Yöntem makalesi

Hepatik Glikoz Üretimi, Ürejenez ve Lipoliz, Perfüze Fare Karaciğer Modeli Kullanılarak Ölçüldü

DOI:

10.3791/65596

⸱

6 Ekim 2023

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Sciences, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, 2NNF Center for Protein Research, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, 3Department for Clinical Biochemistry, Copenhagen University Hospital - Bispebjerg and Frederiksberg, 4Department of Cellular and Molecular Medicine, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen, 5NNF Center for Basic Metabolic Research, Faculty of Health and Medical Sciences, University of Copenhagen

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, karaciğer mimarisini bozmadan, ancak karaciğer dışı faktörlerin yokluğunda karaciğer metabolizmasının akut ve doğrudan regülasyonunu incelemek için fare karaciğerinin yerinde perfüzyonu için sağlam bir yöntem sunuyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karaciğer, besin metabolizması da dahil olmak üzere çok sayıda fonksiyona sahiptir. Diğer in vitro ve in vivo karaciğer araştırma modellerinin aksine, izole edilmiş perfüze karaciğer, karaciğer biyolojisi ve metabolizmasının, karaciğer dışı faktörlerin etkisinden ayrılmış, bozulmamış bir hepatik mimari ile tüm karaciğerde incelenmesine izin verir. Karaciğer perfüzyonları başlangıçta sıçanlar için geliştirilmiştir, ancak yöntem farelere de uyarlanmıştır. Burada fare karaciğerinin in situ perfüzyonu için bir protokol tarif ediyoruz. Karaciğer, oksijenli Krebs-Henseleit bikarbonat tamponu ile portal venden antegrad olarak perfüze edilir ve çıktı, devreyi kapatmak için infrahepatik inferior vena kavanın klemplenmesi ile suprahepatik inferior vena kavadan toplanır. Bu yöntem kullanılarak, bir test bileşiğinin doğrudan hepatik etkileri, ayrıntılı bir zaman çözünürlüğü ile değerlendirilebilir. Karaciğer fonksiyonu ve canlılığı en az 3 saat boyunca stabildir ve aynı deneye iç kontrollerin dahil edilmesine izin verir. Bu modeli kullanan deneysel olasılıklar çoktur ve karaciğer fizyolojisi ve karaciğer hastalıkları hakkında fikir verebilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karaciğer metabolizmada önemli bir organdır. Glikoz, lipid ve amino asit metabolizmasını düzenleyerek tüm vücut enerji dengesinin kontrolünde anahtar rol oynar. Dünya çapında karaciğer hastalıklarındaki artış, önemli bir küresel sağlık yükü olarak ortaya çıkmaktadır ve patofizyoloji ve karaciğer fonksiyonları üzerindeki sonuçları hakkında daha fazla bilgiye ihtiyaç vardır.

İn vivo çalışmaları tamamlamak için karaciğer araştırmaları için çeşitli in vitro modeller geliştirilmiştir. Kemirgenlerden ve insanlardan izole edilmiş ve kültürlenmiş primer hepatositler yaygın olarak kullanılmaktadır. Parankimal olmayan hücreler, dife....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan deneyleri, Danimarka Hayvan Deneyleri Müfettişliği, Danimarka Çevre ve Gıda Bakanlığı (izin 2018-15-0201-01397) ve yerel etik komitesinin izniyle 2010/63/EU sayılı AB direktifi, Ulusal Sağlık Enstitüleri (yayın No. 85-3) ve hayvan deneylerini düzenleyen Danimarka mevzuatının yönergeleri izlenerek gerçekleştirilmiştir (1987). Bu terminal bir prosedürdür ve ölüm nedeni derin anestezi altında diyaframın kansızlaşması ve delinmesidir.

