Laboratuvar tahlilleri, yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) uzunlamasına optik koherens tomografi (OCT) tabanlı multimodal görüntülemesinden prognostik değerden yararlanabilir. AMD'li ve AMD'siz insan donör gözleri, doku kesitlemeden önce OCT, renk, yakın kızılötesi yansıma taramalı lazer oftalmoskopi ve otofloresan kullanılarak iki uyarma dalga boyunda görüntülenir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Ex Vivo Yaşa Bağlı Makula Dejenerasyonu Araştırmaları için İnsan Donör Gözlerinin OCT Tabanlı Multimodal Görüntülemesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Optik koherens tomografi (OCT) tabanlı multimodal (MMI) klinik görüntülemeden öğrenilen yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) için bir progresyon sekansı, laboratuvar bulgularına prognostik değer katabilir. Bu çalışmada retina dokusu kesitleme öncesinde insan donör gözlerine ex vivo OCT ve MMI uygulandı. Gözler, ≥80 yaşlarındaki diyabetik olmayan beyaz donörlerden kurtarıldı ve ölümden korunmaya kadar geçen süre (DtoP) ≤6 saatti. Küreler yerinde geri kazanıldı, korneanın çıkarılmasını kolaylaştırmak için 18 mm'lik bir trefin ile puanlandı ve tamponlanmış% 4 paraformaldehit içine daldırıldı. Renkli fundus görüntüleri, ön segment çıkarıldıktan sonra diseksiyon kapsamı ve üç büyütmede trans, epi- ve flaş aydınlatması kullanan bir SLR kamera ile elde edildi. Küreler, 60 diyoptri lense sahip özel tasarlanmış bir oda içindeki bir tampona yerleştirildi. Spektral etki alanı OCT (30° makula küpü, 30 μm aralık, ortalama = 25), yakın kızılötesi yansıma, 488 nm otofloresan ve 787 nm otofloresan ile görüntülendi. AMD gözleri, retinal pigment epitelinde (RPE), drusen veya subretinal drusenoid birikintileri (SDD'ler), neovaskülarizasyon olsun veya olmasın ve başka nedenlere dair kanıt olmadan bir değişiklik gösterdi. Haziran 2016 ile Eylül 2017 arasında 94 sağ göz ve 90 sol göz iyileşti (DtoP: 3.9 ± 1.0 saat). 184 gözün %40.2'sinde erken intermediate (%22.8), atrofik (%7.6) ve neovasküler (%9.8) AMD dahil olmak üzere AMD vardı ve %39.7'sinde dikkat çekici olmayan makulalar vardı. Drusen, SDD'ler, hiper-reflektif odaklar, atrofi ve fibrovasküler skarlar OCT kullanılarak tanımlandı. artefaktlar arasında doku opaklaşması, dekolmanları (basiller, retinal, RPE, koroidal), foveal kistik değişiklik, dalgalı bir RPE ve mekanik hasar vardı. Kriyo-kesitlemeyi yönlendirmek için, fovea ve optik sinir başı yer işaretlerini ve spesifik patolojileri bulmak için OCT hacimleri kullanıldı. Ex vivo hacimler, göz izleme için referans fonksiyonu seçilerek in vivo hacimlere kaydedildi. İn vivo görülen patolojinin ex vivo görünürlüğü koruma kalitesine bağlıdır. 16 ay içinde, AMD'nin tüm aşamalarında 75 hızlı DtoP donör gözü iyileşti ve klinik MMI yöntemleri kullanılarak evrelendirildi.
