Burada, otomatik bir hücre kültürü sistemi için bir protokol sunuyoruz. Bu otomatik kültür sistemi, işçiliği azaltır ve indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerin bakımından, çeşitli hücre tiplerine farklılaşmaya kadar, indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerin işlenmesine aşina olmayan araştırmacılar da dahil olmak üzere kullanıcılara fayda sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin korunması ve ayırt edilmesi için otomatik bir kültür sistemi
Bu makalede
Özet
Özet
Sonsuz kendi kendine çoğalma yeteneğine sahip insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin (hiPSC'ler), nadir hastalık patolojilerinin aydınlatılması, yeni ilaçların geliştirilmesi ve hasarlı organları restore etmeyi amaçlayan rejeneratif tıp dahil olmak üzere çok sayıda alanda uygulamaları olması beklenmektedir. Buna rağmen, hiPSC'lerin sosyal uygulaması hala sınırlıdır. Bu kısmen, iPSC'lerin küçük çevresel değişikliklere karşı yüksek duyarlılığı nedeniyle, ileri bilgi ve sofistike teknik becerilerle bile kültürdeki farklılaşmayı yeniden üretmenin zorluğundan kaynaklanmaktadır. Otomatik bir kültür sisteminin uygulanması bu sorunu çözebilir. Bir araştırmacının becerisinden bağımsız olarak yüksek tekrarlanabilirliğe sahip deneyler, çeşitli enstitüler arasında paylaşılan bir prosedüre göre beklenebilir. Daha önce iPSC kültürlerini koruyabilen ve farklılaşmayı indükleyebilen birkaç otomatik kültür sistemi geliştirilmiş olsa da, bu sistemler insanlaştırılmış, çok eklemli robotik kollardan yararlandıkları için ağır, büyük ve maliyetlidir. Yukarıdaki sorunları iyileştirmek için, daha kompakt, daha hafif ve daha ucuz olmasını sağlayan basit bir x-y-z ekseni kayar ray sistemi kullanarak yeni bir sistem geliştirdik. Ayrıca, kullanıcı yeni taşıma görevleri geliştirmek için yeni sistemdeki parametreleri kolayca değiştirebilir. Bir görev oluşturulduktan sonra, kullanıcının tek yapması gereken iPSC'yi hazırlamak, istenen görev için gereken reaktifleri ve sarf malzemelerini önceden sağlamak, görev numarasını seçmek ve zamanı belirtmektir. Sistemin, besleyici hücreler olmadan birkaç geçiş yoluyla iPSC'leri farklılaşmamış bir durumda tutabildiğini ve kardiyomiyositler, hepatositler, nöral progenitörler ve keratinositler dahil olmak üzere çeşitli hücre tiplerine farklılaşabildiğini doğruladık. Sistem, yetenekli araştırmacılara ihtiyaç duymadan kurumlar arasında yüksek oranda tekrarlanabilir deneylere olanak tanıyacak ve yeni girişlerin önündeki engelleri azaltarak hiPSC'lerin daha geniş bir araştırma alanı yelpazesinde sosyal olarak uygulanmasını kolaylaştıracaktır.
Giriş
Bu makale, bir firma ile işbirliği yaparak ürettiğimiz insan kaynaklı pluripotent kök hücreler (iPSC) için otomatik bir kültür sistemi için gerçek ve ayrıntılı kullanım prosedürleri sağlamayı ve temsili sonuçları göstermeyi amaçlamaktadır.
Makalenin 2007 yılında yayınlanmasından bu yana, iPSC tüm dünyada dikkat çekmektedir1. En büyük özelliği herhangi bir somatik hücreye farklılaşabilmesi nedeniyle, rejeneratif tıp, inatçı hastalıkların nedenlerinin aydınlatılması ve yeni terapötik ilaçların geliştirilmesi gibi çeşitli alanlarda uygulanması beklenmektedir 2,3. Ek olarak, insan iPSC'den türetilen somatik hücrelerin kullanılması, önemli etik kısıtlamalara tabi olan hayvan deneylerini azaltabilir. iPSC'lerle yeni yöntemler araştırmak için sürekli olarak çok sayıda homojen iPSC'ye ihtiyaç duyulsa da, bunları yönetmek çok zahmetlidir. Ayrıca, iPSC'yi ele almak, ince kültürel ve çevresel değişikliklere karşı bile yüksek hassasiyeti nedeniyle zordur.
