Protokol, büyük hacimli mikro-BT taraması, özel yapım bir sıkıştırma aşaması ve gelişmiş görüntü işleme araçlarını birleştirerek tüm proksimal insan femurundaki kemik mikro yapısının deformasyonunun ve tokluğunun ölçülmesini sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Protokol, büyük hacimli mikro-BT taraması, özel yapım bir sıkıştırma aşaması ve gelişmiş görüntü işleme araçlarını birleştirerek tüm proksimal insan femurundaki kemik mikro yapısının deformasyonunun ve tokluğunun ölçülmesini sağlar.
Giderek artan yükler altında kemik mikroyapısının görüntülenmesi, kemiğin mikroyapısal bozulma davranışının gözlemlenmesini sağlar. Burada, femur boynunun klinik olarak anlamlı kırıklarına neden olan, giderek artan deformasyon altında tüm proksimal femurun üç boyutlu mikroyapısal görüntülerinin bir dizisini elde etmek için bir protokol açıklıyoruz. Protokol, popülasyondaki kemik mineral yoğunluğunun alt ucunda 66-80 yaş arası kadın donörlerden alınan dört femora kullanılarak gösterilmiştir (T-skoru aralığı = −2.09 ila −4.75). Mikro-bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) görüntüleme sırasında uygulanan yükü kaydederken, tek bacaklı bir duruşu taklit eden örneklerin yüklenmesi için radyo-şeffaf bir sıkıştırma aşaması tasarlanmıştır. Görüş alanı 146 mm genişliğinde ve 132 mm yüksekliğindeydi ve izotropik piksel boyutu 0,03 mm idi. Kuvvet artışı, kırılma yükünün sonlu eleman tahminlerine dayanıyordu. Sıkıştırma aşaması, yer değiştirmeyi numuneye uygulamak ve öngörülen kuvvet artışlarını yürürlüğe koymak için kullanıldı. Femur boynunun açılması ve kesilmesine bağlı alt sermaye kırıkları dört ila beş yük artışından sonra meydana geldi. Mikro-BT görüntüleri ve reaksiyon kuvveti ölçümleri, kemik gerilmesini ve enerji absorpsiyon kapasitesini incelemek için işlendi. Erken yükleme adımlarında korteksin kararsızlığı ortaya çıktı. Femur başındaki subkondral kemik, kırık öncesi% 16'ya ulaşan büyük deformasyonlar ve kırık kadar destek kapasitesinde ilerleyici bir artış gösterdi. Deformasyon enerjisi, kırılmaya kadar yer değiştirme ile doğrusal olarak artarken, rijitlik kırılmadan hemen önce sıfıra yakın değerlere düşmüştür. Kırılma enerjisinin dörtte üçü, son %25'lik kuvvet artışı sırasında numune tarafından alındı. Sonuç olarak, geliştirilen protokol, ileri bir donör yaşında kayda değer bir enerji emme kapasitesi veya hasar toleransı ve kortikal ve trabeküler kemik arasında sinerjik bir etkileşim ortaya çıkardı.
Femur boynu kırıkları yaşlanan nüfus için büyük bir yüktür. Mikro-bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) görüntüleme ve eşlik eden mekanik testler, kemik mikro yapısının gözlemlenmesine ve kemik gücü, yaşa bağlı değişiklikler ve yük altındaki yer değiştirmelerle ilişkisinin incelenmesine olanak tanır 1,2. Bununla birlikte, yakın zamana kadar, yük altındaki kemiğin mikro-BT çalışmaları, eksize edilmiş kemik çekirdekleri3, küçük hayvanlar4 ve insan omurga üniteleri5 ile sınırlıydı. Mevcut protokol, tüm proksimal insan femurunun mikroyapısının yük altında ve bir kırıktan sonra yer değiştirmesini ölçebilir.
