Bu yazıda deneysel farelerde ankilozan spondilit tedavisinde Du-yakı sırasında ameliyat prosedürleri ve alınması gereken önlemler ayrıntılı olarak anlatılmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bu yazıda deneysel farelerde ankilozan spondilit tedavisinde Du-yakı sırasında ameliyat prosedürleri ve alınması gereken önlemler ayrıntılı olarak anlatılmaktadır.
Ankilozan spondilit (AS), primer olarak aksiyel iskeleti etkileyen, giderek kötüleşen ve sakat bırakan bir artrit formudur. Bu hastalık esas olarak omurga ve sakroiliak eklemi içerir. Hastalığın ilerleyen dönemlerinde omurga ve sakroiliak eklemin kaynaşması meydana gelebilmekte ve omurga sertliği ve kifozun yanı sıra yürüme güçlüğü ile sonuçlanmakta, bu da iş ve günlük yaşam aktivitelerinin kalitesini ciddi şekilde etkileyerek hastaya, aileye ve topluma ağır bir yük getirmektedir. AS için alternatif bir tedavi olarak farmakoterapiye artan bir ilgi gösterilmiştir. Yakı, Geleneksel Çin Tıbbında (TCM) kullanılan eski bir terapötik tekniktir. Sıradan yakı temelinde geliştirilen benzersiz ve yenilikçi bir dış tedavi olan yakı tedavisi, AS üzerinde kesin bir terapötik etkiye sahiptir. Du-moxibustion, meridyenleri, akupunktur noktalarını, Çin bitkisel tıbbını ve yakıyı entegre etmek için TCM'nin uyumlu tekniklerini ustaca birleştirir. Bu makale, AS tedavisinde Du-yakı mekanizmasının incelenmesi için deneysel bir temel sağlamak amacıyla deneysel farelerde Du-yakı sırasında alınacak operasyon prosedürlerini ve alınacak önlemleri ayrıntılı olarak açıklamaktadır.
Ankilozan spondilit (AS), primer olarak aksiyel iskeleti etkileyen, giderek kötüleşen ve sakat bırakan bir artrit formudur. En son epidemiyolojik araştırmaya göre, dünyadaki insanların ~%0,01-%1,8'i bu durumdan muzdariptir1, bunların çoğu genç erkeklerdir (erkek/kadın oranı ~2-3:1'dir)2. Çin popülasyonunda AS insidansı %0.2-%0.4'tür. Bu hastalık esas olarak omurga ve sakroiliak eklemi içerir. Hastalığın ilerleyen dönemlerinde omurga ve sakroiliak eklemin kaynaşması ortaya çıkarak omurga sertliği ve kifozun yanı sıra yürüme güçlüğü ile sonuçlanabilir, bu da iş ve günlük yaşam aktivitelerinin kalitesini ciddi şekilde etkileyerek hastaya, aileye ve topluma ağır bir yük getirir1. Şu anda, AS için kesin bir çözüm yoktur ve hem farmakolojik hem de farmakolojik olmayan sağlanan tedaviler öncelikle ağrıyı hafifletmeye, hastalığın ilerlemesini yavaşlatmaya ve yaşam kalitesini artırmaya odaklanmaktadır. Son yıllarda, farmakoterapötik seçeneklerinçok sınırlı olması nedeniyle3, AS için alternatif bir tedavi haline gelen farmakoterapiye artan bir ilgi gösterilmiştir. Çin'de hastalar genellikle küçük yan etkileri olan ve tedavi sırasında büyük kolaylık sağlayan Geleneksel Çin Tıbbı'ndan (TCM) oluşan harici tedaviyi tercih ederler.
Yakı, TCM'de kullanılan eski bir terapötik tekniktir. Du-yakı, Du meridyeninin omurga segmentinde "köpüklü ilaçlı yakı"dan oluşan harici bir tedavi tekniğidir. Esas olarak AS tedavisinde kullanılır ve güvenlik ve etkinlik göstermiştir. Sıradan yakı ile karşılaştırıldığında, Du-yakı geniş bir yakı alanı, büyük bir moxa konisi, güçlü ateş gücü ve yüksek sıcaklıközelliklerine sahiptir 4. Sistematik bir inceleme ve meta-analiz, yakının AS5 için etkili bir tamamlayıcı tedavi olduğunu göstermektedir. Yakın zamanda yapılan bir çalışma, AS hastalarının klinik semptomlarının ve bazı inflamatuar faktörlerinin yakı6 ile düzeldiğini doğrulamıştır. Çalışmalar, Du-yakının β-endorfinin beyin içeriğini artırabildiğini ve merkezi bir analjezik etki7 uygulayabildiğini, HLA-B27 geninin8 ekspresyonunu aşağı regüle edebildiğini ve AS'nin nüks oranını geciktirdiğini ortaya koymuştur. Du-yakı ayrıca inflamatuar indeks ESR (ESR) ve C-reaktif protein (CRP), tip I kollajenin C-terminal peptidi (CTX-I) ve Dickkopf1 proteini (DKK1) seviyelerini azaltarak AS'nin ilerlemesi üzerinde iyileştirici bir etkiye sahiptir9,10.
