Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Lipopolisakkarit (LPS) veya endotoksin tarafından indüklenen akut akciğer hasarı (ALI) fare modeli, akut akciğer hasarı veya akut inflamasyon ile ilgili hayvan çalışmalarında hala en sık kullanılan modeller arasındadır. Akut akciğer hasarlı fare modellerinde en sık kullanılan yöntemler, LPS'nin intraperitoneal enjeksiyonu ve LPS'nin trakeal infüzyonu için trakeostomidir. Bununla birlikte, ilk yöntem akciğer hedeflemesinden yoksundur ve diğer organlara zarar verir ve ikinci yöntem operatif travmaya, enfeksiyon riskine ve düşük sağkalım oranına neden olur. Burada, farelerde LPS instilasyonu için noninvaziv bir orofaringeal endotrakeal entübasyon yöntemi öneriyoruz. Bu yöntemde LPS, endotrakeal entübasyon için bir aparat yardımıyla akciğere aşılanmak üzere orofaringeal boşluktan trakeaya noninvaziv olarak sokulur. Bu yöntem sadece akciğer hedeflemesini sağlamakla kalmaz, aynı zamanda hayvanlarda hasarı ve ölüm riskini de önler. Bu yaklaşımın akut akciğer hasarı alanında yaygın olarak kullanılmasını bekliyoruz.
Giriş
Akut akciğer hasarı (ALI) sık görülen bir klinik sendromdur. Çeşitli patojenik faktörler altında, akciğer epitel hücrelerinin ve vasküler endotel hücrelerinin fizyolojik bariyerinin bozulması, alveoler geçirgenliğin artmasına neden olur, böylece akciğer kompliyasının azalmasına, pulmoner ödem ve ciddi hipoksemiye neden olur1. Akut solunum sıkıntısı sendromu (ARDS) ALI'nin en şiddetli formudur. Kontrolsüz inflamasyon ve oksidatif stres hasarı, ALI'nin ve daha şiddetli ARDS2'nin ana nedenleri olarak kabul edilir. Alveoler epitel hücreleri travma nedeniyle doğrudan yaralandığında, alveoler makrofajların enflamatuar yanıt zi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan deneyi protokolü, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Yönetim Komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır (Kayıt No. 2021-11). Bu çalışmada erkek C57/BL fareler (20-25 g, 6-8 haftalık) kullanıldı. Fareler bir hayvan odasında tutuldu ve deney sırasında içmek ve yemek yemekte özgürdüler.
1. Hazırlık
- Entübasyon platformunun bir taban, bir yükseltici, bir ataş, iki lastik bant ve bazı iplerden oluştuğundan emin olun. Bir ip alın, ipi yükselticinin üstündeki iki delikten geçirin ve ipin iki ucunu sırasıyla yükselticinin üstündeki küçük çıkıntılara bağlayın.
NOT: Fare kafasının ip ile iki deli....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Farelerde LPS instilasyonu için önerilen yöntem, LPS damlatılmasından 12 saat sonra inflamatuar sitokin TNF-α ekspresyonu ve akciğer kuru-ıslak ağırlık oranı değerlendirilerek doğrulanmıştır. Deneyde dört grup vardı: boş kontrol (herhangi bir tedavi olmadan), cerrahi entübasyon16, intranazal17,18 ve noninvaziv orofaringeal entübasyon (n = 6). Boş kontrol grubuyla karşılaştırıldığında, noninvaziv orofaringea.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Başlangıçta, trakea19'un yerini bulmak için ağız boşluğunun içine baktık. Bununla birlikte, bu işlem sırasında, C57 / BL farelerinin trakeasının dar olduğunu keşfettik, bu da endoskop20 gibi ekipmanların yardımı olmadan bu yöntemle doğru yeri bulmayı zorlaştırıyor. Daha fazla araştırma üzerine, entübatör lambasından gelen ışığın vücudun yüzeyine nüfuz edebileceğini ve operatörün kanül21'in konumunu belirlemesine izin verdiğini bulduk.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (No.: 81903902), Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (No.: 2019M663457), Sichuan Bilim ve Teknoloji Programı (No.: 2020YJ0172) ve Chengdu TCM Üniversitesi Xinglin Scholar Research Premotion Projesi (No.: QJRC2022053) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Lipopolisakkarit | MERK | L4130 | LPS |
| Mikrolitre Şırıngalar | SHANGHAI GAOGE SANAYİ VE TİCARET CO., LTD | LPS | |
| Fare kanülü | RWD Life Science | 803-03008-00 | Fare kanülü |
| Fare entübasyon kiti | RWD Life Science | 903-03027-00 | Bir taban, bir yükseltici, bir entübatör, bir cerrahi forseps ve bazıları dahil dizeler |
| Pasteur pipet | Biosharp yaşam bilimleri | BS-XG-03 | Entübasyonun başarısını doğrulamak için |
| Pentobarbital sodyum | Beijing Chemical Co., Çin | 20220918 | Fareleri uyuşturmak için |
Kaynaklar
- Xia, Y., et al. Protective effect of human amnion epithelial cells through endotracheal instillation against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice. Xi Bao Yu Fen Zi Mian Yi Xue Za Zhi. 33 (1), 7-11 (2017).
- Butt, Y., Kurdowska, A., Allen, T. C.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
