Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Niş ve Kök Hücre Sessizliğini Özetlemek için Fare İskelet Kasının Fraksiyone Edilmemiş Toplu Kültürü

2.3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/65433

⸱

2 Haziran 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Univ Paris Est Creteil, INSERM, IMRB, F-94010 Creteil, France, 2Ecole nationale vétérinaire d'Alfort, IMRB, F-94700 Maisons-Alfort, France, 3EFS, IMRB, F-94010 Creteil, France, 4AP-HP, Hopital Mondor, Service d'histologie, F-94010 Creteil, France

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

İskelet kası, her biri kas homeostazına ve rejenerasyonuna özel bir katkısı olan yerleşik kök hücreler de dahil olmak üzere birden fazla hücre tipinden oluşur. Burada, fizyolojik, in vivo ve çevresel özelliklerin çoğunu koruyan ex vivo bir ortamda kas kök hücrelerinin 2 boyutlu kültürü ve kas hücresi nişi açıklanmaktadır.

Özet

İskelet kası vücudun en büyük dokusudur ve hareketten vücut ısısı kontrolüne kadar birçok işlevi yerine getirir. İşlevselliği ve yaralanmalardan iyileşmesi, çok sayıda hücre tipine ve çekirdek kas hücreleri (miyofiberler, kas kök hücreleri) ve bunların nişleri arasındaki moleküler sinyallere bağlıdır. Deneysel ortamların çoğu bu karmaşık fizyolojik mikro ortamı korumaz ve onlar için çok önemli olan bir hücre durumu olan sessizlik içindeki kas kök hücrelerinin ex vivo çalışmasına da izin vermez. Burada, kas kök hücrelerinin nişlerinin hücresel bileşenleri ile ex vivo kültürü için bir protokol özetlenmiştir. Kasların mekanik ve enzimatik parçalanması yoluyla, 2D kültüre konan hücre tiplerinin bir karışımı elde edilir. İmmün boyama, 1 hafta içinde, miyofiberlerin ve daha da önemlisi, hareketsiz kas kök hücrelerinin özelliklerini gösteren Pax7 pozitif hücrelerin yanı sıra kültürde birden fazla niş hücrenin bulunduğunu göstermektedir. Bu benzersiz özellikler, bu protokolü hücre amplifikasyonu ve temel ve translasyonel soruları ele almak için kullanılabilecek hareketsiz benzeri kök hücrelerin üretilmesi için güçlü bir araç haline getirir.

Giriş

Hareket, solunum, metabolizma, vücut duruşu ve vücut ısısının korunması iskelet kasına bağlıdır ve iskelet kasındaki arızalar bu nedenle zayıflatıcı patolojilere (yani miyopatiler, kas distrofileri, vb.) neden olabilir. 1. Temel işlevleri ve bolluğu göz önüne alındığında, iskelet kası, normal kas fonksiyonunu destekleyen ve terapötik hedefler olarak hizmet edebilecek temel yönleri anlamaya çalışan dünya çapındaki araştırma laboratuvarlarının dikkatini çekmiştir. Ek olarak, iskelet kası, rejenerasyon ve kök hücre fonksiyonunu incelemek için yaygın olarak kullanılan bir modeldir, çünkü sağlıklı kas, çoğunlukla yerleşik kök hücreleri nedeniyle tam yaralanma ve dejenerasyondan sonra tamamen kendi kendini onarabilir2; Bunlar aynı zamanda uydu hücreleri olarak da adlandırılır ve kas liflerinin çevresindeki bazal lamina altında lokalizedir3.

Yetişkin iskelet kasının çekirdek hücreleri, miyolifler (uzun sinsityal multinükleer hücreler) ve uydu hücreleridir (bir yaralanma onları aktive edene kadar hareketsiz olan miyojenik potansiyele sahip kök hücreler). İkinci hücreler, kas rejenerasyonunun merkezi hücreleridir ve bu süreç onların yokluğunda gerçekleşemez 4,5,6,7. Yakın mikro çevrelerinde, onlara sinyal veren çok sayıda hücre tipi ve moleküler faktör vardır. Bu niş, gelişim boyunca ve yetişkinliğe kadar kademeli olarak kurulur8. Yetişkin kası birden fazla hücre tipi içerir (endotel hücreleri, perisitler, makrofajlar, fibro-adipojenik progenitörler-FAP'ler, düzenleyici T hücreleri, vb.) 9,10 ve hücre dışı matriks bileşenleri (lamininler, kollajenler, fibronektin, fibrilinler, periostin vb.) Sağlık, hastalık ve rejenerasyon bağlamında birbirleriyle ve uydu hücreleriyle etkileşime giren 11.

