$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Bu çalışmada sıçanlar üzerinde yapılan tüm prosedürler, Çin Halk Cumhuriyeti tarafından resmi olarak kabul edilen Ulusal Laboratuvar Hayvanı Refahı ve Etik İnceleme Kılavuzları Standardı'na (2018) ve Ulusal Akademiler Yayınları'ndan Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na (15) bağlı kalmıştır. Bu protokol üç ana adımdan oluşmaktadır. İlk olarak, sıçan ceketleri, farklı ağırlıklara sahip sıçanların bireysel vücut şekillerine göre uyarlanır ve takılır. Daha sonra, akupunktur manipülasyonu standart prosedürler izlenerek gerçekleştirilir. Son olarak, sıçanlar ceketlerinde asılı kalırken, iğneler aynı gruptaki sıçanlar arasında eşzamanlı müdahale ihtiyacını karşılamak için yerinde kalır.
1. İğneleme öncesi hazırlık
- Sıçan ceketinin üretimi
- Ceketlerini yapmadan önce fareleri tartın ve vücut şekillerini ölçün. Bu protokolün farklı ağırlıklardaki sıçanlar için uygunluğunu doğrulamak için, Şekil 2'de gösterildiği gibi, a'dan f'ye ölçümleri kapsayan, vücut boyutlarının bağımsız ölçümleri için 220 g, 300 g, 400 g ve 520 g ağırlığındaki sıçanları seçin.
NOT: Sıçanların vücut oranları ile karşılık gelen ceket boyutları arasındaki korelasyon da Şekil 2'de sunulmaktadır. Farklı ağırlıktaki sıçanlar için ilgili vücut uzunluğu parametreleri Tablo 1'de kaydedilmiştir.
- Sıçan ceketi yapmak için dikdörtgen bir kalın, koyu kumaş parçası kesin. Kumaşı, sıçanın karnının en kalın kısmı etrafında ölçülen çevreye eşit katlanmamış genişlikte kullanın. Kumaşın uzunluğu, sıçanın burun ucundan kuyruğunun tabanına kadar olan mesafeye eşittir (bkz. Şekil 2).
- Kumaşı ikiye katlayın ve sağ yamuk oluşturmak için sol üst köşeyi yaklaşık 45°-65° açıyla kesin (bkz. Şekil 3A).
- Soldaki iki tarafı pamuk ipliği ile sıkıca dikin. Rehberlik için Şekil 1B ve Şekil 3B'ye bakın.
- Sıçanın üst ve alt uzuvlarının geçmesi için kumaşın her iki tarafında birer tane olmak üzere iki küçük delik açın (bkz. Şekil 3C). İki üst ekstremite arasındaki mesafe, sıçan ceketinin üst delikleri arasındaki boşluğu belirler. İki alt ekstremite arasındaki mesafe, sıçan ceketinin alt delikleri arasındaki boşluğu belirler.
- Sıçan ceketinin üst ve alt delikleri arasındaki boşluk olarak hizmet etmek için sıçanın koltuk altı ile iliumun önü arasındaki uzunlamasına mesafeyi kullanın. Sıçan ceketindeki üst deliğin çevresini belirlemek için omuz ekleminin çevresini kullanın. Sıçan ceketindeki alt deliğin çevresi için kalça ekleminin çevresini kullanın.
- Her deliğin yanına, fareyi sabitlemek için ceketin açılış ucundan vücudun etrafına sıkıca sarılabilen ve sıkıca sarılabilen uzun bir bez kayış dikin.
- Sıçan ceket giyme yöntemi
- Fareyi ceketin içine giydirmeye devam etmeden önce eldiven giyin. Sıçan ceketinin orta ve arka kısmını bir elinizle masanın üzerinde tutarak başlayın. Diğer elinizle farenin kuyruğunu beslenme kafesinden tutun ve yavaşça ceketin içine yerleştirin.
- Sıçan ileri doğru hareket ettikçe, başı ceketin başlığına ulaşacaktır. Bu noktada, sol ve sağ üst uzuvlarını ceketteki deliklerden dikkatlice çıkarmak için iki elinizi kullanın.