Giriş
Optik koherens tomografi (OKT) rehberliğinde anti-VEGF tedavisi ile neovasküler yaşa bağlı makula dejenerasyonunun (AMD) on beş yıldır yönetilmesi, görme kaybının bu yaygın nedeninin progresyon sekansı ve mikromimarisi hakkında yeni bilgiler sunmuştur. Önemli bir tanıma, AMD'nin nörosensoriyel retina, retinal pigment epiteli (RPE) ve koroidi içeren üç boyutlu bir hastalık olmasıdır. Deneme hastalarının ve tedavi edilen klinik hastaların diğer gözlerinin OCT görüntülemesinin bir sonucu olarak, onlarca yıldır klinik bir standart olan renkli fundus fotoğrafçılığı tarafından görülenlerin ötesinde patolojinin özellikleri artık tanınmaktadır. Bunlar arasında intraretinal ne....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Birmingham'daki Alabama Üniversitesi'ndeki kurumsal inceleme kurulu, İyi Laboratuvar Uygulamaları ve Biyogüvenlik Seviyesi 2/2+'ya bağlı kalan laboratuvar çalışmalarını onayladı. Tüm ABD göz bankaları 2006 Tekdüzen Anatomik Hediyeler Yasası ve ABD Gıda ve İlaç İdaresi'ne uygundur. Advancing Sight Network de dahil olmak üzere çoğu ABD göz bankası, Amerika Göz Bankası Birliği'nin tıbbi standartlarına uygundur.
Malzeme Tablosu malzemeleri ve ekipmanları listeler. Ek Materyal 1, diseksiyon, renkli fundus fotoğrafçılığı ve OCT tabanlı MMI'ye genel bir bakış sağlar. Ek Materyal 2, OCT tabanlı MMI....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Tablo 1, 2016-2017 yılları arasında, diyabetik olmayan 94 beyaz donörden >80 yaş arası 184 gözün iyileştiğini göstermektedir. Ortalama ölüm-korunma süresi 3.9 saat (dağılım: 2.0-6.4 saat) idi. İncelenen 184 gözün 75'inde (@.2) belirli AMD vardı. Aşağıdaki kategoriler belirlendi: Dikkat Çekici Olmayan (9,7), Şüpheli (,4), Erken-Orta AMD (",8), Atrofik (%7,6), Neovasküler (%9,8), Diğer (%8,7) ve Bilinmeyen/Kaydedilmeyen/Derecelendirilemeyen (%<1). Şekil 2, Şekil
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
COVID öncesi dönemde 16 aylık bir dönemde popülasyona dayalı bir tarama yaklaşımı kullanılarak, AMD ile 75 donör gözü temin etmek mümkün olmuştur. Hepsi kısa bir DtoP ile kurtarıldı ve OCT-anchored MMI kullanılarak sahnelendi. Yaş kriteri (>80 yaş), nakledilebilir kornealara yönelik doku geri kazanımları için tipik yaş aralığının dışındadır. İlerlemiş yaşa rağmen, kriterlerimiz AMD'nin tüm aşamalarında gözlerle sonuçlandı. Birçok RPE fenotipi tüm AMD aşamalarında ortaktır ve bazıları neovasküler AMD
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
C.A.C., Heidelberg Engineering'den araştırma desteği alır ve Apellis, Astellas, Boehringer Ingelheim, Character Bioscience ve Osanni'ye danışmanlık yapar. T.A., Novartis'ten araştırma desteği alır ve Roche, Novartis, Bayer, Nidek ve Apellis için danışmanlık yapar. K.B.F. Genentech, Zeiss, Heidelberg Engineering, Allergan, Bayer ve Novartis'in danışmanıdır.