İnsan uyluk kemiğinin başarısızlığını araştırmak için çeşitli çalışmalar yapılmıştır ve bunlar zaman zaman zıt sonuçlara ulaşmıştır. Örneğin, kortikal ve trabeküler yapıların yaşa bağlı incelmesinin, kemiğin elastik instabilitesine neden olarak yaşa bağlı kırılmaya yatkınlığı belirlediği düşünülmektedir6,7, bu da elastik instabilite olmadığı varsayılarak kortikal gerilme ve femoral kuvvet tahminlerinin yüksek katsayısı ile bariz bir tezat oluşturmaktadır (R2 = 0.80-0.97)8,9. Bununla birlikte, bu tür çalışmalar femur kuvvetini sistematik olarak hafife almıştır (%21-29 oranında), bu nedenle modellerde uygulanan kırılgan ve yarı kırılgan kemik tepkilerini sorgulamaktadır 8,10. Görünüşte zıt olan bu bulgular için olası bir açıklama, izole kemik çekirdeklerine kıyasla tüm kemiklerin farklı bir kırılma davranışında bulunabilir. Bu nedenle, tüm proksimal femurlarda kemik mikroyapısının deformasyon ve kırık yanıtlarını gözlemlemek, kalça kırığı mekaniği ve ilgili uygulamalar hakkında bilgi sahibi olmayı ilerletebilir.
Tüm insan kemiklerini mikrometrik çözünürlükte görüntülemek için mevcut yöntemler sınırlıdır. Portal ve dedektör boyutu, insan proksimal uyluk kemiğini barındırmak için uygun bir çalışma hacmi (yaklaşık 13 cm x 10 cm, genişlik x uzunluk) ve ilgili mikro mimari özelliklerin yakalanabilmesini sağlamak için muhtemelen 0,02-0,03 mm mertebesinde bir piksel boyutu sağlamalıdır11. Bu spesifikasyonlar şu anda bazı senkrotron tesisleri1 ve ticari olarak temin edilebilen bazı büyük hacimli mikro-BT tarayıcıları12,13 tarafından karşılanabilir. Sıkıştırma aşaması, insan uyluk kemiğinde bir kırılmaya neden olmak için yeterli bir kuvvet üretirken X-ışını zayıflamasını en aza indirmek için radyo-şeffaf olmalıdır (örneğin, yaşlı beyaz kadınlar için 0,9 kN ile 14,3 kN arasında)14. Bu büyük kırılma yükü değişimi, kırılmaya yönelik yük adımlarının sayısının, genel deney süresinin ve üretilen karşılık gelen veri miktarının planlanmasını zorlaştırır. Bu sorunu çözmek için, kırık yükü ve yeri, klinik bilgisayarlı tomografi (BT) görüntülerinden alınan numunenin kemik yoğunluğu dağılımı kullanılarak sonlu elemanlar modellemesi yoluyla tahmin edilebilir 1,2. Son olarak, deneyden sonra, tüm insan uyluk kemiğindeki başarısızlık mekanizmalarını ve enerji yayma kapasitesini incelemek için üretilen büyük miktarda verinin işlenmesi gerekir.
Burada, femur boynunun klinik olarak anlamlı kırıklarına neden olan, giderek artan deformasyon altında tüm proksimal femurun üç boyutlu mikroyapısal görüntülerinin bir dizisini elde etmek için bir protokol açıklıyoruz2. Protokol, numune sıkıştırmanın kademeli olarak artırılmasının planlanmasını, özel bir radyo-şeffaf sıkıştırma aşaması aracılığıyla yüklenmeyi, büyük hacimli bir mikro-CT tarayıcı aracılığıyla görüntülemeyi ve görüntülerin ve yük profillerinin işlenmesini içerir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol, bir vücut bağış programından alınan 12 femur örneği ile geliştirildi ve test edildi. Örnekler taze olarak elde edildi ve Flinders Üniversitesi Biyomekanik ve İmplant Laboratuvarı'nda (Tonsley, Güney Avustralya, Avustralya) -20 °C'de saklandı. Deney boyunca kemik nemi korundu. Bağışçılar Kafkasyalı kadınlardı (66-80 yaş). Flinders Üniversitesi Sosyal ve Davranışsal Araştırma Etik Kurulu'ndan (SBREC) etik izni alınmıştır (Proje # 6380).
