Yöntem makalesi

Tüm Hücre Yama-Kelepçe Tekniği ile H9c2 Kardiyomiyositlerine Voltaja Bağlı Potasyum Akımı Kaydı

3.3K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/64805

⸱

11 Kasım 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Chengdu Techman Instrument Co., Ltd., 3Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Research Institute of Integrated TCM & Western Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5School of Ethnic Medicine, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokol, tüm hücre yama kelepçesi tekniğini kullanarak H9c2 kardiyomiyositlerinde voltaj kapılı potasyum (Kv) kanal akımlarının gerçek zamanlı ve dinamik olarak elde edilmesi için etkili bir yöntem tanımlamaktadır.

Özet

Miyokard hücre zarı üzerindeki potasyum kanalları, hücre elektrofizyolojik aktivitelerinin düzenlenmesinde önemli bir rol oynamaktadır. Ana iyon kanallarından biri olan voltaj kapılı potasyum (Kv) kanalları, ilaca bağlı miyokard hasarı ve miyokard enfarktüsü gibi bazı ciddi kalp hastalıkları ile yakından ilişkilidir. Bu çalışmada, H9c2 kardiyomiyositlerinde 1.5 mM 4-aminopiridin (4-AP, geniş spektrumlu potasyum kanal inhibitörü) ve akonitinin (AC, 25 μM, 50 μM, 100 μM ve 200 μM) Kv kanal akımı (IKv) üzerindeki etkilerini belirlemek için tüm hücre yama-kelepçe tekniği kullanılmıştır. 4-AP'nin IKv'yi yaklaşık% 54 oranında inhibe ettiği, AC'nin I Kv üzerindeki inhibitör etkisinin doza bağımlı bir eğilim gösterdiği bulunmuştur (25μM için etki yok, 50 μM için% 30 inhibitör oran, 100 μM için% 46 inhibitör oranı ve 200 μM için% 54 inhibitör oranı). Daha yüksek duyarlılık ve hassasiyet özellikleri nedeniyle, bu teknik kardiyotoksisitenin araştırılmasını ve etnotıbbın iyon kanallarını hedeflemesinin farmakolojik etkilerini teşvik edecektir.

Giriş

İyon kanalları, hücre zarının lipit çift katmanına gömülü özel entegre proteinlerdir. Aktivatörlerin varlığında, bu tür özel entegre proteinlerin merkezleri, uygun boyut ve yükteki iyonların pasif bir taşıma yöntemiyle geçmesine izin veren oldukça seçici hidrofilik gözenekler oluşturur1. İyon kanalları, hücre uyarılabilirliğinin ve biyoelektriğin temelidir ve çeşitli hücresel aktivitelerde önemli bir rol oynar2. Kalp, aksiyon potansiyelleri tarafından başlatılan uyarılma-kasılma-birleşmiş bir süreçten kaynaklanan düzenli kasılmalar yoluyla diğer organlara kan sağlar3. Önceki çalışmalar, kardiyomiyositlerde aksiyon potansiyellerinin oluşumunun hücre içi iyon konsantrasyonundaki değişimden kaynaklandığını ve insan kardiyomiyositlerinde Na +, Ca2 + ve K + iyon kanallarının aktivasyonu ve inaktivasyonunun belirli bir sırayla aksiyon potansiyellerinin oluşumuna yol açtığını doğrulamıştır 4,5,6. Bozulmuş voltaj kapılı potasyum (Kv) kanal akımları (IKv) normal kalp ritmini değiştirebilir ve önde gelen ölüm nedenlerinden biri olan aritmilere yol açabilir. Bu nedenle, IKv'nin kaydedilmesi, hayatı tehdit eden aritmilerin tedavisinde kullanılan ilaçların mekanizmalarını anlamak için kritik önemesahiptir 7.