Bu karmaşık nişi deneysel ortamlarda korumak temel ama zordur. Aynı derecede zor olan, uydu hücreleri için kritik olan bir hücre durumu olan sessizliği korumak veya geri dönmektir9. Bu zorlukların kısmen üstesinden gelmek için, her birinin avantajları ve dezavantajları olan çeşitli yöntemler tanıtılmıştır (tartışma bölümünde ayrıntılı olarak açıklanmıştır). Burada, bu iki engeli kısmen aşabilecek bir yöntem sunulmaktadır. Kaslar başlangıçta toplanır ve daha sonra heterojen hücre karışımı kültüre sokulmadan önce mekanik ve enzimatik olarak parçalanır. Kültür boyunca, nişin birçok hücre tipi tespit edilir ve sessizliğe geri dönen uydu hücreleri gözlenir. Protokolün son adımı olarak, evrensel olarak kabul edilmiş belirteçlerin kullanılmasıyla her hücre tipinin saptanmasına izin veren immünofloresan adımları sunulmaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneyler, Institut Mondor de Recherche Biomédicale'deki (INSERM U955) Fransız ve AB hayvan yönetmeliklerine, özellikle de 2010/63/UE direktifine uygundur. Hayvanlar, A94 028 379 ve D94-028-028 sertifika numaralı hayvan tesislerinde kontrollü ve zenginleştirilmiş bir ortamda tutuldu; Sadece yetkili araştırmacılar ve hayvan bakıcıları tarafından ele alındılar ve yaşamları boyunca rahatsızlık belirtileri için hayvan barınağı personeli tarafından görsel olarak incelendiler. Diseksiyon öncesi servikal çıkık ile ötenazi yapıldı. Hayvanların yaşamları boyunca hiçbir girişimsel işlem yapılmamıştır; bu nedenle, prosedür için bir Etik Komite ve Fransa Yüksek Öğrenim, Araştırma ve Yenilik Bakanlığı'ndan onay almak gerekli değildi. Gerçekten de, 2010/63/UE direktifine göre ötenazi ve ölüm sonrası diseksiyon için herhangi bir etik izni gerekli değildir. Bu yazıda sunulan sonuçlar, vahşi tip C57BL/6NRj hattından (Malzeme Tablosuna bakınız) ve transgenik Tg:Pax7-nGFP hattı12'den (ekibimiz tarafından yetiştirilmiştir) alınmıştır. Protokol, 8-12 haftalık erkek ve dişi farelere uygulandı.

1. Reaktif ve ekipman hazırlama ön sindirimi

  1. Diseksiyon aletlerine (düz ve kavisli makaslar, forseps, Malzeme Tablosuna bakınız) p etanol püskürtün ve kağıtla kurulayın. Bir mantar plakayı alüminyum folyo ile kaplayın ve yakınınızda 10 cm'lik Petri kapları (hayvan başına bir tane) bulundurun. Elinizin altında kağıt ve p etanol bulundurun.
    NOT: Diseksiyon sonunda diseksiyon aletlerini suyla durulayın, ardından p etanol püskürtün ve kağıtla kurulayın.
  2. Dönen bir su banyosunu 37 °C'ye ayarlayın ve DMEM'i %1 penisilin-streptomisin, 0,5 U/mL kollajenaz, 3 U/mL dispas ( Malzeme Tablosuna bakınız) ve 50 mL tüp(ler)de %0,2 BSA ile birleştirerek sindirim karışımını (20 mL/hayvan) hazırlayın.
  3. Sindirim karışımını bir hücre kültürü davlumbazındaki 0.22 μm'lik bir filtreden geçirin.
    NOT: Sindirim karışımının her seferinde taze olarak hazırlanması tavsiye edilir.

2. Sindirim sonrası reaktif ve ekipman hazırlama

  1. Sindirim sonrası, karışım dondurulabilir veya kültürlenebilir. Dondurmak için,% 10 DMSO:% 90 fetal sığır serumu (FBS) ve ayrıca bir dizi kriyotüp (2 mL kriyotüp başına 1 mL hücre süspansiyonu) hazırlayın. Kültür için kültür ortamı (% 1 penisilin-streptomisin, 4 ng / mL bFGF ve% 20 FBS ile desteklenmiş DMEM) ve bir dizi 8 oyuklu plaka hazırlayın. Hücreler kaplanmadan önce plakalar kaplanmalıdır (ayrıntılar adım 7.1'de verilmiştir).
  2. Boyama için, fosfat tamponlu salin (PBS) (8 oyuklu plakanın 0.15 mL / oyuğu) ve bloke edici çözelti (PBS'de% 5 IgG içermeyen sığır serum albümini [BSA]; 0.15 mL / kuyucuk 8 oyuklu plaka).
    DİKKAT: PFA tozunu solumayın; Kimyasal bir başlık altında hazırlayın ve kullanın.