1. Deney hayvanları

  1. İstenilen suş, yaş ve cinsiyete sahip fareler elde edin. Bu çalışmada 11-16 haftalık erkek C57BL / 6JRj fareleri kullanılmıştır. Kafes başına 5 adede kadar....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir uyaranın veya substratın ilgilenilen molekülün salınmasına yol açıp açmadığını belirlemek için sabit bir taban çizgisi gereklidir. Şekil 3A'da başarılı bir deney örneği gösterilmektedir. Perfüze karaciğerde üre üretimi 2 dakikalık aralıklarla ölçülür ve ortalama ± SEM olarak gösterilir. İki stimülasyon periyodunun her birinden önceki başlangıç periyotları sabittir. İki stimülasyon periyodu boyunca ortalama üre üretimi ve ilgili önceki taban çizgileri

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İzole perfüze fare karaciğeri, hepatik metabolizmanın dinamikleri ve moleküler mekanizmaları üzerine yapılan çalışmalar için güçlü bir araştırma aracıdır. Dakikadan dakikaya numune toplama imkanı, bir test bileşiğinin karaciğer üzerindeki doğrudan etkisinin ayrıntılı bir değerlendirmesini sağlar. İn vivo çalışmalarla karşılaştırıldığında, perfüze karaciğer, kan tarafından taşınan karaciğer dışı faktörlerden kaçınarak ve deneysel koşullar üzerinde tam kontrol ile karaciğer metabolizmasını izole bir şekilde incele.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar bu makaleyle ilgili herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çalışmalar ve Nicolai J. Wewer Albrechtsen, Novo Nordisk Vakfı Mükemmeliyet Gelişmekte Olan Araştırmacı Hibe - Endokrinoloji ve Metabolizma (Başvuru No. NNF19OC0055001), Avrupa Diyabet Araştırmaları Vakfı Geleceğin Lideri Ödülü (NNF21SA0072746) ve Danimarka Bağımsız Araştırma Fonu, Sapere Aude (1052-00003B). Novo Nordisk Vakfı Protein Araştırmaları Merkezi, Novo Nordisk Vakfı tarafından finansal olarak desteklenmektedir (Hibe sözleşmesi NNF14CC0001). Şekil 1B, biorender.com ile oluşturulmuştur. Dr. Rune E. Kuhre'ye (Novo Nordisk A/S) perfüze fare karaciğeri ile ilgili verimli görüşmeler için teşekkür ederiz.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
3 muslukBD394601
Altromin ıslah diyetiAltromin Spezialfutter1319
Kalsiyum klorür dihidrat (CaCl2· 2H2O)SigmaC8106
Kateterler (0,7 mm)BD381812
Filtre kağıdı (gözenek boyutu 2,0 &# 181; m)MilliporeAP2029325
Glikoz kitiQuantiChromTMDIGL-100Düşük konsantrasyon protokolü
KetaminMSD Hayvan Sağlığı51148590 mg / kg
Ligatür (siyah steril ipek)Agnthos14739
Magnezyum sülfat (MgSO4< / sub>)Sigma230391
Esterleşmemiş yağ asit kitiFujifilm Wako ChemicalsNEFA-HR(2)
Ameliyat masası, tripod standında ısıtmalı, tip 873Harvard Bioscience, Inc.
Potasyum klorür (KCl)SigmaP9541
Potasyum dihidrojen fosfat (KH2< / sub > PO < sub > 4< / sub >)Merck1.04877
Makaralı Pompa, dört kanallıHarvard Bioscience, Inc.730100
Şık bantMediq danmark4001910
Sodyum bikarbonat (NaHCO3)SigmaS5761
Sodyum klorür (NaCl)SigmaS1679
Termostatik SirkülatörHarvard Bioscience, Inc.730125Banyo hacmi 3 L, 230 V/50 Hz
BoruTygonE3603İç çap 1,59 mm, dış çap 3,18 mm
Üniversal perfüzyon sistemiHarvard Bioscience, Inc.732316Temel ünite uniper UP-100, tip 834
VaminFresenius KabiB05ABA01Karışık amino asitler
Damar kelepçesi adaptörüDeutsche BiomedicalDBC1002
WindkesselHarvard Bioscience, Inc.
KsilazinRompun Veteriner 53070110 mg/kg
733776 Gemi kelepçeleri Deutsche Biomedical DBC1005 732068

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bale, S. S., Geerts, S., Jindal, R., Yarmush, M. L. Isolation and co-culture of rat parenchymal and non-parenchymal liver cells to evaluate cellular interactions and response. Scientific Reports. 6, 25329(2016).
  2. Lauschke, V. M., et al.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Karaci er rejeniziHepatik LipolizKaraci er Perf zyonuGlukagon SinyalleriBesin MetabolizmasPortal Ven KateterizasyonuKan Gaz AnaliziGlikojenoliz

İlgili makaleler