Kv kanalı, potasyum kanalının önemli bir bileşenidir. Kv kanalının koordinasyon fonksiyonu, memeli kalbinin elektriksel aktivitesinde ve miyokard kontraktilitesinde önemli bir rol oynar 8,9,10. Kardiyomiyositlerde, aksiyon potansiyellerinin genliği ve süresi, dışa doğru K + akımlarının çoklu Kv kanalı alt tipleri11 tarafından birlikte iletilmesine bağlıdır. Kv kanal fonksiyonunun düzenlenmesi, kardiyak aksiyon potansiyelinin normal repolarizasyonu için çok önemlidir. Kv iletkenliğindeki en ufak bir değişiklik bile kardiyak repolarizasyonu büyük ölçüde etkiler ve aritmi olasılığını arttırır12,13.

Hücresel elektrofizyolojik araştırmalarda temel bir yöntemi temsil eden hücre zarının küçük bir alanı ile tüm hücre yama-kelepçe kaydı için pipet ucu arasında negatif basınç uygulanarak yüksek dirençli bir sızdırmazlık oluşturulabilir. Sürekli negatif basınç, hücre zarının pipet ucuyla temas etmesini ve pipetin iç duvarına yapışmasını sağlar. Ortaya çıkan tam elektrik devresi, hücre zarı14'ün yüzeyi boyunca herhangi bir tek iyon kanalı akımının kaydedilmesini sağlar. Bu teknik, hücre zarı iyon kanalı akımı için çok yüksek bir hassasiyete sahiptir ve tüm iyon kanallarındaki akımları tespit etmek için kullanılabilir ve uygulamalar son derece geniştir15. Ayrıca, floresan etiketleme ve radyoaktif etiketleme ile karşılaştırıldığında, yama kelepçesi daha yüksek otorite ve doğruluğa sahiptir16. Şu anda, tüm hücre yama-kelepçe tekniği, Kv kanal akımlarına etki eden geleneksel Çin tıbbı bileşenlerini tespit etmek için kullanılmıştır17,18,19. Örneğin, Wang ve ark. tüm hücre yama-kelepçe tekniğini kullandılar ve lotus tohumunun etkili bileşeninin, aktif durum kanallarını bloke ederek Kv4.3 kanalının inhibisyonunu sağlayabileceğini doğruladılar19. Aconitine (AC), Aconitum carmichaeli Debx ve Aconitum sarkaç Busch gibi Aconitum türlerinin etkili ve aktif bileşenlerinden biridir. Çok sayıda çalışma, aşırı dozda AC'nin aritmilere ve hatta kalp durmasına neden olabileceğini göstermiştir20. AC ve voltaj kapılı iyon kanalları arasındaki etkileşim, kardiyotoksisitenin anahtar mekanizması olan hücre içi iyon homeostazının bozulmasına yol açar21. Bu nedenle, bu çalışmada, AC'nin kardiyomiyositlerin IKv'si üzerindeki etkilerini belirlemek için tüm hücre yama-kelepçe tekniği kullanılmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Ticari olarak elde edilen H9c2 sıçan kardiyomiyositleri ( Malzeme Tablosuna bakınız), %5 CO2 nemlendirilmiş bir atmosferde 37 °C'de %10 ısıl inaktive fetal sığır serumu (FBS) ve %1 penisilin-streptomisin içeren DMEM'de inkübe edildi. Daha sonra normal H9c2 hücrelerinde ve 4-AP veya AC ile tedavi edilen hücrelerde IKv'deki değişiklikleri tespit etmek için tüm hücre yama-kelepçe tekniği kullanıldı (Şekil 1 ve Şekil 2).

