pencere ve ses bağlantısı ile izlenir. Kısaltmalar: AEC = alerjene maruz kalma odası; CO2 = karbondioksit; LPC = lazer parçacık sayacı. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Deneme sırasında AEC'deki ortamın stabilitesinin temsili sonuçları . (A) Partikül konsantrasyonu değerlendirildi ve LPC ile 0-20 μm aralığında bulundu. HDM alerjenlerinin konsantrasyonu için hedef değer 5.000 p /m3 idi. Karşılaştırma için, alerjenin kullanılmadığı bir çalışma gösterilmiştir. (B) Nem, (C) CO2 konsantrasyonu ve (D) ve sıcaklık gösterilir. Kısaltmalar: °C = santigrat derece; CO2 = karbondioksit; HDM = ev tozu akarı; LPC = lazer partikül sayacı; m = metre; min = dakika(lar); p = parçacıklar; ppm = milyonda parça. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: AEC mücadelesi sırasında gerçekleştirilecek testlerin zaman noktalarıyla birlikte listesi (her katılımcı için). Bireysel testlerin zamanında yapılmasını sağlamak için, katılımcılar AEC'ye her 10 dakikada bir girmelidir. Sonuç olarak, her katılımcı için test farklı gerçek zamanlarda yapılacaktır. Ayrıca, zaman kayması, personelin test sırasında katılımcılara yardımcı olmasını sağlar. Kısaltmalar: AEC = alerjene maruz kalma odası; ARM = akustik rinometri; FEV1 = ilk saniyede zorla ekspiratuar hacim; PEFR = pik ekspiratuar akış hızı; PNIF = tepe burun inspiratuar akışı; TNSS = toplam burun semptomu skoru. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: AR (kırmızı çubuklar) ve HC'li (mavi çubuklar) hastalarda AEC mücadelesi sırasında farklı sonlanım noktalarının temsili sonuçları. Sırasıyla sekiz ve yedi katılımcı dahil olmak üzere HMD ile tetiklenen alerji denekleri (AR ile) ve HC, AEC'de 5.000 p /m3'lük HDM alerjen konsantrasyonlarına maruz kalmıştır. (A) Burun sekresyon ağırlığı, (B) burun semptomları, (C) akustik rinometride MCA, (D) PNIF, (E) PEFR ve (F) FEV1 değerlendirildi. Sonuçlar, ortalama değere sahip bireysel kopyalar olarak sunulur. Kısaltmalar: AEC = alerjene maruz kalma odası; AR = alerjik rinit; FEV1 = ilk saniyede zorla ekspiratuar hacim; HC = sağlıklı kontroller; HDM = ev tozu akarı; g = gram(lar); MCA = minimum kesit alanı; p = parçacıklar; PEFR = pik ekspiratuar akış hızı; PNIF = tepe burun inspiratuar akışı; TNSS = toplam burun semptomu skoru. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.
| belirti | TV ekranında görüntülenen soru | Her semptom için TNSS puanı |
| Rinore | Burun akıntınızın şu anda nasıl olduğunu değerlendirin | 0 = yok (belirti tamamen yok) |
| burun tıkanıklığı | Burun tıkanıklığınızın şu anda nasıl olduğunu değerlendirin | 1 = hafif (semptom mevcut, ancak üzücü değil) |
| Hapşırma | Hapşırığınızın şu anda nasıl olduğunu değerlendirin | 2 = orta (semptom sıkıntılı, ancak tolere edilebilir) |
| burun kaşıntısı | Burun kaşıntınızın şu anda nasıl olduğunu değerlendirin | 3 = şiddetli (semptom sert tolere edilebilir, maksimum yoğunluk) |
| Toplam 0 - 12 puan |
Tablo 1: TNSS için semptomlar ve skor yöntemi. Katılımcılar tarafından dört semptomu değerlendirmek için bir derecelendirme sistemi kullanıldı. Anket sonuçları bir değer olarak sunulur - belirli bir süre için dört soru için toplam puan (denemeden önce ve denemenin her 30 dakikasında). Kısaltma: TNSS = toplam burun semptomu skoru.
