$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Son on yılda, hücre dışı veziküllerin (EV) tanısal ve prognostik biyobelirteçler, terapötik hedefler, ilaç dağıtım vektörleri ve hatta çok sayıda hastalıkta onarıcı veya rejeneratif tıp adayları olarak rolü üzerine yoğun araştırmalar yapılmıştır. EV, biyoaktif moleküllerin (lipitler, proteinler, RNA ve metabolitler gibi) seçici paketlenmesi sayesinde, hücreden hücreye iletişimin tek bir aracıları kümesini oluşturan eksozomlar, mikroveziküller ve apoptotik cisimler gibi çapları 30 ila 5000 nm arasında değişen heterojen fosfolipid çift katmanlı parçacıkların bir bileşimidir. Hemen hemen tüm hücreler (prokaryotik ve ökaryotik) EV salgıladığından, hemen hemen tüm hastalıkların patofizyolojisinde rol oynayabilirler. Aslında, belirli bir uyarandan sonra salınan EV'nin moleküler yükü, etki mekanizmasını belirler ve ana hücresinin durumunu yansıtır.
Tüm bilimsel çabalara ve teknik ilerlemelere rağmen, EV'nin özellikleri, yapısı, bileşimi, patofizyolojik aktivitesi ve metabolizması/klirensi konusundaki araştırmalar, EV ekstraksiyon ve saflaştırma metodolojisi tarafından teknik olarak hala zorlanmaktadır. Bu bağlamda, bu yöntem koleksiyonu, daha sonraki sonraki uygulamalar için EV'nin izolasyon ve saflaştırma yöntemlerinin raporlanmasını amaçlamaktadır.
Bu sayıda, El Itawi ve meslektaşları1, Porphyromonas gingivalis tarafından bir fare enfeksiyonu modelinde splenosit kaynaklı EV'nin izolasyonunu tanımlamaktadır. Yazarlar, EV'yi bir splenosit süspansiyonundan diferansiyel santrifüjleme yoluyla izole eder ve daha sonra EV'yi in vivo etkilerini incelemek için toplar. Ancak yazarlar, yöntemlerinin yapışık hücreler için uyarlanması gerektiğini belirtmektedir.
Jones ve ortak yazarlar2, boyut dışlama kromatografisi (SEC) ve 3-KDa ultrafiltrasyonunu birleştiren kültürlenmiş oligodendrositlerden kaynaklanan EV'yi izole eder, böylece ekstraktlarında minimum protein kontaminasyonu ile uygun bir EV saflığı sağlar. Bu yarı otomatik yöntem, fonksiyonel tahliller, EV'nin moleküler karakterizasyonu veya EV görüntüleme gibi hemen hemen tüm aşağı akış uygulamaları için kullanılabilir.
SEC ayrıca Ryan ve diğerleri tarafından da önerilmektedir. 3, bakteri fizyolojisini, konakçı ile etkileşimi ve EV moleküler kargosunu anlamak için EV'yi Mycobacterium tuberculosis'ten izole etmek. Bu metodolojik yazıda, yazarlar yoğunluk gradyanlı ultrasantrifüjleme ve SEC'in performansını karşılaştırır ve SEC gerçekleştirilirken EV geri kazanımının ve EV'nin saflığının iyileştirildiği sonucuna varırlar. Yazarlar ayrıca açıklanan metodolojinin diğer mikobakteri türevli EV'lere uygulanabileceğini öne sürüyorlar.
Valle-Tamayo ve diğerleri. 4, manyetik mikro boncuklara konjuge edilmiş astrosit hücre yüzeyi antijeni-1 (ACSA-1) antikoru ile polimer bazlı çökeltme ve immünoyakalama yoluyla astrosit türevli EV elde etmek için iki aşamalı kolay bir yöntemi tanımlayın. Yazarlar, immüno-yakalamanın polimerik çökeltme yerine SEC ile birleştirilebileceğini ve EV'yi diğer hücre tiplerinden izole etmek için manyetik mikro boncukların diğer antikorlara konjuge edilebileceğini öne sürüyorlar. Bu EV'lerin insan plazmasından veya diğer biyoakışkanlardan hatırlanması, nörolojik hastalıklar veya ilgili bozukluklar alanında yüksek değere sahip olabilir.
Sayının son makalesinde, Koh ve meslektaşları5 , küçük EV'yi (sEV) kültürlenmiş insan mezenkimal kök hücrelerinden izole etmek için bir ultrafiltrasyon yöntemi önermektedir. Yazarlar, ultrafiltrasyonla izole edilmiş EV ekstraktlarının terapötik uygulamalar ve diğer aşağı akış analizleri için kullanılabileceğini belirtmektedir. Bu, diğer biyoakışkanlara ve farklı hücre köken tiplerine uygulanabilecek basit ve hızlı bir yöntem olsa da, yazarlar bunun endüstriyel uygulamalar için büyük ölçekte uygun olmayabileceğini kabul etmektedir.
Genel olarak, bu Özel Sayı, EV'yi farklı boyutlardan ve bakteri, hayvan organları ve insan hücreleri gibi çeşitli örneklerden izole etmek için nispeten basit ve kolay farklı laboratuvar yöntemleri sağlar. Ekstraksiyon verimi ve saflığı yöntemler arasında farklılık gösterir ve izole edilmiş EV'nin nihai kullanımına göre en uygun maliyetli ve zaman açısından verimli yöntemin seçilmesi düşünülmelidir.
Son olarak, katkıları için tüm yazarlara ve hakemlere ve bu süreçteki paha biçilmez yardımları için Visualized Experiments dergisinin Editör kadrosuna teşekkür ederek bitirmek istiyorum. Bu özel sayının EV araştırmacılarına gelecekteki araştırmalarında faydalı olacağını içtenlikle umuyorum.