1. Numuneye özel bir yük adımı artışının planlanması

Şekil 1: Kırılma yükünün hesaplanması. Sonlu elemanlar gerinim haritası, nominal kuvveti kırılma yüküne dönüştürmek için kullanılan denklemler (solda) ve uyluk kemiğini (sağ orta), distal alüminyum (sağ üst) kabı ve polietilen basınç soketini (sağ alt) gösteren yükleme şeması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Femur numune düzeneğinin hazırlanması (Şekil 2)

Şekil 2: Hizalama donanımı. (A) çerçeveyi, (B) alüminyum saksı kabını, (C) sentetik bir uyluk kemiği modelini ve (D) küresel şekilli basınç soketini gösteren hizalama donanımının önden (solda) ve yanda (sağda) fotoğrafı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
3. Sıkıştırma aşaması montajı
NOT: Sıkıştırma aşamasının dış boyutları, numune hariç 245 mm çap, 576 mm yükseklik ve 14 kg ağırlıktır. Sıkıştırma aşaması iki ana bölümden oluşur: sıkıştırma odası ve aktüatör, aşağıdaki gibi monte edilir:

Şekil 3: Özel yapım radyosaydam sıkıştırma aşaması düzeneği. Sıkıştırma aşamasının bir fotoğrafı (solda) ve bir modeli (sağda). (A) Altta kapalı 3 mm kalınlığında bir alüminyum silindir olan sıkıştırma odası; (B) üst yapıya sahip aktüatör tertibatı; (C) vidalı kriko mekanizması; (D) düşük sürtünmeli xy tablosu; ve (E) altı eksenli yük hücresi modelde görüntülenir ve gösterilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
4. Denemeyi ayarlama
5. Eşzamanlı mikroyapısal görüntüleme ile mekanik test
6. Yer değiştirme ve gerinim alanının hesaplanması
7. Analiz
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Görüntüler tüm proksimal femuru, basınç soketini, diş çimentosunu, alüminyum kabı ve sarma dokusunu gösterir. Kırık öncesi ve kırık sonrası yük arttıkça kemik mikro mimarisinin giderek deforme olduğu görülebilir (Şekil 4).

Şekil 4: Dizüstü bilgisayara bağlı sıkıştırma aşaması. (A
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Mevcut protokol, kalça kırıklarının zaman geçen mikromekaniğinin ex vivo olarak üç boyutlu olarak incelenmesine izin vermektedir. İnsan uyluk kemiğinin proksimal yarısına ilerleyici bir deformasyon uygulayabilen ve reaksiyon kuvvetini ölçebilen bir radyosaydam (alüminyum) sıkıştırma aşaması özel olarak tasarlanmış, üretilmiş ve test edilmiştir. Bu protokolde, mikrometrik çözünürlükte progresif yükleme ile tüm proksimal femuru görüntüleyen geçici bir görüntü hacimleri dizisi sağlamak için büyük hacimli bir mikro-...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmez.