Ek Tablo 1: Çalışmaya dahil edilme ve dışlanma kriterleri ve çalışmaya katılan katılımcıların özellikleri. HDM tarafından tetiklenen AR semptomları olan sekiz hasta ve semptomsuz (HCs) yedi hasta. Kısaltmalar: AR = alerjik rinit; Df = Dermatophagoides farina; Dp = Dermatophagoides pteronyssinus; F = kadın; HC = sağlıklı kontrol; HDM = ev tozu akarı; kU/L = kilo birim/litre; M = erkek; md = ortalama çap; sIgE = spesifik immünoglobulin E; SPT = deri prick testi. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Marek Jutel, ALK-Abello, Allergopharma, Stallergenes, Anergis, Allergy Therapeutics, Leti, HAL, GSK, Novartis, Teva, Takeda ve Chiesi'den kişisel ücretler bildirmektedir. Diğer yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Bir alerjen maruziyet odası (AEC) tesisinde bir meydan okuma yürütmek için bir protokol sunulmaktadır. AEC'lerin, alerjik semptomların indüklenmesi için güvenli ve etkili araçlar olduğu veya stabil partikül konsantrasyonlarını ve çevresel koşulları sürdürme yetenekleri nedeniyle alerjen immünoterapisinin etkinlik testinde bir son nokta olduğu kanıtlanmıştır.
Yayın, Fen Bilimleri ve Yükseköğretim Bakanlığı tarafından 2019-2022 yılları için "Bölgesel Mükemmeliyet Girişimi" programında verilen fonlardan finanse edilen bir proje kapsamında, 016/RID/2018/19 proje numarası, 11 998 121.30 PLN fon tutarı ve SUB sübvansiyonu ile hazırlanmıştır. Wroclaw, Polonya'daki Tıp Üniversitesi'nden A020.21.018.
| Alerjene maruz kalma odası (AEC) | özel olarak yapılmış | --- | hava besleme kanalı ile (HEPA filtreli) ve alerjen bilgisayar kontrollü bir besleyici aracılığıyla AEC'ye üflenir |
| Akustik rinometre & nbsp; | GM Instruments (Irvine, İngiltere) | Sağ ve sol burun delikleri için konturlu, yeniden kullanılabilir plastik uçlara sahip | A1 klinik/ araştırma |
| Hava nemlendirici | Ohyama | SHM120D | |
| Hava kalitesi ölçer | AZ Instrument | Green Eye VZ 7798 | termometre, nem ve CO2 metre |
| Klima | DeLonghi | CKP 20EB | sıcaklık aralığı 18 - 25 ° C; C |
| Tavan vantilatörler | Argos | Manhattan Tavan Vantilatörü - 432/8317 | |
| Bilgisayar kontrollü besleme istasyonu | ısmarlama | --- | "enjeksiyon uzunluğu", "enjeksiyonlar arasında kopma", " kontrolü ile hava beslemesi" |
| Tek kullanımlık tulumlar | VWR (Radnor, Pensilvanya, Amerika Birleşik Devletleri) | kapüşonlular | |
| ile Zemin vantilatörleri | AEG | TVL 5537, sütun | |
| Grafik programı | GraphPad Software Inc. | Graph Pad Prism, v. 9.4.0 | |
| Ev tozu akarı (HDM) | Allergopharma (Reinbek, Almanya) | özelleştirilmiş sipariş | kurutulmuş, saflaştırılmış Dermatophagoides pteronyssinus (Dp) akar gövdeleri, 4 &°C'de saklanır; Kullanana kadar C |
| İnspiratuar akış ölçer | Clement Clarke International Ltd. (Harlow, Birleşik Krallık) | 30 - 370 L/dk arasında inspiratuar akışı ölçen, tek kullanımlık maskeli (M boy) | taşınabilir inspiratuar akış ölçer |
| Lazer partikül sayacı (LPC) | Lighthouse Worldwide Solutions (ABD) | SOLAIR Boulder Counte | |
| Mikrofon sistemi | Auna | VHF kablosuz mikrofon sistemi | |
| Tepe akış maddesi (PFM) | CareFusion (Basingstoke, Birleşik Krallık) | Tekkullanımlık kağıt uçlarla | 60 – 900 L/dk standart aralığına sahip MicroPeak |
| Anketleri doldurmak için uzaktan kumandalar | Torna Teknolojileri Pilot | TT ResponseCard LT, SAP: | TT LT testleri için 32 uzaktan kumanda setini | G040602A010
| Spirometer | Medizintechnik AG (Zürih, İsviçre) | EasyOne 2001, NDD | tek kullanımlık kağıt uçları ile; spirometre ISO 26 782: 2009 standardını karşılamalıdır; Spirometrenin günlük kalibrasyonu gereklidir |
| TV ekranı | Seviye | bir 32" | |
| Vakumlu | Siemens | aşırı sessizlikHEPA | filtreli | güç VSQ5X1230