3. Diseksiyon

  1. Ötenazi yapılan hayvana% 70 etanol püskürtün. Karın hizasında büyük bir makasla yatay bir kesi (vücudun sol tarafından sağ tarafa) yapın ve bel çevresini kesin. Kasları ortaya çıkarmak için arka ayaklardaki deriyi çekin (Şekil 1A).
  2. Hayvanı alüminyum folyo kaplı mantar plakaya yerleştirin ve karşı ön ayağı ve arka ayağı sabitleyin. Tüm arka bacak kaslarını (ön ve arka) buz üzerine yerleştirilmiş 10 cm'lik bir Petri kabına hızla çıkarın (Şekil 1B,C). Kuadriseps ve arka kasların etrafındaki alanlardan yağ dokusunu çıkarmak için özel dikkat gösterin. Fasya, sinirler ve tendonlar da diseksiyon için harcanan toplam süreyi tehlikeye atmıyorsa bu noktada çıkarılabilir.
    NOT: Her iki arka bacak için optimal diseksiyon süresi yaklaşık 15-20 dakika olmalıdır. Diseksiyon süresinin 30 dakikayı geçmemesi tavsiye edilir.
  3. Nemli kalmaları için ara sıra kaslara DMEM damlaları ekleyin, ancak çok fazla değil, çünkü bu doğramayı zorlaştıracaktır. Diğer arka bacak için tekrarlayın. Bir hayvanın tüm kasları Petri kabına girdikten sonra (Şekil 1D), pürüzsüz bir homojenat elde etmek için 7-10 dakika makasla ince ince doğrayın (Şekil 1E).
    NOT: Bu protokolde L-glutamin, piruvat ve 4.5 g/L D-glikoz ile desteklenmiş DMEM kullanılır.

figure-protocol-1
Şekil 1: Kültür öncesi kas hazırlığı. (A) Adım 3.1'de açıklandığı gibi arka bacak kaslarını ortaya çıkarmak için deri çıkarılır. (B,C) Tüm arka bacak kasları, adım 3.2'de açıklandığı gibi kemiklerin etrafında (B) ve (C) kemikler arasında toplanır. (D) Hasat edilen kaslar, adım 3.3'te açıklandığı gibi, nemli kalmaları için DMEM damlaları ile buz üzerinde 10 cm'lik bir Petri kabına yerleştirilir. (E) Kaslar, bu resimde gösterilen kıvamda pürüzsüz bir macun elde edilene kadar makasla ince ince doğranır. (F) Son santrifüjlemeden sonra peletin bir görüntüsü; Mavi ok, kesikli mavi çizginin altında tüpe karşı olan peleti vurgular. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

4. Sindirim

NOT: Çürütmenin sonunda, bölüm 5 için 4 °C'de bir santrifüj, bir kova buz, üç hücre süzgeci (100 um, 70 um, 40 um) ve üç adet 50 mL tüp (hayvan başına) gereklidir.

  1. Sindirim karışımını adım 1.2'de açıklandığı gibi hazırlayın ve süzün. Karışımı buz üzerinde tutun.
  2. Tüm kaslar doğrandıktan sonra, homojenatı 20 mL sindirim karışımı ile 50 mL'lik bir tüpe koyun. Sızıntıyı önlemek için kapağın kenarlarını esnek bir filmle sarın ve tüpü düşük ila orta hızda (50 rpm) 37 °C çalkalama suyu banyosuna yerleştirin.
  3. 37 °C'de 1 saat bekledikten sonra kapağı açın ve homojen bir karışım elde etmek için 10 mL'lik bir pipetle yukarı ve aşağı yedi kez hafifçe pipetleyerek karıştırın. Kapağın etrafına yeni film uygulayın ve çalkalama suyu banyosuna geri yerleştirin. 1 saat sonra tüpü çıkarın ve banyoyu kapatın.
    NOT: Kültür için, bölüm 7.1'e geçmeden önce plakaları adım 5'de açıklandığı gibi kaplamak için bu inkübasyon süresini kullanın.