1. Çözelti hazırlama

  1. % 10 FBS ve% 1 penisilin-streptomisin içeren DMEM hücre kültürü ortamını hazırlayın (bkz.
  2. 100 μL DMSO çözeltisine 14,1165 mg 4-AP ekleyerek 1,5 M 4-AP çözeltisi hazırlayın (bkz. Hücre dışı çözeltiyi ekleyerek 1,5 M 4-AP'yi 1,5 mM'ye seyreltin (adım 1,5).
  3. 19.36 μL DMSO çözeltisine 5 mg AC ekleyerek 400 mM AC hazırlayın (bkz.
    NOT: Yukarıdaki tüm çözeltiler 4 °C'lik bir buzdolabında saklanmıştır ve DMSO'nun nihai konsantrasyonu %0,1'i (v/d) geçmemelidir.
  4. 50 mL çift damıtılmış suya 0,4100 g KCl (110,0 mM), 0,0120 g MgCl 2 (1,2 mM), 0,1270 g Na2 ATP (5,0 mM), 0,1190 g HEPES (10,0 mM) ve 0,1900 g EGTA (10,0 mM) ekleyerek 50 mL hücre içi çözelti hazırlayın (bakınız Tablo 1 ve Malzeme Tablosu).
    NOT: Hücre içi çözeltinin pH değeri, 1 M KOH kullanılarak 7.2'ye ayarlandı ve küçük hacimlere (1.5-2 mL) aliquoted edildi ve -20 ° C'de saklandı.
  5. 50 mL çift damıtılmış suya 0,0185 g KCl (5,0 mM), 0,3945 g NaCl (135,0 mM), 0,0203 g MgCl 2·6H2O (2,0 mM), 0,0595 g HEPES (5,0 mM) ve 0,0990 g D-glikoz (10,0 mM) ekleyerek 50 mL hücre dışı çözelti hazırlayın (bakınız Tablo 1 ve Malzeme Tablosu).
    NOT: Hücre dışı çözelti hemen kullanım için hazırlanmalı ve pH değeri 1 M NaOH kullanılarak 7,4'e ayarlanmalıdır.

2. Hücre kültürü

  1. H9c2 kültür kabı% 80 birleştiğinde, hücreleri 30 saniye boyunca% 0.25 tripsin ile sindirin.
  2. Normal ortam veya ilaç içeren ortama (25 μM, 50 μM, 100 μM ve 200 μM AC) sahip kültür 2 x 10 5 hücre/mL, 37 °C'de 24 saat boyunca cam plakalarla halı kaplı35 mm'lik bir tabakta, %5 CO2 atmosferi ve %70 ila %80 bağıl nem oranı ile (bkz.

3. Mikropipet imalatı

  1. Mikropipet çektirme makinesini açın ( bkz. Malzeme Tablosu) ve 30 dakika boyunca ön ısıtın.
  2. Mikropipet çektirme makinesine filamentli (OD: 1,5 mm, ID: 1,10 mm, 10 cm uzunlukta) bir borosilikat cam kılcal damar koyun. Adım 3.3'te ayarlanan programı seçin ve kontrol panelinde Enter tuşuna basın. Cam kılcal damarın "Isı" değerini belirlemek için sağ üst köşedeki Rampa programına tıklayın.
  3. "Rampa" testi ile belirlenen değere göre elektrodu çekme programını yazın ve aşağıdaki adımları kullanın: "Isı" değeri = "Rampa" değeri, Çekme = 0, Vel = çekme çubuğu hareket hızı, Zaman = 200-250. Pipetleri üretmeye başlamak için Çek'e tıklayın.
    NOT: Kullanmadan önce mikropipet çektiricinin kapalı kabındaki kurutuculara dikkat edin. Renk maviden pembeye değişirse, kurutucular değiştirilmelidir. Elektrot ucunun kirlenmesini önlemek için, pipet hazırlığı sırasında cam kılcal damarın orta kısmına dokunmamaya çalışın. Daha sonra, üretilen pipetleri dikkatlice çıkarın ve kapalı ve kapalı bir kaba koyun.

4. Cihaz kurulumu

  1. İlgili cihazları aşağıdaki sırayla açın: dijital-analog dönüştürücü, sinyal amplifikatör, mikromanipülatör, mikroskop ve kamera (bkz.
  2. Görüntüleme uygulamasını, sinyal amplifikatör yazılımını ve veri toplama yazılımını sırayla açın (bkz.
    NOT: Cihaz sırayla açılmalıdır; aksi takdirde, yazılımı açtıktan sonra "Demo Sayısallaştırıcı" durumu görünecektir.