Bu sorunu çözmek için, insanlar yerine otomatik kültür sistemlerinin görevleri yerine getirmesi beklenir. Bazı gruplar, hücre bakımı ve farklılaşması için birkaç otomatik insan pluripotent kök hücre kültürü sistemi geliştirmiş ve başarılarını yayınlamıştır 4,5,6. Bu sistemler, çok eklemli robotik kol(lar)ı donatır. Robotik kollar, sadece insan kol hareketlerini yüksek oranda taklit etmeleri bakımından değil, aynı zamanda kol(lar) için daha yüksek maliyet(ler), daha büyük ve daha ağır sistem paketlemeleri ve hedeflenen hareketleri elde etmek için mühendisler tarafından zaman alıcı eğitim çabaları gerektirmeleri bakımından da kusurludur 7,8. Cihazın ekonomik, alan ve insan kaynakları tüketimi noktalarında daha fazla araştırma tesisine tanıtılmasını kolaylaştırmak için, iPSC'nin bakımı ve çeşitli hücre tiplerinefarklılaşması için yeni bir otomatik kültür sistemi geliştirdik 9.
Yeni sistem için gerekçemiz, çok eklemli robotik kollar yerine X-Y-Z eksenli bir ray sistemini benimsemekti9. Robotik kolların karmaşık el benzeri işlevlerini değiştirmek için, bu sisteme üç tür özel işlevsel kol ucunu otomatik olarak değiştirebilen yeni bir fikir uyguladık. Burada, süreç boyunca mühendislerin katkılarına ihtiyaç duyulmaması nedeniyle, kullanıcıların yazılım üzerinde basit siparişlerle nasıl kolayca görev programları yapabileceklerini de gösteriyoruz.
Robotik kültür sistemlerinden biri, farklılaşma için 3D hücre agregaları olarak 96 oyuklu plakalar kullanılarak embriyoid cisimlerin yapımını göstermiştir4. Burada bildirilen sistem 96 oyuklu plakaları işleyemez. Bunlardan biri, bir insan pluripotent kök hücresi olmamasına rağmen, bir hücre hattı kullanarak mevcut iyi üretim uygulaması (cGMP) derecesine ulaştı5. Burada ayrıntıları verilen otomatik kültür sistemi, laboratuvar deneylerine yardımcı olmak amacıyla geliştirilmiştir (Şekil 1). Bununla birlikte, seviye IV güvenlik kabinine eşdeğer temiz seviyeleri tutmak için yeterli sisteme sahiptir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Kansai Tıp Üniversitesi Etik Komitesi, KMUR001 adlı sağlıklı gönüllü kaynaklı iPSC'lerin üretilmesini ve kullanılmasını onayladı (onay No. 2020197). Açıkça işe alınan donör, resmi bilgilendirilmiş onam verdi ve hücrelerin bilimsel kullanımını kabul etti.
NOT: Mevcut arayüz (Windows XP işletim sistemi altında çalışan "ccssHMI" adlı özel yazılım) temel işlem ekranıdır. Yukarıda belirtilen arayüz altında, kullanıcıların çeşitli işlemleri başlatmasına izin veren bir dizi sekme düzenlenmiştir.
1. Yükleme işlemleri
- Tıkla Yükleniyor yazılımın üst ekranındaki düğmesine basın. Yükleme Hazırlığı Başlat düğmesine tıklayın.
- Aparata girecek tabak(lar)ı veya tabak(lar)ı aparattaki yerlerine yerleştirin.
NOT: Her kapağın üzerine bulaşık tanımlaması için gerekli bilgiler yazılmalıdır. - Ön sürgülü camı manuel olarak kapatın ve mekanik güvenlik onay düğmesine basın.
