Method Article

Manuel Polinasyon, Mikroskopi ve S-Genotip Analizleri Kullanılarak Narenciyede Kendini-(In)uyumluluk, Uyumluluk-(In)uyumluluklarının ve Inter-(In)uyumluluklarının belirlenmesi

DOI:

10.3791/65056

⸱

June 30th, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1National Key Laboratory for Germplasm Innovation & Utilization of Horticultural Crops, Huazhong Agricultural University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, narenciye çeşitlerinde polen uyumluluğunu ve uyumsuzluğunu belirlemek için hızlı bir yöntem sağlar.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Narenciye, kendi kendine poleni reddetmek için S-RNaz bazlı kendi kendine uyumsuzluğu kullanır ve bu nedenle başarılı tozlaşma ve gübreleme için yakındaki tozlaştırıcı ağaçları gerektirir. Bununla birlikte, tozlaştırıcı olarak hizmet etmek için uygun çeşitlerin belirlenmesi zaman alıcı bir süreçtir. Bu sorunu çözmek için, agaroz jeli elektroforezi ve anilin mavisi boyama kullanan tozlaşma uyumlu narenciye çeşitlerini tanımlamak için hızlı bir yöntem geliştirdik. Polen uyumluluğu, toplam DNA'nın çıkarılması ve spesifik primerlerle PCR tabanlı genotipleme testlerinin yapılması ile S genotiplerinin tanımlanmasına dayanarak belirlenir. Ek olarak, stiller manuel tozlaşmadan 3-4 gün sonra toplanır ve anilin mavisi boyama yapılır. Son olarak, polen tüplerinin büyüme durumu floresan mikroskobu ile gözlemlenir. Polen uyumluluğu ve uyumsuzluğu, polen tüpü büyümesinin sırasıyla normal mi yoksa baskılanmış mı olduğu gözlemlenerek belirlenebilir. Sadeliği ve maliyet etkinliği nedeniyle, bu yöntem, farklı çeşitler arasında uyumsuzluk grupları ve uyumsuzluk ilişkileri kurmak için farklı narenciye çeşitlerinin polen uyumluluğunu ve uyumsuzluğunu belirlemek için etkili bir araçtır. Bu yöntem, uygun tozlaştırıcı ağaçların başarılı bir şekilde seçilmesi için gerekli bilgileri sağlar ve böylece yeni meyve bahçelerinin kurulmasını ve ıslah programları için uygun ebeveynlerin seçilmesini kolaylaştırır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kendine uyumsuzluk (SI), anjiyosperm türlerinin yaklaşık %40'ında bulunan genetik olarak kontrol edilen bir mekanizmadır. Bu süreçte, pistil aynı SI genotipine sahip bir bitkiden poleni reddeder ve böylece kendi kendine döllenmeyi önler 1,2. Ma jia pummelo, Çin'in Jinagsu eyaletinde, büyük, pembe meyve, zengin meyve suyu içeriği, tatlı ve ekşi bir tat ve kalın bir kabuğun mükemmel nitelikleri ile yerel bir çeşittir3. SI, geçişi teşvik etmesine rağmen, meyvelerin verimini ve kalitesini olumsuz yönde etkiler4 ve güvenilir meyve tutum oranları ve yüksek verim için f....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Anilin mavisi boyama için hazırlık

  1. Deney için aşağıdaki reaktifleri ve araçları hazırlayın: tozlayıcı fırça, cımbız, kurşun kalem, sülfat kağıdı, tozlaşma torbası, fermuarlı kilit torbaları, ataşlar, formaldehit, buzul asetik asit, mutlak etanol, santrifüj tüpleri, forseps, tutkal damlalıkları, cam slaytlar, örtüler, neşterler ve polietilen glikol.
  2. % 0.02 MgSO4,% 0.01 KNO 3,% 0.03 Ca (NO 3)2,% 0.01 H 3 BO 3,% 20 PEG-4000 ve% 15 sakkaroz içeren in vitro çimlenme ortamını hazırlayın. KOH ile pH'ı 6.0-6.2'ye ayarlayın. PEG-4.000'in çözülmesi zor olduğu için ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada yapılan deneyler için olgun çiçekler seçildi, anterler toplandı, bir fırında kurutuldu ve polenler 12 saat boyunca 28 ° C'de çimlendi. Polen canlılığı ve çimlenme oranları Şekil 1'de gösterildiği gibi ölçülmüştür.

