Geni Değiştirilmiş T hücrelerinin Üretimi için GMP Uyumlu Bir Prosedür

Nikolaos Savvopoulos; Klearchos Stampolitis; Georgios Alexandropoulos; Dionysia Kefala; Memnon Lysandrou; Vassiliki Zacharioudaki; Nikos Tsolakos; Alexandros Spyridonidis

doi:10.3791/65097

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Geni Değiştirilmiş T hücrelerinin Üretimi için GMP Uyumlu Bir Prosedür

1.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/65097

⸱

6 Ekim 2023

Nikolaos Savvopoulos¹ , Klearchos Stampolitis¹ , Georgios Alexandropoulos¹ , Dionysia Kefala¹ , Memnon Lysandrou¹ , Vassiliki Zacharioudaki¹ , Nikos Tsolakos² , Alexandros Spyridonidis¹

¹Institute of Cell Therapy, Bone Marrow Transplantation Lab, Department of Medicine, University of Patras, ²Protatonce Ltd, Demokritos Science Park

Bu makalede

Özet

Bu protokol, İyi Üretim Uygulamaları (GMP) standartlarıyla uyumluluğu sağlayarak, ilgilenilen bir gen ile birincil insan T hücrelerinin dönüştürülmesi sürecini ana hatlarıyla belirtir.

Özet

Evlat Edinen Hücre Terapisi (ACT) alanı, genetiği değiştirilmiş hücrelerin, özellikle Kimerik Antijen Reseptörü (CAR)-T hücrelerinin geliştirilmesiyle devrim yaratmıştır. Bu modifiye hücreler, hematolojik maligniteleri olan hastalarda dikkate değer klinik yanıtlar göstermiştir. Bununla birlikte, bu tedavileri üretmenin ve kapsamlı kalite kontrol değerlendirmeleri yapmanın yüksek maliyeti, daha geniş bir hasta yelpazesine erişilebilirliklerini sınırlamıştır. Bu sorunu ele almak için, birçok akademik kurum, ulusal ve uluslararası düzenleyici kurumlar tarafından belirlenen yönergelere bağlı kalırken, genetiği değiştirilmiş hücrelerin kurum içi üretiminin fizibilitesini araştırıyor.

Genetiği değiştirilmiş T hücresi ürünlerinin büyük ölçekte üretilmesi, özellikle kurumun üretim yetenekleri ve infüzyon miktarı gereksinimlerini karşılama ihtiyacı açısından çeşitli zorluklar ortaya koymaktadır. En büyük zorluklardan biri, genellikle dış şirketlere dış kaynaklı olan İyi Üretim Uygulamaları (GMP) yönergeleri kapsamında büyük ölçekli viral vektörlerin üretilmesini içerir. Ek olarak, T hücresi transdüksiyon sürecini basitleştirmek, üretim partileri arasındaki değişkenliği en aza indirmeye, maliyetleri düşürmeye ve personel eğitimini kolaylaştırmaya yardımcı olabilir. Bu çalışmada, ilgilenilen gen olarak bir floresan işaretleyici ile birincil insan T hücrelerinin lentiviral transdüksiyonu için kolaylaştırılmış bir süreci özetledik. Tüm süreç GMP uyumlu standartlara bağlıdır ve akademik kurumumuzda uygulanmaktadır.

Giriş

Evlat Edinen Hücre Tedavileri (ACT) ve Kimerik Antijen Reseptörü (CAR)-T hücrelerinin ortaya çıkışı, modern klinik uygulamada devrim niteliğinde bir değişime yol açarak yeni bir kişiselleştirilmiş tıp paradigması oluşturmuştur. Özellikle, CD19'u hedefleyen CAR-T hücreleri olağanüstü klinik yanıtlar göstermiştir ve B hücreli maligniteler için en gelişmiş T hücre tedavisini temsil etmektedir 1,2,3,4,5. Bununla birlikte, mevcut ticarileştirilmiş gen modifiye T hücresi tedavileri, gen transferi için büyük ölçüd....