- Yazılımda tabak(lar)ın veya tabak(lar)ın türünü ve miktarını seçin.
- Yükleme Hazırlığı Tamamlandı düğmesine tıklayın. Yükleme Başlat düğmesine tıklayın.
- Sisteme bir çanak yüklendikten sonra, yazılımda iPS hücreli veya iPS hücresiz gibi çanak üzerindeki bilgileri seçin. Yazılımdaki her yemekle ilgili notları kaydedin.
- Yükleme işlemini tamamlamak için sonundaki Kayıt düğmesine tıklayın.
2. Boşaltma işlemi
- Tıkla Kaldır Yazılımın üst ekranındaki düğmesine basın. Yazılımda kaldırılacak bulaşık(lar)ı seçin.
- Tabak(lar)ı seçtikten sonra, Boşaltma Hazırlığı Başlat düğmesine tıklayın. Boşaltma Başlat düğmesine tıklayın.
- Bulaşık(lar) inkübatörden sistemdeki tezgaha aktarıldıktan sonra Bulaşık Çıkarma düğmesine basın.
- Ön sürgülü pencereyi manuel olarak açın ve bulaşık(lar)ı çıkarın. Ön sürgülü camı manuel olarak kapatın ve mekanik güvenlik onay düğmesine basın.
3. Sarf malzemelerinin takviyesi: pipetler, tüpler ve ortam
- Pipetler, tüpler ve ortam gibi sarf malzemelerini yenilemek için yazılımın üst ekranındaki Sarf Malzemeleri düğmesine tıklayın, ardından yenilenecek öğeyi seçin.
- Pipetler
- Pipet düğmesine tıklayın. Yenile düğmesini seçin.
- Kullanıcının yazılımda yenilemek istediği bir raf seçin. Yenileme Başlat düğmesine tıklayın.
- Tezgah üzerindeki pipet saklama alanının kapağının açıldığını onayladıktan sonra, ön sürgülü pencereyi manuel olarak açın ve gerektiğinde pipetleri doldurun.
- Ön sürgülü camı manuel olarak kapatın ve mekanik güvenlik onay düğmesine basın. Tamamlananları Yenile düğmesini tıklayın.
- Stok Yenileme Kurulumu düğmesini tıklayın ve stok yenileme bilgilerini girin, ardından Kayıt düğmesini tıklayın.
- Tamamlananları Yenile düğmesini tıklayın.
- Tüp
- Tüp düğmesine tıklayın. Yenile düğmesini seçin.
- Kullanıcının yazılımda yenilemek istediği bir raf seçin. Yenileme Başlat düğmesine tıklayın.
- Rafın en üste taşındığını onayladıktan sonra, Tüpü Doldur düğmesine tıklayın.
- Ön sürgülü pencereyi manuel olarak açın ve tüpleri gerektiği gibi doldurun.
- Ön sürgülü camı manuel olarak kapatın ve mekanik güvenlik onay düğmesine basın.
- Tamamlananları Yenile düğmesini tıklayın.
- Stok Yenileme Kurulumu düğmesini tıklayın ve stok yenileme bilgilerini girin, ardından Kayıt düğmesini tıklayın. Kapat düğmesine tıklayın.
- Orta
- Orta düğmesini tıklayın. Yazılımda Yenile düğmesini seçin.
- Kullanıcıların yenilemek istediği üç raftan birini seçin. Yenileme Başlat düğmesine tıklayın.
- Orta depolama alanının kapağının açıldığını onayladıktan sonra, ön sürgülü pencereyi manuel olarak açın ve ortamı doldurun.
- Ön sürgülü camı manuel olarak kapatın ve mekanik güvenlik onay düğmesine basın.
- Tamamlananları Yenile düğmesini tıklayın.
- Yenile düğmesini tıklatın ve ortamın adı ve miktarı da dahil olmak üzere ortamın bilgilerini girin. Gerekirse ek açıklamalar girin.
- Kayıt düğmesine tıklayın.
- Kapat düğmesine tıklayın.
- Pipetler
4. Görev seçimi
- Tıkla Görev Yazılımın üst ekranındaki düğmesine basın.