- Bağlama ipini ceketin açık ucundan alın, soldan sağa doğru çaprazlayın ve farenin gövdesine sıkıca sarın. Doğru sabitlemeyi sağlamak için gövdenin karşı tarafına sıkıca bağlayın. Sıçanın üst uzuvlarının kısıtlanmasının ardından, alt uzuvlarını sabitlemek için aynı prosedürü tekrarlayın.
- Uzuvlarını ceket deliklerinden çekerken farenin pençeleri tarafından ısırılmamak veya çizilmemek için önlem alın. İpin sıkılığının uygun şekilde ayarlandığından, yani sıçanlarda lokal uzuv iskemisi ve hipoksiye neden olacak kadar sıkı olmadığından ve sıçanın kolayca kaçmasına izin verecek kadar gevşek olmadığından emin olun (bkz. Video 1).
- Sabitleme rafı ve S-şekilli demir kancalar
- Sabitleme rafı, iki ağır demir tepsiden (24 cm uzunluğunda, 12 cm genişliğinde ve 2 cm yüksekliğinde) ve her tepsiye sıkıca kaynaklanmış bir demir sütundan (60 cm uzunluğunda) oluşur. Sabit bir yükseklikte ayarlanabilen ve muhafaza edilebilen bir vida bağlantı yapısı kullanarak iki demir kolona aynı yükseklikte sağlam bir demir çubuk (145 cm uzunluğunda) sabitleyin (bkz. Şekil 4A).
- Ceketi giyen fareyi demir çubuğa bağlamak için S şeklindeki kancaları (11 cm çapında) kullanın. Kancanın bir ucunu ceketin kayışının etrafına sarın, diğer ucunu demir çubuğa asın. Fareyi çubuğa sabitlemek için iki S şeklinde kanca kullanın. Genel yapı için lütfen Şekil 1D ve Şekil 4B'ye bakın.

Şekil 2: Sıçan vücut şekli ve eşleşen sıçan ceketi boyutunun karşılık gelen diyagramı. Diyagramda, a parametresi, üst ekstremiteler ile sıçanın gövdesi arasındaki eklemin arkasındaki enine mesafeyi temsil eder. Bu değer, sıçan ceketinin üst ekstremiteleri için penetran delikler arasındaki boşluk ölçümü olarak kullanılır. Benzer şekilde, b parametresi, sıçanın iki taraflı alt ekstremitelerinin gövdeye bağlandığı sırttaki enine mesafeyi temsil eder. Bu ölçüm, sıçan ceketinin alt ekstremiteleri için delici deliklerin aralığını belirler. C parametresi, sıçanın ceketinin kumaşı için genişlik ölçümü olarak kullanılabilen, sıçanın karnının en kalın kısmının çevresini belirtir. D parametresi, sıçanın koltuk altından iliumunun önüne kadar olan mesafeyi temsil eder ve ceketin üst ve alt delikleri arasındaki uzunlamasına mesafeyi belirler. E parametresi, sıçanın burun ucundan kuyruğunun tabanına kadar olan uzunlamasına mesafeye karşılık gelir ve sıçanın ceket bezi için uzunluk ölçümü görevi görür. F parametresi, üst ekstremite ile sıçanın gövdesini birbirine bağlayan artikülasyonun çevresini gösterir ve üst ekstremitelerin içinden geçtiği deliğin çevresi olarak hizmet eder. G parametresi, alt ekstremiteleri ve sıçanın gövdesini birbirine bağlayan eklemin çevresini temsil eder ve alt ekstremitelerin geçtiği deliğin çevresini belirler. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Vücut Ağırlığı (g) | Vücut Şekli Parametreleri (cm) |
| a | b | c | d | e | f | g |
| 220 | 6.0 | 7.0 | 15.0 | 8.0 | 19.0 | 5.0 | 7.0 |
| 300 | 7.0 | 7.5 | 17.0 | 10.0 | 21.0 | 6.0 | 8.0 |
| 400 | 8.0 | 8.5 | 19.0 | 11.5 | 23.0 | 6.5 | 9.0 |
| 520 | 8.0 | 10.0 | 20.0 | 12.5 | 26.0 | 7.0 | 9.5 |
Tablo 1. Farklı vücut ağırlıklarına sahip sıçanların vücut şekil parametrelerinin ölçüm sonuçları.