Avustralya Araştırma Konseyi'nden (FT180100338; IC190100020) minnetle kabul edilir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Emici doku | N/A | Deney boyunca kemik nemini koruyun | |
| Hizalama teçhizatı | Numuneyi saksı kabına yerleştirmek için | özel yapım | |
| Alüminyum saksı kabı | Özel yapım | Saksı kabı | |
| Kemik testeresi | N/A Numuneyi | boyutuna göre kesin | |
| Kalibrasyon fantom QCT Pro | Mindways Software, Inc., Austin, ABD | CT Kalibrasyonu 13002 | Görüntülerdeki gri seviyeleri eşdeğer kemik minerali (kül) yoğunluk seviyelerine kalibre |
| Klinik Bilgisayarlı Tmografi tarayıcı | General Electric Medical Systems Co., Wisconsin, ABD | Optima CT660 | Kırılmaya kadar olan yük adımının tahmini için ön görüntüleme |
| Basınç aşaması | Ismarlama | Numuneye öngörülen bir deformasyonun görüntüleme yoluyla uygulanması ve sürdürülmesi için 10 kg'lık bir radyo-şeffaf sıkıştırma aşaması. | |
| Diş çimentosu | Soesterberg, Hollanda | Vertex RS | |
| Femur örneği | Science Care, Phoenix, ABD | ||
| Sonlu elemanlar analiz yazılımı | ANSYS Inc., Canonsburg, ABD | ANSYS Mekanik APDL | Sonlu elemanlar yazılım paketi |
| Dondurucu | N/A | Numuneleri -20 &°C'de saklayın; C | |
| Sabit Sürücü | Dell | Disk alanı: Birim başına 500 GB | |
| Görüntü bnarizasyon ve segmentasyon yazılımı | Skyscan-Bruker, Kontich, Belçika | CT analizörü | Görüntü işleme yazılımı |
| Görüntü elastik segmentasyonu | Sheffield Üniversitesi | Kemik DVC | https://bonedvc.insigneo.org/dvc/ |
| Görüntü işleme ve otomasyon yazılımı | The MathWork Inc. | Matlab | Görüntü işleme yazılımı |
| Görüntü kayıt yazılımı | Skyscan-Bruker, Kontich, Belçika | DataViewer | Görüntü işleme yazılımı |
| Görüntü segmentasyon ve FE modelleme yazılımı | Simpleware, Exeter, İngiltere | Scan IP | Bone egmentation yazılımı |
| Görüntü oluşturma komut dosyası | Avustralya senkrotronu, Clayton, VIC, AU | Senaryo IMBL'de mevcuttur | |
| Görüntü görselleştirme | Kitware, Clifton Park, NY, ABD | Paraview | Görüntü görselleştirme |
| Görüntü görselleştirme | Avustralya Ulusal Üniversitesi | Dristhi | Görüntü görselleştirme: doi:10.1117/12.935640 |
| Görüntüleme ve Tıbbi ışın hattı | Avustralya senkrotronu, Clayton, VIC, AU | ABD'de büyük nesne mikro-CT ışın hattı | |
| Düşük sürtünmeli xy tablası | THK Co., Tokyo, Japonya | ||
| NI sinyal toplama yazılımı | National Instruments, Austin, TX | NI-DAQmx | |
| Fosfat tamponlu salin çözeltisi | Özel yapım | Deney boyunca kemik nemini koruyun | |
| Plastik torba | N/A | Deney boyunca kemik nemini koruyun | |
| Rail | SKF Inc., Lansdale, PA, ABD | ||
| Vidalı kriko mekanizması | Benzler, & ouml; rebro, İsveç | Serie BD (sıcak dişli ünitesi) | strok: 150 mm, maksimum yük: 10.000 N, dişli oranı: 27:1, devir başına deplasman: 0,148 mm |
| Tek pco.edge sensörü, lens bağlantılı sintilatör | Avustralya senkrotronu, Clayton, VIC, AU | Dedektör Yakut FOV: 141 x 119 mm; 2560 x 2160 piksel; 55 ve mikro; m/piksel; 50 fps | |
| Altı eksenli yük hücresi | ME-Meß systeme GmbH, Hennigsdorf, GE | K6D6 | Maksimum ölçüm hatası: %0,005; maksimum kuvvet: 10000 N; maksimum tork: 500 Nm |
| Gerinim yükseltici | ME-Meß systeme GmbH, Hennigsdorf, GE | GSV-1A8USB K6D/M16 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.