5. Filtrasyon

  1. Sindirim tüpünü 50 mL'ye kadar soğuk DMEM (% 1 penisilin-streptomisin ile desteklenmiş) ile doldurun. Tüpü üç kez ters çevirerek karıştırın. Sonraki adımlar için DMEM'i bir buz kovasında tutun.
  2. 50 mL'lik yeni bir tüpe 100 μm'lik bir hücre süzgeci yerleştirin. Sindirilmiş karışımı hücre süzgecinden geçirerek yeni tüpe aktarın. 4 °C'de 5 dakika boyunca 600 x g'da santrifüjleyin. Süpernatanı sıvı bir atık kabına dökün.
  3. Peletleri 1 mL soğuk DMEM'de (% 1 penisilin-streptomisin ile desteklenmiş) yeniden süspanse edin. Tüpü aynı DMEM ile 50 mL'ye kadar doldurun. NOT: Santrifüjleme atlanırsa, bir sonraki peletin tanımlanması ve bakımı daha zor olacaktır.
  4. Yeni bir 50 mL'lik tüpe 70 μm'lik bir hücre süzgeci yerleştirin. Santrifüjlenmiş/yeniden süspanse edilmiş karışımı hücre süzgecinden yeni tüpe geçirin. 4 °C'de 5 dakika boyunca 80 x g'da santrifüjleyin.
    NOT: Bu adım zorunlu değildir, ancak hücre kalıntılarını ortadan kaldırmak için önerilir.
  5. 50 mL'lik yeni bir tüpe 40 μm'lik bir hücre süzgeci yerleştirin. Süpernatanı hücre süzgecinden yeni tüpe geçirin. 4 °C'de 5 dakika boyunca 600 x g'da santrifüjleyin, süpernatanı sıvı bir atık kabına dökün ve peleti kültür kaputunun altında FBS'de yeniden süspanse edin. Pelet bu adımda çok küçüktür (Şekil 1F).
    NOT: 40 μm'lik süzgeçten filtreleme, kültürlerin daha sonraki boyanmasında spesifik olmayan bir sinyal verecek olan kalıntıları giderir.

6. (İsteğe bağlı) Dondurma

NOT: Bölüm 6 isteğe bağlıdır. Protokol filtrelemeden sonra duraklatılabilir, ancak bu hücre sağkalımını ve kültür başarısını azaltabilir.










Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu protokol, uydu hücrelerini ve çoğu hücreyi endojen nişlerinden korurken kas hücresi kültürüne izin verir. Şekil 2, protokolün ana adımlarını özetlerken, diseksiyon ve sindirimin temel kısımları Şekil 1'de sunulmaktadır. Arka bacak kas sisteminin diseksiyonu önerilir (Şekil 1A-C), çünkü bu kas grubu iyi çalışılmıştır ve gelişimsel bir kökeni ve moleküler hiyerarşileri paylaşır14<...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Yetişkin iskelet kası fonksiyonu, ince bir şekilde düzenlenmiş bir dizi hücresel etkileşim ve moleküler sinyal ile desteklenir. Burada, bu parametrelerin fizyolojik mikro çevreye çok benzeyen bir ex vivo ortamda incelenmesine izin veren bir yöntem sunulmaktadır.

Birkaç grup, miyojenik hücreleri kültürlemek için in vitro yöntemler bildirmiştir. Bu yöntemler, miyojenik progenitör özelliklerini incelemek için uydu hücrelerini izole etmeyi amaçladı. Saf uydu hücrelerini, soleus v...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmezler.