Şekil 3: Sıçan ceketinin fiziksel görünümünü ve kullanımını gösteren diyagram. (A) Sıçan ceketinin düzlem dış görünümü. Sıçanın ceketinin şekli, sıçanın üst ve alt uzuvlarının geçmesi için sol ve sağ taraflarda ayrı açıklıklar bulunan dik açılı bir yamuğu andırır. (B) Sıçan ceketinin katlanmamış dış görünümü. Başlığın kapatılması, fareleri girmeye ikna etmek için çok önemli bir bileşen görevi gören yarı kapalı bir boşluk oluşturur. (C) Ceket giymiş bir farenin yandan görünümü. Sıçanın uzuvları giysideki açıklıklardan geçtikten sonra, kayışlar gövdenin ventral yüzeyinden geçer ve uygun gerginlikle arkaya güvenli bir şekilde sabitlenir. Bu, sıçanın nispeten hareketsiz olmasını sağlar. (D) Sıçan ceketi giymiş bir sıçanın karın görünümü. Ceketin ventral yüzeyi, sıçanın karın derisini açığa çıkararak ventral noktalarda akupunktur için kolay erişim sağlar. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Video 1: Fare ceketini giyiyor. Bu video, sıçanı ceketin içine giydirmenin tipik bir sürecini göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: Yükseltilmiş sabitleme rafının fiziksel görünümünü ve kullanımını gösteren şema. (A) Yükseltilmiş sabitleme rafı. Bu raf, esas olarak her tepsiye kaynaklanmış iki dikey demir sütundan (60 cm uzunluğunda) ve zemine paralel yerleştirilmiş uzun bir yatay demir çubuktan (145 cm uzunluğunda) oluşur. Yatay çubuğu dikey sütunlarla aynı yükseklikte sabitlemek için vidalar kullanılır. (B) Sabitleme rafında sıçan süspansiyonu. Sıçan ceketlerini giyen sıçanlar, sıçan başına iki S-şekilli kanca kullanılarak sabitleme rafına güvenli bir şekilde sabitlenir. (C) Birden fazla sıçanda eşzamanlı elektroakupunktur tedavisi. Kuyruk hareketinden kaynaklanan herhangi bir potansiyel paraziti önlemek için, sıçanlar arasında bir sıçanın kuyruğunun uzunluğuna eşdeğer uygun mesafenin korunması gerekiyordu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Elektroakupunktur prosedürü
- Rutin hazırlık
- Sabitleme rafını yatay bir masaüstüne veya zemine yerleştirin.
- İğneleme prosedüründen önce, tam maruz kalmayı sağlamak için elektrikli bir tıraş makinesi kullanarak akupunktur noktalarının etrafındaki kürkü çıkarın. Delinecek akupunktur noktası, Guanyuan (CV4, göbeğin yaklaşık 25 mm altında) gibi sıçanın karnına yerleştirildiğinde, karın akupunktur noktalarını ortaya çıkarmak için sıçan giysisinin genişliğini uygun şekilde kısaltın.
- Akupunktur noktasını, sıçan ceketi tarafından örtülmeyen karnın orta hattındaki boşluktan bulun (bkz. Şekil 3D) ve ardından iğneyi enjekte edin.
- Delinecek akupunktur noktaları, Baihui (parietal kemiğin ortasında bulunan GV20) gibi sıçanın kafasında olduğunda, GV20 çevresindeki cildi tamamen ortaya çıkarmak için kafadaki ilgili pozisyonda küçük bir kesi yapın (Bkz. Şekil 1C).
- Üst ekstremitede Neiguan (PC6, ön ekstremitenin iç tarafında, bilek ekleminden yaklaşık 3 mm uzakta radyal ve ulnar sütürler arasında) veya alt ekstremitede Zusanli (ST36, diz ekleminin posterolateral tarafında, fibula başının yaklaşık 2 mm altında) gibi sıçanların uzuvlarında akupunktur noktaları bulunurken, Akupunktur noktalarının bariz bir şekilde açığa çıkması nedeniyle, uzuvun sabitlenmesine yardımcı olmak için bir elinizi kullanın, diğeri ise doğrudan akupunktur işlemini gerçekleştirebilir.