Başka bir klinik çalışma, Du-yakının, bağışıklık mekanizmasını dengelemek için düzensiz T hücresi alt kümelerini, Ig'yi ve kompleman C3'ü daha da ayarlayabildiğini gösterdi11. Kemik metabolizması açısından, yakı serum alkalin fosfataz (ALP) ve serum fosforunun (SP) yükselişini inhibe edebilir, serum kalsiyumunu (S-Ca), kemik mineral yoğunluğunu (BMD) ve kemik gücünü artırabilir12. Ayrıca, Du-moxibustion, AS hastalarında yorgunluk semptomlarını hafifletmek için omurga fonksiyonunu birden fazla noktada onarabilir13. Bazı hayvan çalışmaları, AS tedavisinde yakının potansiyel mekanizmasını ortaya koymuştur. Bir çalışma, yakının genel sağlık durumunu önemli ölçüde iyileştirdiğini, pençe kalınlığı seviyelerini azalttığını ve omurganın bağ dokusu örneklerinde IL-1β, PGE2, IL-6 ve TNF-α seviyelerini azalttığını göstermiştir. Metabolik yol analizi, tanımlanan metabolitleri TCA döngüsünün yanı sıra lipit, amino asit, bağırsak florası ve pürin metabolizmasına bağladı14. Başka bir çalışma, yakının pro-inflamatuar sitokinler, IL-1β, TNF-α, IL-17 ve IL-6'nın ekspresyonunu baskıladığını gösterdi; RANKL, RANK, ALP ve OCN'nin mRNA seviyelerini azalttı; ve AS farelerinde histopatolojik özellikleri geliştirdi15.
Bu çalışmalar yakının AS tedavisinde etkili olabileceğini düşündürse de, bu bulguları doğrulamak ve AS'li hastalarda yakı için optimal tedavi protokolünü belirlemek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır. Ekibimiz, 35 yılı aşkın bir süredir Çin klinik pratiğinde yaygın olarak yürütülen ve uygulanan geleneksel Çin yakısının temel teorisine ve pratik işleyişine dayalı olarak yakı tedavisini yarattı ve değiştirdi. Yakı ile AS tedavisi ile ilgili az sayıda yüksek kaliteli çalışma olmasına rağmen, AS tedavisindeki endikasyonu kanıtlarla desteklenmiştir. Bununla birlikte, AS'yi Du-yakı ile tedavi etme mekanizması daha fazla çalışmaya değer. Hayvan çalışması, AS tedavisinde Du-yakı mekanizmasını araştırmak için önemli bir yöntemdir. Du-yakının klinik çalışması nispeten olgundur, ancak hayvan deneylerinde mekanizmanın incelenmesinde nadiren kullanılır. Bu yazıda AS deney farelerinin tedavisinde yakı sırasında yapılması gereken işlemler ve alınması gereken önlemler ayrıntılı olarak anlatılmaktadır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tüm hayvan deneyleri, Shandong Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Deneysel Hayvan Refahı Etik İnceleme Komitesi tarafından onaylanmıştır (No. SDUTCM20230831301).
1. Hayvan hazırlama
2. AS fare modelinin kurulması
NOT: AS modeli, klasik bir modelleme yöntemiolan kıkırdak proteoglikan (PG) ile indüklenmiştir 16,17,18,19,20,21. BALB / c suş fareleri, tendinit ve spondiliti indüklemek için tekrar tekrar PG ile aşılandı. Bu protokolde kullanılan malzemeler, reaktifler ve aletlerle ilgili ayrıntılar için Malzeme Tablosuna bakın.
3. Yakı
NOT: Yakı için en önemli üç hammaddeyi önceden hazırlayın (Şekil 1).
4. Artrit indeksinin (AI) değerlendirilmesi
5. Rotarod testi
NOT: Rotarod testi, farelerin dönen tambur üzerinde geçirdikleri süreyi kaydederek motor koordinasyonunu ve dengesini değerlendirmek için kullanılır. Bu deney, 20 dakikalık aralıklarla ayrılmış üç denemeden oluşuyordu. Resmi test verileri üçüncü denemeden kaydedildi ve ilk ikisi eğitim tatbikatları olarak hizmet etti.
6. Açık alan testi (OFT)
NOT: OFT, patolojik davranışı tanımlamayı amaçlayan otonom hareket durumunu değerlendirmek için kullanılır. Aparatı oluşturmak için dört kare açık alan arena (50 cm x 50 cm x 40 cm) bir araya getirildi. Kutunun alt kısmı dokuz eşit kareye bölünmüştür.