Teşekkürler

Şekil 2 için Servier Medical Art (https://smart.servier.com/) şablonlarından yararlanılmıştır. FR laboratuvarı, Association Française contre les Myopathies - AFM via TRANSLAMUSCLE (19507 ve 22946 hibeleri), Fondation pour la Recherche Médicale - FRM (EQU202003010217, ENV202004011730, ECO201806006793), Agence Nationale pour la Recherche - ANR (ANR-21-CE13-0006-02, ANR-19-CE13-0010, ANR-10-LABX-73) ve La Ligue Contre le Cancer (IP/SC-17130) tarafından desteklenmektedir. Yukarıdaki fon sağlayıcıların bu çalışmanın tasarımında, toplanmasında, analizinde, yorumlanmasında veya raporlanmasında veya bu makalenin yazılmasında hiçbir rolü yoktu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
anti-CD31BD550274seyreltme 1:100
anti-FOSBSanta Cruzsc-7203seyreltme 1:200
anti-GFPAbcamab13970seyreltme 1:1000
anti-Ki67Abcamab16667seyreltme 1:1000
anti-MyHCDSHBMF20-cseyreltme 1:400
anti-MYODAktif Motif39991seyreltme 1:200
anti-MYOGSanta Cruzsc-576seyreltme 1:150
anti-Pax7Santa Cruzsc-81648seyreltme 1:100
anti-PDGFR ve alfa;İnvitrojenPA5-16571seyreltme 1:50
b-FGFPeprotech450-33konsantrasyon 4 ng/mL
Sığır serum albümini (BSA) – sindirim için kullanılır Sigma AldrichA7906-1006konsantrasyonu %0.2
BSA IgG içermez, proteaz içermez ve boyama için kullanılırJackson ImmunoResearch001-000-162konsantrasyon %5
Hücre süzgeci 40 umDominique Dutscher352340
Hücre süzgeci 70 umDominique Dutscher352350
Hücre süzgeci 100 umDominique Dutscher352360
KollajenazRoche10103586001konsantrasyonu 0,5 U/mL
Kültür plakasıSarstedt94.6140.802
Dimetil sülfoksit (DMSO)EuromedexUD8050-05-A
DispaseRoche4942078001konsantrasyonu 3 U/mL
Diseksiyon forseps boyutu 5Güzel Bilim Araçları91150-20
Diseksiyon forseps boyutu 55Güzel Bilim Aletleri11295-51
Diseksiyon makası (büyük, düz)Güzel Bilim Aletleri9146-11doğrama için ideal
Diseksiyon makası (küçük, kavisli)Güzel Bilim Aletleri15017-10
Diseksiyon makası (küçük, düz)Güzel Bilim Aletleri14084-08
Dulbecco'nun Modifiye Edilmiş Eagle's Medium (DMEM)ThermoFisher41966-029
EdU Click-iT kitiThermoFisherC10340
Fetal sığır serumu ve seçenek 1EurobioCVF00-01
Fetal sığır serumu – seçenek 2Gibco10270-106 
MatrigelCorning Yaşam Bilimleri354234kaplama çözeltisi
ParafilmDominique Dutscher090261esnek film
Paraformaldehit ve seçenek 1PanReac AppliChem ITW Reaktifleri2115111.1209konsantrasyon %4
Paraformaldey & ndash; seçenek 2ThermoFisher28908konsantrasyon %4
Penisilin streptomisinGibco15140-122
Çalkalama su banyosuThermoFisherTSSWB27
TritonX100Sigma AldrichT8532-500 MLkonsantrasyon %0,5
Yabani tip farelerJanvierC57BL/6NRj