Narenciye manuel olarak tozlaştırıldı ve polen uyumluluğu ve uyumsuzluğu anilin mavisi boyama ve floresan mikroskobu kullanılarak değerlendirildi. Uyumlu polen, stigmanın yüzeyinde çimlenebilir ve büyüyebilecek ve sonuçta yumurtalıkta döllenmeye y.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Meyve bitkilerinde, hem partenokarpi hem de SI önemli özelliklerdir, çünkü çekirdeksiz meyvelerin yolunu açarlar - tüketiciler tarafından çok takdir edilen bir özellik. Kendi kendine uyumsuzluk, kendi kendine polenin reddedilmesini teşvik eder ve böylece akrabalığı önler20. Narenciye arasında, pummelo kendi kendine uyumsuz bir çeşittir7. Tüm anjiyosperm türlerinin neredeyse% 40'ı SI21 sergiler. Bu özellik meyve tutumunu önler, verimi düşürür ve yetiş.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar açıklayacak hiçbir şeyleri olmadığını beyan ederler.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu proje Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (32122075, 32072523) tarafından finansal olarak desteklenmiştir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
mutlak etanolSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10009218
Anilin mavisiSinopharm Kimyasal Reaktif Co., Ltd
Borik asit, H3BO3Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10004818
Kahverengi şişeLabgic Technology Co., Ltd
Kalsiyum nitrat tetrahidrat, Ca (NO3) 2Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd80029062
Santrifüj tüpLabgic Technology Co., Ltd
santrifüj tüpleriLabgic Technology Co., Ltd
CTABGEN-VIEW SCIENTIFIC INC57-09-0 (CAS)
Jiangsu Songchang Medical Equipment Co., Ltd'yiBırakma
Etilendiamintetraasetik asit, EDTASinopharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd10009617
ForsepsLUXIANZI Biyoteknoloji Co, Ltd
formaldehitSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10010018
Tam otomatik numune hızlı öğütücüShanghai Jingxin Industrial Development Co., LtdTissuelyser-96
buzlu asetik asitSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10000218
Öğütme Borusu ŞangayJingxin Industrial Development Co., Ltd
İzoamil alkolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10003218
İzopropil alkolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd80109218
etiketiM& G Chenguang Kırtasiye Co., Ltd.
Leica DMi8Şangay Leica Co., Ltd21903797
Magnezyum sülfat heptahidrat, MgSO4Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10013018
MIKROSKOP Kapak camıZhejiang Shitai Industrial Co., Ltd
NaClSinopharm Kimyasal Reaktif Co., Ltd10019318
ataçM& G Chenguang Kırtasiye Co., Ltd.
kalemM& G Chenguang Kırtasiye Co., Ltd.
tozlayıcı fırçaShanghai Yimei Plastics Co., Ltd
Polietilen glikol, PEG 6000Beijing Dingguo Changsheng Biotechnology Co., LtdDH229-1
Polietilen glikol, PEG-4000Guangzhou saiguo biotech Co., Ltd1521GR500
Potasyum hidroksit, KOHSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10017008
Potasyum nitrat, KNO3Sinopharm Kimyasal ReagentCo, Ltd10017218
NeşterJiangsu Songchang Tıbbi Ekipman Co, Ltd
slaytZhejiang Shitai Industrial Co., Ltd
Sodyum hidroksit, NAOHSinopharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd10019718
SükrozSinopharm Kimyasal ReagentCo., Ltd
sülfat kağıdıTaizhou Jinnong Mesh Fabrikası
Termostat su banyosuŞangay Jinghong Deneysel Equipment Co, LtdL-909193
TriklorometanSinopharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd10006818
Tripotasyum fosfat tribazik trihidrat, K < sub > 3 < / sub > PO < sub > 4 < / sub >Şanghay Lingfeng Kimyasal Reaktif Co, Ltd20032318
Tris-HClGEN-VIEW SCIENTIFIC INC1185-53-1
zip kilit çantalarıM & G Chenguang Kırtasiye Co., Ltd.
β-MerkaptoetanolGEN-VIEW BİLİMSEL A.Ş. 60-24-2 (CAS)
10021418

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Matsumoto, D., Tao, R. Recognition of S-RNases by an S locus F-box like protein and an S haplotype-specific F-box like protein in the Prunus-specific self-incompatibility system. Plant Molecular Biology. 100 (4-5), 367-378 (2019).
  2. Goldberg, E. E., et al.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Citrus Self IncompatibilityS Genotype AnalysisManual PollinationPollen CompatibilityAniline Blue StainingAgarose Gel ElectrophoresisFluorescence MicroscopyPollen Tube GrowthPCR GenotypingPollinizer Selection

Related Articles