7. Ötenazi ve örnek toplama
8. Histolojik analiz
9. Enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA)
10. İstatistiksel analiz
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
PG kaynaklı model fareler, ekstremitelerde ve ayak parmaklarında kızarıklık ve şişme ile karakterize periferik artrit semptomları geliştirdi ve AS'nin tezahürüne çok benzeyen 14. hafta gibi erken bir tarihte yavaş yavaş eksenel artrit geliştirdi. Bu nedenle, son enjeksiyondan22 hafta sonra artrit indeksi (AI) 3 puanın üzerindeyse AS fare modeli başarılı kabul edildi. Farelerin pençeleri şişmiş göründüğünde, Du-moxibustion tedavisi haftada bir kez toplam 3x olarak gerçekleştirildi. Tedaviden sonra,...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
AS klinik olarak sırt, bel ve eklem şişliği ağrısı olarak kendini gösterir ve ağır vakalarda omurga deformitesi ve eklem sertliği oluşabilir26. Erken tanı ve tedavi, AS'li hastaların yaşam kalitesini artırabilir, özürlülük oranlarını azaltabilir ve prognozlarını iyileştirebilir. Geleneksel Çin tıbbına (TCM) göre, AS'nin böbrekte ve Du meridyeninde Yang eksikliğinin yanı sıra dahili olarak soğuk kötülüğün birikmesinden kaynaklandığına inanılmaktadır. TCM, meridyenler kavramına dayanan yakının vücud...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Genel Programı (No.82174491) ve Qilu Geleneksel Çin Tıbbı Okulu Akademik Okul Kalıtım Projesi (No. Lu Weihan [2020]132). Shandong Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Laboratuvar Hayvanları Merkezi'ne bize deneysel koşullar sağladığı için teşekkür ederiz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 10 EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd., Şangay, Çin | ||
| alkol pedleri | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biyoloji Mühendisliği A.Ş., LTD, Qingdao, Çin | ||
| anestezi makinesi | Tıbbi Malzemeler & Hizmetler INT. LTD, Keighley, İngiltere | ||
| santrifüj tüpleri | Axygen, Corning, NewYork, UAS | ||
| komple Frech'in adjuvanı (CFA) | aladdin, Şangay, Çin | F393378 | |
| pamuk topu | Henan RUIKE TIBBİ Equipment Co., Ltd., Xinxiang, Çin | ||
| pamuklu gazlı bez | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd., Xinxiang, Çin | ||
| sığır eklem kıkırdağından | |||
| tüy dökücü krem | Veet, Reckitt Benckiser (Çin) Investment Co. LTD, Şangay, Çin | ||
| elektronik terazi | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd., Şangay, Çin | ||
| Axygen, Corning, NewYork, UAS | |||
| göz yağlayıcı | Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Pekin, Çin | ||
| zencefil | kendi kendine hazırlama | ||
| GraphPad Prism 7 yazılımı | GraphPad Yazılımı, Boston, ABD | ||
| saç kesme makinesi | Süper insan Grubu CO LTD, Jinhua, Çin | ||
| ısıtma yastıkları | Shenzhen Leshuo Tech Co., Ltd., Shenzhen, Çin | ||
| eksik Freund ' s adjuvan (IFA) | aladdin, Şangay, Çin | F393371 | |
| enjeksiyonu şırınga | Shandong Xinhua Ande Tıbbi Malzemeler Co, LTD, Zibo, Çin | ||
| izofluran | Shenzhen Rayward Yaşam Teknolojisi Co, LTD, Shenzhen, Çin | R510-22-10 | |
| joss sopa | Shijiazhuang Lidu Kokulu Sanayi A.Ş., LTD., Shijiazhuang, Çin | ||
| meyve sıkacağı | Braun (Şangay) Co., Ltd., Şangay, Çin | ||
| bıçağı | kendi kendine hazırlanan | ||
| çakmak | Zhejiang kaplan çakmak Co. LTD | ||
| harcı | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD., Luoyang, Çin | ||
| Fare IL-17 ELISA Kiti | absin, Şangay, Çin | abs520009-96T | |
| Fare TNF-&alfa; ELISA Kiti | Wuhan Sanying, Wuhan, Çin | KE10002 | |
| dut kağıdı | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, Çin | ||
| OFT | Xinruan, Şangay, Çin | XR-XZ301 | |
| kağıt bardak | kendi kendine hazırlama | ||
| pipetleri | OXFORD BIO INSTRUMENTS INC., Oxford, Birleşik Krallık | ||
| rafine moxa kadife | kendi kendine hazırlama | ||
| rotarod | Xinruan, Şangay, Çin | XR-6C | |
| scientz-48L kriyojenik yüksek verimli doku öğütücü | Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| makas | Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, Çin | ||
| yarı otomatik parafin kesit alma makinesi | Leica Camera AG, Watznach, Almanya | ||
| SPSS 25.0 yazılımı | International Business Machines Corporation, NewYork, UAS | ||
| TCM tozu | kendi kendine hazırlama | ||
| ipuçları | Biosharp, Labgic, Pekin, Çin | ||
| yazı fırçası | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, Çin |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.