5. IKv parametre ayarı

  1. Aşağıdaki adımları izleyerek IKv'yi kaydetme protokolünü düzenleyin.
    1. Düzenle'ye tıklayın ve veri toplama yazılımında Protokolü Düzenle'yi seçin (bkz.
    2. Programı "Dalga Formu" arayüzünde düzenleyin: Epoch A (İlk seviye = -60 mV, Delta seviyesi = 0 mV, İlk süre = 20 ms ve Delta süresi = 0 ms); B Dönemi (Birinci düzey = -40 mV, Delta düzeyi = 10 mV, İlk süre = 150 ms ve Delta süresi = 0 ms) ve Dönem C (Birinci düzey = -60 mV, Delta düzeyi = 0 mV, İlk süre = 30 ms ve Delta süresi = 0 ms).
    3. Ardından, Mod/Hız arayüzüne tıklayın ve "Deneme Hiyerarşisi" verilerini ayarlayın: Deneme gecikmesi = 0 s, Çalıştırma = 1, Süpürme = 11 ve Süpürme süresi = 0,22 s22,23.
      NOT: IKv kanal akımlarını, kontrol koşulları altında -60 mV'luk bir tutma potansiyelinde 10 mV'luk bir artışla -40 mV'den +60 mV'a kadar 150 ms depolarize edici adımlar uygulayarak elde edin. Protokolün toplam süresi, "Dalga Formu" programında ayarlanan süreden daha büyük olmalıdır.
  2. P / N Sızıntı Çıkarma programını düzenleyin: Uyaran düğmesini seçmek için Protokolü Düzenle'ye tıklayın ve P / N Sızıntı Çıkarma iletişim kutusunda sızıntı çıkarma programını ayarlayın: Alt Süpürme sayısı = 2-8 (bu çalışmada 4), Yerleşme süresi = 100-1.000 ms (bu çalışmada 200), "Polarite" = "Dalga formunun karşısında", tutma seviyesi = -80 mV.
    NOT: P/N Sızıntısı çıkarma işlemi, "İlk tutma"dan (-60 mV) daha düşük bir tutma seviyesine sahip olmalıdır.