Teşekkürler
Orijinal göz tutucunun enstrümantasyonu ve tasarımı için Heidelberg Engineering'e, OCT tabanlı multimodal görüntülemeye giriş için Richard F. Spaide MD'ye, klinik görüntüleme cihazlarına erişimi kolaylaştırdığı için Christopher Girkin MD'ye ve Şekil 1 için David Fisher'a teşekkür ederiz. Araştırma için insan donör gözlerinin geri kazanılması, Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) R01EY06019 (C.A.C.), P30 EY003039 (Pittler), R01EY015520 (Smith), R01EY027948 (C.A.C., T.A.) hibeleri tarafından desteklenmiştir. R01EY030192 (Li), R01EY031209 (Stambolian) ve U54EY032442 (Spraggins), IZKF Würzburg (N-304, T.A.), Alabama EyeSight Vakfı, Uluslararas....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Beherler, 250 mL | Fisher | # 02-540K | |
| Şişeler, 1 L, Pyrex | Fisher | # 10-462-719 | koruyucu |
| Bunsen brülörü veya ısı kaynağı | Eisco | # 17-12-818 | Balmumu eritmek için |
| Kamera, dijital | Nikon D7200 | D7200 | |
| Bilgisayar ve depolama | Apple | iMac Pro; 14 TB harici sabit disk | Görüntü saklama |
| Kabı, yalıtımlı | Fisher | # 02-591-45 | Islak buz için |
| Kaplar, donör başına 2 adet, 40 mL | Fisher | Sameco Bio-Tite 40 mL # 13-711-86 | Koruyucu |
| için Pota, kuvars 30 mL | Fisher | # 08-072D | Fotoğraf için küre tutun |
| Silindir, mezun, 250 mL | Fisher | # 08-549G | |
| Dezenfektan temizlik malzemeleri | https://www.cardinalhealth.com/en/product-solutions/medical/infection-control/antiseptics.html | ||
| Lensli ve montaj braketli göz tutucu | J. Messinger ile iletişim | jeffreymessinger@uabmc.edu | Heidelberg Mühendislik özgün tasarım |
| Yüz Koruma Maskeleri | Fisher | # 19-910-667 | |
| Forseps, Harmon Fix | Roboz ve nbsp; | # RS-8247 | |
| Forseps, Mikro Adson | Roboz | # RS-5232 | |
| Forseps, Doku | Roboz | # RS-5172 | |
| Cam petri kabı, Kimax | Fisher | # 23064 | |
| Eldiven Diamond Grip | Fisher | # MF-300 | |
| Önlükler GenPro | Fisher | # 19-166-116 | |
| Görüntü düzenleme yazılımı | Adobe | Photoshop 2021, Creative Suite | |
| KimWipes | Fisher | # 06-666 | |
| Lambalar, 3 deveboynu | Schott Görüntüleme | # A20800 | |
| Mikroskop, | diseksiyon | Nikon | SMZ 1000 |
| , stereo | Olympus | SZX9 | renkli fundus fotoğrafçılığı |
| Paraformaldehit, %20 | Koruyucu için EMS | # 15713-S | ; depolama için seyreltin |
| pH metre | Fisher | # 01-913-806 | |
| Fosfat tamponu, Sorenson' s, 0.2 M pH 7.2 | EMS | # 11600-10 | |
| Halka flaş | B & H Fotoğraf | Video Sigma EM-140 DG | |
| Yakut boncuk, 1 mm çap | Meller Optik | # MRB10MD | |
| Güvenlik Gözlükleri 3M | Fisher | # 19-070-940 | |
| Tarama lazer oftalmoskop | Heidelberg Mühendislik | HRA2 | |
| Makas, kavisli yay | Roboz | # RS-5681 | |
| Keskin konteyner | Fisher | # 1482763 | |
| Deklanşör kablosu, uzaktan | Nikon | MC-DC2 | |
| Spektral Alan OCT cihazı | Heidelberg Mühendislik | Spectralis HRA& OCT | https://www.heidelbergengineering.com/media/e-learning/Totara-US/files/pdf-tutorials/2238-003_Spectralis-Training-Guide.pdf |
| Paslanmaz çelik bilyalı rulman, 25,4 mm çap | McMaster-Carr | # 9529K31 | |
| Doku işaretleme boyası, siyah | Cancer Diagnostics Inc | # 0727-1 | |
| Doku dilimleyici bıçakları | Thomas Scientific | # 6767C18 | |
| Trephine, 18 mm çaplı | Stratis Healthcare | # 6718L | |
| TV monitörü (HDMI) ve dijital kamera B& için kablo | H Fotoğraf Video | BH # Canlı | görüntüleme ve uzaktan kamera ekranı için COHD18G6PROB özellikleri |
| Balmumu, pembe diş | EMS | # 72670 | |
| Ahşap aplikatörler | Püriten | # 807-12 |
Kaynaklar
- Spaide, R. F., et al. Consensus nomenclature for reporting neovascular age-related macular degeneration data: Consensus on neovascular age-related macular degeneration nomenclature study group. Ophthalmology. 127 (5), 616-636 (2020).
- Spaide, R. F., Ooto, S., Curcio, C. A.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
