Method Article

AMEBaS: Polarize Tek Hücrelerin Oransal Floresan Zaman Atlamalarının Otomatik Orta Hat Ekstraksiyonu ve Arka Plan Çıkarımı

DOI:

10.3791/64857

June 23rd, 2023

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Polarize tek hücrelerin hücre içi dinamiklerini analiz etmek için mevcut yöntemler genellikle manueldir ve standardizasyondan yoksundur. Bu makale, tek polarize hücrelerin orta hat ekstraksiyonunu otomatikleştirmek ve kullanıcı dostu bir çevrimiçi arayüzde zaman atlamalarından uzay-zamansal davranışı ölçmek için yeni bir görüntü analizi boru hattı sunmaktadır.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre polaritesi, hücre altı düzeyde özel alanların ortaya çıkmasıyla sonuçlanan, uzamsal olarak konsantre moleküller ve yapılar topluluğu tarafından kurulan makroskopik bir fenomendir. Hücre bölünmesi, büyümesi ve göçü gibi temel biyolojik işlevlerin altında yatan asimetrik morfolojik yapıların geliştirilmesiyle ilişkilidir. Ek olarak, hücre polaritesinin bozulması, kanser ve mide displazisi gibi doku ile ilgili bozukluklarla ilişkilendirilmiştir.

Bireysel polarize hücrelerde floresan raportörlerin uzay-zamansal dinamiklerini değerlendirmek için mevcut yöntemler, genellikle hücrelerin ana ekseni boyunca bir orta hattı izlemek için manuel adımlar içerir, bu da zaman alıcıdır ve güçlü önyargılara eğilimlidir. Ayrıca, oransal analiz, iki floresan kanalı kullanarak raportör moleküllerin eşit olmayan dağılımını düzeltebilse de, arka plan çıkarma teknikleri genellikle keyfidir ve istatistiksel destekten yoksundur.

Bu makale, bir hücre polaritesi modeli kullanarak tek hücrelerin uzay-zamansal davranışını otomatikleştirmek ve ölçmek için yeni bir hesaplama hattı sunmaktadır: polen tüpü/kök kılı büyümesi ve sitozolik iyon dinamikleri. Oransal görüntüleri işlemek ve hücre içi dinamiklerin ve büyümenin nicel bir temsilini çıkarmak için üç aşamalı bir algoritma geliştirildi. İlk adım, hücreyi arka plandan bölümlere ayırır ve piksel yoğunluğu uzayında bir eşikleme tekniği aracılığıyla ikili bir maske üretir. İkinci adım, bir iskeletleştirme işlemi yoluyla hücrenin orta hattından geçen bir yolu izler. Son olarak, üçüncü adım, işlenen verileri bir oransal zaman atlamalı olarak sağlar ve bir oransal kimograf (yani, zaman içinde bir 1B uzamsal profil) verir. Büyüyen polen tüplerinden genetik olarak kodlanmış floresan raportörlerle elde edilen oransal görüntülerden elde edilen veriler, yöntemi karşılaştırmak için kullanıldı. Bu boru hattı, polarize hücrelerin orta hattı boyunca uzay-zamansal dinamiklerin daha hızlı, daha az önyargılı ve daha doğru bir şekilde temsil edilmesini sağlar, böylece hücre polaritesini araştırmak için mevcut nicel araç setini geliştirir. AMEBaS Python kaynak kodu şu adreste mevcuttur: https://github.com/badain/amebas.git

Introduction

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre polaritesi, uzamsal olarak konsantre moleküller ve yapılardan oluşan bir koleksiyonun uyumlu eyleminin, özel morfolojik hücre altı alanlarınkurulmasıyla sonuçlandığı temel bir biyolojik süreçtir 1. Hücre bölünmesi, büyümesi ve göçü bu tür polarite bölgelerine dayanırken, kaybı epitel doku ile ilgili bozukluklarda kanserle ilişkilendirilmiştir2.

Apikal olarak büyüyen hücreler, uçtaki polarite bölgesinin tipik olarak hücre dışı ipuçlarına yeniden yöneldiğidramatik bir polarite örneğidir 3. Bunlar, çoklu hücresel süreçlerin hücrenin ucundan sapa doğru belirgin farklı....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Etkileşimli not defteri protokolü

Jupyter not defteri, aşağıdaki talimatların temel alındığı https://colab.research.google.com/github/badain/amebas/blob/main/AMEBAS_Colab.ipynb'de Google Colab kullanılarak doğrudan web'de kullanılabilir. Alternatif olarak, Jupyter not defteri https://github.com/badain/amebas'da kullanılabilir ve burada Jupyter'da yerel olarak çalışacak şekilde indirilebilir ve yapılandırılabilir (Anaconda kolay ve platformlar arası yükleme işlemi sağlayabilir). Zenodo'da (https://doi.org/10.5281/zenodo.7975350), pH veya Ca2+ raportörlerini ifade eden Arabidopsis polen tüplerinin tek ve çift kana....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

AMEBaS boru hattı, floresan mikroskobu görüntü yığınlarından polarize tek hücrelerin orta hat dinamiklerinin çıkarılmasını otomatikleştirerek daha az zaman alır ve insan hatalarına daha az eğilimli hale getirir. Yöntem, büyüyen tek hücrelerde kimograflar ve oransal görüntü yığınları (Şekil 1) oluşturarak bu zaman atlamalarını ölçer. Tek hücrelerin taşınması üzerinde çalışacak şekilde ayarlanabilir, ancak daha fazla deney gereklidir. AMEBaS, Python'da etkileşimli bir Jupyter Notebook (

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada sunulan yeni yöntem, polarize hücrelerin floresan mikroskobu görüntü yığınlarının analizini kolaylaştırmak ve otomatikleştirmek için güçlü bir araçtır. ImageJ Kymograph eklentileri gibi literatürde açıklanan mevcut yöntemler, ilgilenilen polarize hücrenin orta hattının manuel olarak izlenmesini gerektirir, bu sadece zaman alıcı değil, aynı zamanda insan hatalarına da eğilimli bir görevdir. Bu boru hattındaki orta hattın tanımı, iskeletleştirmeyi gerçekleştiren sayısal bir yöntem18,19 ile de.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalenin yazarları, rekabet eden hiçbir mali çıkar veya diğer çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Acknowledgements

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar, FAPESP hibeleri 2015/22308-2, 2019/23343-7, 2019/26129-6, 2020/06744-5, 2021/05363-0, CNPq, NIH R01 hibe GM131043 ve NSF hibeleri MCB1714993, MCB1930165 mali destek için minnettardır. Kök saç verileri Prof. Andrea Bassi ve Prof. Alex Costa'nın süpervizörlüğünde ve altyapısında üretildi.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
GithubGithubhttps://github.com/badain/amebas
Google ColabGooglehttps://colab.research.google.com/github/badain/amebas/blob/main/AMEBAS_Colab.ipynb

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Drubin, D. G., Nelson, W. J. Origins of cell polarity. Cell. 84 (3), 335-344 (1996).
  2. Wodarz, A., Näthke, I. Cell polarity in development and cancer. Nature Cell Biology. 9 (9), 1016-1024 (2007).
  3. Palanivelu, R., Preuss, D.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Cell PolarityRatiometric FluorescenceMidline ExtractionBackground SubtractionSingle Cell AnalysisFluorescence Time LapseCell SegmentationSkeletonizationKymograph GenerationPolarized Cells

Related Articles