6. I Kv'nin voltaj kelepçesi modunda tüm hücre yama kelepçesi kaydı

  1. Veri depolama yolunu oluşturun: Dosya'ya tıklayın ve veri toplama yazılımında Veri Dosyası Adlarını Ayarla'yı seçin. Veri toplama yazılımında Düzenle'yi seçipProtokolü Aç'a tıklayarak oluşturulan I Kv protokolünü (adım 5.1) açın. Son olarak, Araçlar seçeneğine tıklayın ve protokolü çalıştırmaya başlamak için Membran Testi'ni seçin.
  2. Hücre dışı çözeltiyi (adım 1.5) tüm hücre yama kelepçesi aparatı üzerindeki hücre banyosuna ekleyin (bkz. Malzeme Tablosu) ve kapak kaymasını banyodaki H9c2 hücreleri (adım 2.1'de kültürlenmiş) ile yukarı doğru yerleştirin.
  3. Pipetin %30'unu (3. adımda imal edilmiştir) hücre dışı çözelti ile doldurun ve patch-kelepçe aparatına entegre edilmiş kayıt elektrot tutucusuna takın. Pipetleri o-ring kauçuk conta ve plastik rondela sıkın. Ardından, pipeti mikromanipülatör ile banyoya bırakın. IKv akım taban çizgisini 0 pA'da tutmak için sinyal amplifikatör yazılımının Pipet ofset arayüzüne tıklayın (bkz.
    NOT: Hücre içi çözelti (adım 1.4) gümüş telin AgCl/Ag kısmı ile temas halinde olmalı ve gümüş tel pipetin iç duvarına yakın olmamalıdır. Pipetin direnci 2-6 MΩ olmalıdır. Pipet ucunun tıkanmasını önlemek için, plastik boru24 aracılığıyla kayıt elektrot tutucusuna bağlı 1,0 mL'lik bir şırınga kullanılarak pipete sürekli bir pozitif basınç verilmelidir.
  4. Kayıt elektrodu tutucusuna plastik bir tüp aracılığıyla bağlı 1,0 mL'lik bir şırınga ile manuel olarak uygun bir pozitif basınç verin. Mikromanipülatörü hücreyle temas edecek şekilde üç boyutlu olarak manipüle ederek pipeti hafifçe hareket ettirin.
  5. Pipet hücre zarına dokunduktan sonra membran testi kare dalgası 1/3 ila 1/2 oranında düştüğünde, pozitif basıncı çıkarın ve manuel olarak uygun bir negatif basınç verin. Ardından, GΩ mührünü oluşturmak için veri toplama yazılımının Patch arayüzüne tıklayın. Hızlı ve yavaş kapasitansı telafi etmek için hücre sızdırmazlığı sırasında "C p Hızlı" ve "Cp Yavaş" sinyal amplifikatörü yazılımını kullanın.
    NOT: Membran testi ≥1 GΩ olduğunda, pipet ucu ile hücre arasında hücreye bağlı bir konfigürasyon oluşturulur.
  6. Hücre zarının bir yamasını yırtmak için kısa negatif basınç darbeleri uygulayın.
    NOT: Membran direncindeki hızlı bir azalma, başarılı bir tüm hücre kayıt modelini karakterize eder. Erişim direnci (Ra) ≥30 MΩ ise, hücreler 6.3-6.6 adımları için yeniden seçilmelidir. Kaydedilen I Kv verilerinin doğruluğunu sağlamak için, hücre zarı kırıldıktan sonra negatif basınç çıkarılmalıdır.
  7. Sinyal amplifikatör yazılımının Tüm hücre düğmesine tıklayarak tüm hücre membran kapasitans kompanzasyonunu yürütün. Son olarak, Veri kaydı düğmesine tıklayarak verileri kaydedin ve kaydedin .
  8. Kaydedilen I Kv verilerini veri analiz yazılımı ile açın. Akım-gerilim (I−V) ilişkilerini kaydedin: Aşağıdakileri yapmak üzere İstatistikler'i seçmek için Analiz Et'e tıklayın: Veri analizi için Aralığı Kusorlar 1,2 olarak seçin; Tepe Genliği ve Ortalama düğmelerine tıklayın ve ardından Sonuçlar sayfasındaki verileri görüntülemek için Tamam'a tıklayın. Son olarak, daha fazla analiz için IKv ortalama veri sütununu fonksiyon çizim yazılımına kopyalayın (bkz.
  9. Temsilci IKv geçerli izlerini kaydedin: Transfer İzleri'ni seçmek için Düzenle'ye tıklayın; Ardından, aktarılacak Bölgedeki Tam izlemeyi seçin; Ardından, İzleme Seçiminde Seç'e tıklayın ve Sinyaller'de IN 0 (pA) öğesini seçin; Son olarak, "Sonuçlar" sayfasındaki verileri görüntülemek için Tamam'a tıklayın ve mevcut izleri çizmek için toplam verileri işlev çizim yazılımına kopyalayın.
  10. IKv protokolünü kaydedin: Uyaran Dalga Formu Sinyali Oluştur'u seçmek için Düzenle'ye tıklayın ve Tamam'ı seçin. Ardından, "Sinyaller" bölümünde A0 # 0 (mA) seçmek dışında adım 6.9'u yineleyin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokol, IKv'nin tüm hücre yama-kelepçe tekniğinde ayarlanan parametrelere göre kaydedilmesine izin verdi. IKv, -60 mV'luk bir tutma potansiyelinde -40 ila +60 mV'luk bir depolarizan darbe uyaranı ile 150 ms depolarizan darbe uyaranı ile tetiklendi (Şekil 3A). H9c2 sıçan kardiyomiyositlerinin IKv'si ilk önce -20 mV civarında ortaya çıktı ve daha sonra genlik daha fazla depolarizasyon ile arttı. IKv ve membran potansiyeli arasındaki ortalama ili...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Yama-kelepçe elektrofizyolojik tekniği esas olarak hücre zarı25 üzerindeki iyon kanallarının elektriksel aktivitesini ve fonksiyonel özelliklerini kaydetmek ve yansıtmak için kullanılır. Şu anda, yama kelepçe tekniğinin ana kayıt yöntemleri arasında tek kanallı kayıt ve tüm hücre kaydı26 bulunmaktadır. Tüm hücre modu için, cam mikroelektrot ve negatif basınç, hücre zarının küçük bir alanı ile pipet ucu27 arasında yüksek dirençli bir conta oluşturmak ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Teşekkürler

Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'nın (82130113) ve Qinghai Eyaleti Bilim ve Teknoloji Departmanının Anahtar Ar-Ge ve Dönüşüm Programı'nın (2020-SF-C33) finansal desteğini takdir ediyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
4-AminopiridinSigmaMKCJ2184
AconitineChengdu Lemetian Medical Technology Co., LtdDSTDW000602
AmplifikatörAkson EnstrümanıMultiClamp 700B
Analitik TeraziSartorius124S-CW
ATP Na2Solarbio416O022
Filamentli borosilikat cam (OD: 1.5 mm, ID: 1.10 mm, 10 cm uzunluk) Sutter Instrument163225-5
Hücre kültürü kabı (100 mm)Zhejiang Sorfa Life Science Research Co., Ltd1192022
Hücre kültürü kabı (35 mm)Zhejiang Sorfa Life Science Research Co., Ltd3012022
Clampex yazılımıMolecular Devices, LLC.Sürüm 10. 5
Clampfit yazılımıMolecular Devices, LLC.Sürüm 10. 6. 0. 13veri toplama yazılımı
D-(+)-glikozRhawnRH289133
Dijital kameraHamamatsuC11440
SayısallaştırıcıAxon EnstrümanAxon digidata 1550B
DMSOBoster Biological Technology Co., LtdPYG0040
Dulbecco'nun modifiye kartal ortamı (1x)Gibco8121587
EGTABiofroxxEZ6789D115
Fetal sığır serumuGibco2166090RP
Alevli/kahverengi mikropipet çektirmeSutter Enstrüman ModeliP-1000
H9c2 hücreleriHunan Fenghui Biyoteknoloji Co, LtdCL0111
HCImageLiveHamamatsu4.5.0.0
HClSichuan Xilong Scientific Co., Ltd2106081
HEPESXiya Kimya Teknolojisi (Shandong) Co., Ltd20210221
KClChengdu Colon Chemical Co., Ltd2020082501
KOHChengdu Colon Chemical Co., Ltd2020112601
MgCl2Tianjin Guangfu İnce Kimyasal Araştırma Enstitüsü20160408
MgCl2 ve orta nokta; 6H2OChengdu Colon Chemical Co., Ltd2021020101
MikromanipülatörSutter AletiMP-285A
MikroskopOlympusIX73
Mikroskop kapak camı (20 ve kez; 20 mm)Jiangsu Citotest Deneysel Ekipman Co, Ltd80340-0630
Milli-QChengdu Biyobilim Technology Co, LtdMilli-Q IQ 7005
MultiClamp 700B komutanıAxon InstrumentMultiClamp komutanı 2.0sinyal amplifikatörü yazılımı 
OriginPro 8 yazılımıOriginLab Corporationv8.0724 (B724)
Penisilin-Streptomisin (100x)Boster Biological Technology Co., Ltd17C18B16
PH  metre Mettler ToledoS201K
Fosfat tamponlu salin (1x)Gibco8120485
Tripsin %0,25 (1x)HyCloneJ210045

