Bu protokol, EV'nin pıhtılaşma yeteneğinin bir göstergesi olarak hücre dışı vezikülden (EV) zengin plazmanın kullanımını araştırır. EV'den zengin plazma, diferansiyel santrifüjleme ve ardından yeniden kalsifikasyon işlemi ile elde edilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
EV ile Aktive Edilen Pıhtılaşma Süresi (EV-ACT) Kullanılarak Hücre Dışı Vezikülün (EV) Prokoagülan Aktivitesinin Belirlenmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Hücre dışı veziküllerin (EV) çeşitli hastalıklardaki rolü, özellikle güçlü prokoagülan aktiviteleri nedeniyle artan bir ilgi görmektedir. Bununla birlikte, klinik ortamlarda EV'nin prokoagülan aktivitesini değerlendirmek için acil bir yatak başı testine ihtiyaç vardır. Bu çalışma, EV'nin prokoagülan aktivitesinin bir ölçüsü olarak EV'den zengin plazmanın trombin aktivasyon zamanının kullanılmasını önermektedir. Sodyum sitratlı tam kan elde etmek için standartlaştırılmış prosedürler kullanıldı, ardından EV'den zengin plazma elde etmek için diferansiyel santrifüjleme yapıldı. EV bakımından zengin plazma ve kalsiyum klorür test kabına eklendi ve viskoelastisitedeki değişiklikler bir analizör kullanılarak gerçek zamanlı olarak izlendi. EV-ACT olarak adlandırılan EV'den zengin plazmanın doğal pıhtılaşma süresi belirlendi. Sonuçlar, sağlıklı gönüllülerden elde edilen plazmadan EV çıkarıldığında EV-ACT'de önemli bir artış olduğunu ortaya koyarken, EV zenginleştirildiğinde önemli ölçüde azaldığını ortaya koydu. Ayrıca, preeklampsi, kalça kırığı ve akciğer kanserinden alınan insan örneklerinde EV-ACT önemli ölçüde kısaldı, bu da plazma EV seviyelerinin yükseldiğini ve kan hiperkoagülasyonunun desteklendiğini gösterdi. Basit ve hızlı prosedürü ile EV-ACT, yüksek plazma EV düzeyleri olan hastalarda pıhtılaşma fonksiyonunu değerlendirmek için bir yatak başı testi olarak umut vaat etmektedir.
Giriş
Hiper pıhtılaşmanın neden olduğu tromboz, beyin travması1, preeklampsi2, tümörler3 ve kırık hastaları4 dahil olmak üzere çeşitli hastalıklarda önemli bir rol oynar. Hiper pıhtılaşmanın altında yatan mekanizma karmaşıktır ve son zamanlarda pıhtılaşma bozukluklarında hücre dışı veziküllerin (EV) rolüne vurgu yapılmıştır. EV'ler, çapı 10 nm ila 1000 nm arasında değişen, hücre zarından ayrılan iki katmanlı bir yapıya sahip vezikül benzeri cisimlerdir. Başta pıhtılaşma bozuklukları olmak üzere çeşitli hastalık süreçleriyle ilişkilidirler5. Birkaç çalışma,....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
İnsan örneklerinin toplanması, Tianjin Tıp Üniversitesi Genel Hastanesi Tıbbi Etik Komitesi tarafından onaylandı. İnsan venöz kanının toplanması, Çin Ulusal Sağlık Komisyonu tarafından yayınlanan kılavuzu, yani WS/T 661-2020 Venöz Kan Örneklerinin Toplanması Kılavuzunu sıkı bir şekilde takip etti. Kısaca, sağlıklı bireylerden bilgilendirilmiş onam ile anterior brakiyal bölge veninden kan alındı ve örnekler 1:9 oranında %3.2'lik sodyum sitrat antikoagülan kullanılarak karıştırıldı. Sadece sodyum sitrat antikoagülan örnekleri toplandığında, ilk toplama kabı atıldı. İşleme akışı, numune alındıktan sonraki 0,5 saat içinde başlatıldı. Yetişkin sağlıklı denekler, bilgilendi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
EV'den zengin plazmanın trombin aktivasyon süresi, plazma pıhtılaşma süresi ölçümü için viskoelastik yöntem analizörü kullanılarak ölçüldü. Makine dört ana bileşenden oluşur: bir elektronik sinyal dönüştürücü, bir prob, bir algılama tankı ve bir ısıtma elemanı (Şekil 1A,B). Prob, plazma viskozitesindeki değişiklikleri tespit etmek için yüksek frekanslı ve düşük genlikli salınımlar kullanır. Günlük kalite kontrolü, öncelikle test platformunun stabilitesini değerlendirmek ve p.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışmada, EV'den zengin plazmanın hazırlanması tarif edildi ve yöntemin rasyonalitesi akış sitometrisi kullanılarak doğrulandı. Daha sonra, rekalsifiye plazma örnekleri, viskoelastisite ilkelerine dayalı bir pıhtı analizörü kullanılarak ACT süresi için analiz edildi24. Şekil 3A'da gösterildiği gibi, ultrasantrifüjleme yoluyla elde edilen EV'lerin konsantrasyonunun EV-ACT süresini kısalttığı, ultrasantrifüjlemeden sonra EV seviyelerini düşüren süpernatantın ise uzu.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Tüm yazarlar potansiyel bir çıkar çatışması olmadığını beyan etmişlerdir.
Teşekkürler
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı, hibe no. 81930031, 81901525. Ayrıca, bize makine ve teknik rehberlik sağladığı için Tianjin Century Yikang Medical Technology Development Co., Ltd.'ye teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| AccuCount Ultra Gökkuşağı Floresan Parçacıkları | 3.8 mikrom; Spherotech, Lake Forest, IL, ABD | kantitatif tespiti için | |
| Werfen (Çin | 0020006800 | 20 mM | |
| Yüzyıl Pıhtı analizörü | Tianjin Yüzyıl Yikang Tıbbi Teknoloji Geliştirme Co, Ltd | Prensip, plazma viskozitesini viskoelastik yöntemle ölçmektir | |
| Tek kullanımlık prob ve test kabı | Tianjin Yüzyıl Yikang Tıbbi Teknoloji Geliştirme Co, Ltd | ||
| LSR Fortessa akış sitometresi | BD, ABD | tespit etmek için kullanılır | |
| Biocytex, Marsilya, Fransa | 7801 | Megamix, seçilen çaplarda mikro boncukların bir karışımından oluşur: 0,5 & mikro; m, 0.9 ve mikro; m ve 3 &mikro;m. |
Kaynaklar
- Zhang, J., Zhang, F., Dong, J. F. Coagulopathy induced by traumatic brain injury: systemic manifestation of a localized injury. Blood. 131 (18), 2001-2006 (2018).
- Han, C., Chen, Y. Y., Dong, J. F. Prothrombotic state associated with preeclampsia. Current Op....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