- Akupunktur noktası, Shenshu gibi bir sıçanın sırtına veya beline yerleştirildiğinde (BL23, 2. bel omurlarının altında, sırtın orta hattından 6 mm uzakta), ilgili bölgenin derisini tamamen ortaya çıkarmak için sıçanın ceketinin ortasında yaklaşık 2 cm genişliğinde bir açıklık açın (Bkz. Şekil 1C).
- Sıçanı ceketin içine giydirin. Akupunktur noktalarının lokal cildini alkollü çubuklarla dezenfekte ettikten sonra akupunktur işlemine başlayın.
- İğneleme tekniği: Akupunktur noktasını doğru bir şekilde bulun. Steril tek kullanımlık bir akupunktur iğnesini (0.16 mm x 7 mm) sıçanın akupunktur noktasına uygun derinlikte yerleştirin.
- Elektroakupunktur operasyonu
- Elektrot telini yatay demir çubuğun etrafına sarın. Bu adım, elektroakupunktur klipsine etki eden yerçekimi kuvveti nedeniyle iğnenin düşme riskini azaltır. Ardından, elektrot telinin ucunu iğne sapına sağlam bir şekilde takın.
- Gücü açın ve uygun frekans, akım ve zaman parametrelerini seçin. Bu deneyde parametreler 2 Hz, 1 mA ve 15 dk olarak ayarlandı. Parametreler ayarlandıktan sonra elektroakupunktur tedavi sürecini başlatın (Bkz. Video 2 ve Video 3).
- Sıçanlarda eşzamanlı elektroakupunktur: Tedavi sırasında, aynı gruptaki sıçanları S-şekilli kancaları kullanarak demir çubuk üzerinde birlikte askıya alın ve aynı anda elektroakupunktur müdahalesine girmelerine izin verin.
- NOT: Demir çubuk sadece sağlam değil, aynı zamanda bir grup fareyi aynı anda tedavi edecek kadar uzun olmalıdır. Bu deneyde, sıçanlar arasında uygun aralık ve parazit olmaması sağlanırken, 3-4 sıçan aynı anda tedavi edilebilir (bkz. Şekil 4C).
- Elektroakupunktur tedavisi sırasında sıçan tepkilerinin gözlemlenmesi: Bu fiksasyon yönteminin sıçanlarda elektroakupunktur için uygunluğunu, operasyonu tamamlamak için gereken personel sayısı, bir sıçanı düzeltmek için geçen süre, sıçanların elektroakupunktur tedavisi sırasındaki tepkisi, işlem sırasında düşen iğne sayısı ve operasyon sırasında meydana gelebilecek kaza sonucu ölümler gibi aşağıdaki faktörlere göre değerlendirin.
- İğnelerin çıkarılması
- Önceden ayarlanan süre tamamlandığında, elektroakupunktur aparatı otomatik olarak kapanacaktır. İğne sapına bağlı küçük klipsi çıkarın ve akupunktur iğnesini sıçanın derisinin altından dikkatlice çıkarın, böylece elektroakupunktur tedavi işlemi tamamlansın.
- Kayışları gevşetin, farenin ceketinin baş kapağını kaldırın ve fareyi kafesin üzerine yerleştirin. Sıçan daha sonra kendini ceketten serbest bırakmakta ve kafese bağımsız olarak girmekte özgür olacaktır (bkz. Video 4).
Video 2. Bel bölgesinde iğneleme akupunktur noktaları. Bu video, sıçanın ceket içindeki giydirilmesini, akupunktur iğnelerinin beldeki akupunktur noktalarına yerleştirilmesini ve ardından bir elektroakupunktur aparatının bağlanmasını kapsayan kapsamlı ve tutarlı prosedürü göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Video 3. Karın ve alt ekstremitede iğneleme akupunktur noktaları. Bu video, sıçanın ceket içindeki giydirilmesini, akupunktur iğnelerinin karın ve alt ekstremitede bulunan akupunktur noktalarına yerleştirilmesini ve ardından bir elektroakupunktur aparatının bağlanmasını kapsayan kapsamlı ve tutarlı prosedürü göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.
Video 4. Sıçan ceketinin çıkarılması. Bu video, ceketi fareden çıkarmanın geleneksel uygulamasını göstermektedir. Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.