Kaynaklar

  1. Luan, Q. H. Passive transport and ion channels in biofilms. Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Intramongoljcae. 2, 215-235 (1984).
  2. Lei, M., Sun, S. Advances in the mechanism of arrhythmia induced by sodium channel disease. Journal of Clinical Cardiology. 21 (4), 246-248 (2005).
  3. Varró, A., et al. Cardiac transmembrane ion channels and action potentials: Cellular physiology and arrhythmogenic behavior. Physiological Reviews. 101 (3), 1083-1176 (2021).
  4. Campuzano, O., et al. Negative autopsy and sudden cardiac death. International Journal of Legal Medicine. 128 (4), 599-606 (2014).
  5. Amin, A. S., Asghari-Roodsari, A., Tan, H. L. Cardiac sodium channelopathies. Pflügers Archiv: European Journal of Physiology. 460 (2), 223-237 (2010).
  6. Benitah, J. P., et al. Voltage gated Ca2+ currents in the human pathophysiologic heart: A review. Basic Research in Cardiology. 97 (1), 111-118 (2002).
  7. Banyasz, T., Horvath, B., Jian, Z., Izu, L. T., Chen-Izu, Y. Sequential dissection of multiple ionic currents in single cardiac myocytes under action potential-clamp. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 50 (3), 578-581 (2011).
  8. Nerbonne, J. M. Molecular basis of functional myocardial potassium channel diversity. Cardiac Electrophysiology Clinics. 8 (2), 257-273 (2016).
  9. Grant, A. O. Cardiac ion channels. Circulation: Arrhythmia and Electrophysiology. 2 (2), 185-194 (2009).
  10. Olson, T. M., et al. Kv1.5 channelopathy due to KCNA5 loss-of-function mutation causes human atrial fibrillation. Human Molecular Genetics. 15 (14), 2185-2191 (2006).
  11. Christophersen, I. E., et al. Genetic variation in KCNA5: impact on the atrial-specific potassium current IKur in patients with lone atrial fibrillation. European Heart Journal. 34 (20), 1517-1525 (2013).
  12. Barry, D. M., Xu, H., Schuessler, R. B., Nerbonne, J. M. Functional knockout of the transient outward current, long-QT syndrome, and cardiac remodeling in mice expressing a dominant-negative Kv4 alpha subunit. Circulation Research. 83 (5), 560-567 (1998).
  13. Abbott, G. W., Xu, X., Roepke, T. K. Impact of ancillary subunits on ventricular repolarization. Journal of Electrocardiology. 40, 6 Suppl 42-46 (2007).
  14. Jia, W. J., et al. Recent studies on the application of patch-clamp technique in cellular electrophysiology. Journal of Chemical Engineering of Chinese Universities. 32 (4), 767-778 (2018).
  15. Leuthardt, E. C., et al. Using the electrocorticographic speech network to control a brain-computer interface in humans. Journal of Neural Engineering. 8 (3), 1-3 (2011).
  16. Tian, J. The applying progress of patch-clamp technique. Journal of Jilin Medical University. 4, 227-229 (2008).
  17. Wang, Z. Q., et al. Effects of shensong yangxin capsule on c-type Kv1.4 potassium channel. Chinese Heart Journal. 21 (6), 782-785 (2009).
  18. Huang, X. Y. The effect of resveratrol on Kv2.1 potassium channels in cardiac myocytes. Chinese Journal of Cardiac Pacing and Electrophysiology. 34 (5), 484-487 (2020).
  19. Wang, C., et al. Effects of neferine on Kv4.3 channels expressed in HEK293 cells and ex vivo electrophysiology of rabbit hearts. Acta Pharmacologica Sinica. 36 (12), 1451-1461 (2005).
  20. Gao, Y., et al. Aconitine: A review of its pharmacokinetics, pharmacology, toxicology and detoxification. Journal of Ethnopharmacology. 293, 115270(2022).
  21. Zhou, W., et al. Cardiac efficacy and toxicity of aconitine: A new frontier for the ancient poison. Medicinal Research Reviews. 41 (3), 1798-1811 (2021).
  22. An, J. R., et al. The effects of tegaserod, a gastrokinetic agent, on voltage-gated K+ channels in rabbit coronary arterial smooth muscle cells. Clinical and Experimental Pharmacology & Physiology. 48 (5), 748-756 (2021).