Kaynaklar

  1. Frontera, W. R., Ochala, J. Skeletal muscle: A brief review of structure and function. Calcified Tissue International. 96 (3), 183-195 (2015).
  2. Forcina, L., Cosentino, M., Musarò, A. Mechanisms regulating muscle regeneration: Insights into the interrelated and time-dependent phases of tissue healing. Cells. 9 (5), 1297(2020).
  3. Mauro, A. Satellite cell of skeletal muscle fibers. Journal of Biophysical and Biochemical Cytology. 9 (2), 493-495 (1961).
  4. Lepper, C., Partridge, T. A., Fan, C. -M. An absolute requirement for Pax7-positive satellite cells in acute injury-induced skeletal muscle regeneration. Development. 138 (17), 3639-3646 (2011).
  5. McCarthy, J. J., et al. Effective fiber hypertrophy in satellite cell-depleted skeletal muscle. Development. 138 (17), 3657-3666 (2011).
  6. Murphy, M. M., Lawson, J. A., Mathew, S. J., Hutcheson, D. A., Kardon, G. Satellite cells, connective tissue fibroblasts and their interactions are crucial for muscle regeneration. Development. 138 (17), 3625-3637 (2011).
  7. Sambasivan, R., et al. Pax7-expressing satellite cells are indispensable for adult skeletal muscle regeneration. Development. 138 (17), 3647-3656 (2011).
  8. Hicks, M. R., Pyle, A. D. The emergence of the stem cell niche. Trends in Cell Biology. 33 (22), 112-123 (2022).
  9. Relaix, F., et al. Perspectives on skeletal muscle stem cells. Nature Communications. 12 (1), 692(2021).
  10. Gama, J. F. G., et al. Role of regulatory T cells in skeletal muscle regeneration: A systematic review. Biomolecules. 12 (6), 817(2022).
  11. Loreti, M., Sacco, A. The jam session between muscle stem cells and the extracellular matrix in the tissue microenvironment. NPJ Regenerative Medicine. 7 (1), 16(2022).
  12. Sambasivan, R., et al. Distinct regulatory cascades govern extraocular and pharyngeal arch muscle progenitor cell fates. Developmental Cell. 16 (6), 810-821 (2009).
  13. Pereira, P. D., et al. Quantification of cell cycle kinetics by EdU (5-ethynyl-2'-deoxyuridine)-coupled-fluorescence-intensity analysis. Oncotarget. 8 (25), 40514-40532 (2017).
  14. Bismuth, K., Relaix, F. Genetic regulation of skeletal muscle development. Experimental Cell Research. 316 (18), 3081-3086 (2010).
  15. Yin, H., Price, F., Rudnicki, M. A. Satellite cells and the muscle stem cell niche. Physiological Reviews. 93 (1), 23-67 (2013).
  16. Lertkiatmongkol, P., Liao, D., Mei, H., Hu, Y., Newman, P. J. Endothelial functions of platelet/endothelial cell adhesion molecule-1 (CD31). Current Opinion in Hematology. 23 (3), 253-259 (2016).
  17. Scholzen, T., Gerdes, J. The Ki-67 protein: From the known and the unknown. Journal of Cellular Physiology. 182 (3), 311-322 (2000).
  18. Abou-Khalil, R., Le Grand, F., Chazaud, B. Human and murine skeletal muscle reserve cells. Stem Cell Niche. 1035, 165-177 (2013).
  19. Pasut, A., Oleynik, P., Rudnicki, M. A. Isolation of muscle stem cells by fluorescence activated cell sorting cytometry. Methods in Molecular Biology. 798, 53-64 (2011).
  20. Liu, L., Cheung, T. H., Charville, G. W., Rando, T. A. Isolation of skeletal muscle stem cells by fluorescence-activated cell sorting. Nature Protocols. 10 (10), 1612-1624 (2015).
  21. Montarras, D., et al. Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration. Science. 309 (5743), 2064-2067 (2005).
  22. Qu, Y., Edwards, K., Barrow, J. Isolation, culture, and use of primary murine myoblasts in small-molecule screens. STAR Protocols. 4 (2), 102149(2023).
  23. Danoviz, M. E., Yablonka-Reuveni, Z. Skeletal muscle satellite cells: Background and methods for isolation and analysis in a primary culture system. Methods in Molecular Biology. 798, 21-52 (2011).
  24. Saclier, M., Theret, M., Mounier, R., Chazaud, B. Effects of macrophage conditioned-medium on murine and human muscle cells: analysis of proliferation, differentiation, and fusion. Methods in Molecular Biology. 1556, 317-327 (2017).
  25. Giordani, L., et al. High-dimensional single-cell cartography reveals novel skeletal muscle-resident cell populations. Molecular Cell. 74 (3), 609-621 (2019).
  26. Tabula Muris Consortium et al. Single-cell transcriptomics of 20 mouse organs creates a Tabula Muris. Nature. 562 (7727), 367-372 (2018).
  27. Brunetti, J., Koenig, S., Monnier, A., Frieden, M. Nanopattern surface improves cultured human myotube maturation. Skeletal Muscle. 11 (1), 12(2021).
  28. Denes, L. T., et al. Culturing C2C12 myotubes on micromolded gelatin hydrogels accelerates myotube maturation. Skeletal Muscle. 9 (1), 17(2019).
  29. LaFramboise, W. A., et al. Effect of muscle origin and phenotype on satellite cell muscle-specific gene expression. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 35 (10), 1307-1318 (2003).
  30. Azhar, M., Wardhani, B. W. K., Renesteen, E. The regenerative potential of Pax3/Pax7 on skeletal muscle injury. Journal of Generic Engineering and Biotechnology. 20 (1), 143(2022).
  31. Hardy, D., et al. Comparative study of injury models for studying muscle regeneration in mice. PLoS One. 11 (1), e0147198(2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

İskelet Kası KültürüKas Kök HücreleriSatellit HücrelerKas NişiEx Vivo KültürİmmünboyamaHücre AmplifikasyonuFloresan Aktive Hücre AyıklamaTek Hücre Dizileme
Niş ve Kök Hücre Sessizliğini Özetlemek için Fare İskelet Kasının Fraksiyone Edilmemiş Toplu Kültürü
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.