  23. Sun, Q., Liu, F., Zhao, J., Wang, P., Sun, X. Cleavage of Kv2.1 by BACE1 decreases potassium current and reduces neuronal apoptosis. Neurochemistry International. 155, 105310(2022).
  24. Manz, K. M., Siemann, J. K., McMahon, D. G., Grueter, B. A. Patch-clamp and multi-electrode array electrophysiological analysis in acute mouse brain slices. STAR Protocols. 2 (2), 100442(2021).
  25. Kanda, H., Tonomura, S., Dai, Y., Gu, J. G. Protocol for pressure-clamped patch-clamp recording at the node of Ranvier of rat myelinated nerves. STAR Protocols. 2 (1), 100266(2021).
  26. Ma, J., et al. High purity human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: electrophysiological properties of action potentials and ionic currents. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (5), 2006-2017 (2011).
  27. Yoshimura, M., et al. Application of in vivo patch-clamp technique to pharmacological analysis of synaptic transmission in the CNS. Nihon Yakurigaku Zasshi. Folia Pharmacologica Japonica. 124 (2), 111-118 (2004).
  28. Aziz, Q., Nobles, M., Tinker, A. Whole-cell and perforated patch-clamp recordings from acutely-isolated murine sinoatrial node cells. Bio-protocol. 10 (1), 3478(2020).
  29. Witchel, H. J., Milnes, J. T., Mitcheson, J. S., Hancox, J. C. Troubleshooting problems with in vitro screening of drugs for QT interval prolongation using HERG K+ channels expressed in mammalian cell lines and Xenopus oocytes. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 48 (2), 65-80 (2002).
  30. Rodriguez-Menchaca, A. A., Ferrer, T., Navarro-Polanco, R. A., Sanchez-Chapula, J. A., Moreno-Galindo, E. G. Impact of the whole-cell patch-clamp configuration on the pharmacological assessment of the hERG channel: Trazodone as a case example. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 69 (3), 237-244 (2014).
  31. Yang, S., Liu, Z. W., Zhang, Y. X. The development of in vivo patch clamp technique. Chinese Remedies & Clinics. 5, 399-401 (2003).
  32. Lin, Y. F., Ouyang, S. Research progress and application of patch clamp technique. Strait Pharmaceutical Journal. 9, 8-11 (2008).
  33. Li, S., et al. An insight into current advances on pharmacology, pharmacokinetics, toxicity and detoxification of aconitine. Biomedicine & Pharmacotherapy. 151, 113115(2022).
  34. Chan, T., Chan, J., Tomlinson, B., Critchley, J. Chinese herbal medicines revisited: A Hong Kong perspective. Lancet. 342 (8886-8887), 1532-1534 (1993).
  35. Jiang, H., Zhang, Y. T., Zhang, Y., Wang, X. B., Meng, X. L. An updated meta-analysis based on the preclinical evidence of mechanism of aconitine-induced cardiotoxicity. Frontiers in Pharmacology. 13, 900842(2022).
  36. Liu, Y. Myocardial toxicity of aconite alkaloids. Shenyang Pharmaceutical University. , Shenyang, China. Master's thesis (2007).
  37. Li, Y., et al. Aconitine blocks HERG and Kv1.5 potassium channels. Journal of Ethnopharmacology. 131 (1), 187-195 (2010).
  38. Campbell, D. T. Modified kinetics and selectivity of sodium channels in frog skeletal muscle fibers treated with aconitine. The Journal of General Physiology. 80 (5), 713-731 (1982).
  39. Huang, X. Y., Ying, Y. C. The effect of specific protein 1 on Kv2.1 potassium channel in cardiac myocytes. Journal of Electrocardiology and Circulation. 39 (4), 338-341 (2020).
  40. Cao, J. B. Development and application of patch clamp technique. Journal of Yuncheng University. 27 (2), 53-55 (2009).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Voltaj Kap l PotasyumPotasyum Kanal Ak mT m H cre Kaydyon Kanal Ara t rmalarKardiyotoksisite De erlendirmesi4 Aminopiridin nhibisyonuAkonitin Doz Yan tTek H cre Omikleri

İlgili makaleler