- Görev Ayarı düğmesini seçin. Görev listesinden istediğiniz görevi seçin ve Sonraki Adım düğmesine tıklayın.
- Görevin gerçekleştirileceği tarih ve saati belirtin ve ardından Kayıt düğmesini tıklatın. Görevi gerçekleştirmek için bir tabak veya tabak seçin ve ardından Kayıt düğmesine tıklayın.
- Seçilen görevi yeniden onayladıktan sonra, Kayıt düğmesine tıklayın. Bir sonraki ekranda görevin kaydedildiğini onaylayın.
- Gerekirse, bir sonraki görevi aynı şekilde ayarlayın.
- Sonunda Başlat düğmesine tıklayın. Ardından, görev belirtilen tarih ve saatte otomatik olarak başlayacaktır.
NOT: Her görevi bitirdikten hemen sonra, UV ışıkları (davlumbazın iki yanında bulunur) otomatik olarak açılır ve 5-30 dakika sonra, yardımcı ayara göre, davlumbazı aseptik durumda tutmak için kapatılır. Durdurmak için, kullanıcılar Başlat düğmesine tıklayabilir. - Kullanıcılar zamanlanmış bir görevi önceden iptal etmek isterse, Durdur düğmesini tıklatın.
- İptal edilecek görevi seçtikten sonra, Görevi Düzenle düğmesine tıklayın.
- Görev İptali düğmesine tıklayın. Bir sonraki ekranda görevin silindiğini onaylayın.
5. Hücre resimlerini kontrol edin
- Her görev, görev çalışmasından önce ve sonra mikroskobik gözlemleri (fotoğraf çekmeyi) içerir. Her görevden önce veya sonra mikroskobik bir fotoğrafçılık görevi ekleyerek hücre kültürünün ilerlemesini fotoğrafik olarak gözlemleyin.
- Zaman içinde aynı konumu izlemek için sabit nokta gözlemi için çanağın veya kuyu plakasının birden fazla belirli konumunun önceden seçilmesi de dahil olmak üzere önceden ayarlanmış görev programlarını seçin.
6. Geçiş ve farklılaşma
- Bölüm 1-5'teki adımları izleyin ve otomatik hücre kültürü sistemini pasaj ve farklılaşma gerçekleştirecek şekilde ayarlayın. Pasaj, kardiyomiyosit farklılaşması, hepatosit farklılaşması, nöral öncü hücre farklılaşması ve keratinosit farklılaşması için cihaz ayarları sırasıyla Tablo 1, Tablo 2, Tablo 3, Tablo 4 ve Tablo 5'te gösterilmektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İnsan kaynaklı pluripotent kök hücrelerin bakımı
Üç hPSC hattı (RIKEN-2F, 253G1 ve KMUR001) kullandık. Günlük manuel olarak gerçekleştirilen deneylerle bakım protokolünü optimize ettik ve sistem tarafından gerçekleştirilen yedi ön deney aracılığıyla ayrıntılı programları daha da optimize ettik. Örneğin, insanlar tarafından kullanılan farklı pipetlerden ve sistemden çıkan tükürük akışının sıvı hızlarının neden olduğu kayma gerilmeleri oldukça farklıdır; Bu nedenle, enzimatik parçalamanın zaman uzunluğu...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Protokoldeki kritik bir adım, bir kullanıcı herhangi bir hata bulursa, herhangi bir zamanda iptal, durdur veya sıfırla düğmesine tıklaması ve ilk adımdan baştan başlamasıdır. Yazılım, çifte rezervasyon, sistem görevleri etkinken kapıların açılması ve ikmal eksikliği dahil olmak üzere insan hatalarından kaçınabilir. İstenilen somatik hücreye başarılı ve verimli bir şekilde farklılaşmak için bir diğer kritik nokta, pluripotent kök hücre hatlarının uygun seçimidir, çünkü her pluripotent kök hücrenin farklılaşma özelliklerin...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarın ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Panasonic Production Engineering Co., Ltd., Osaka, Japonya'daki Yeni İş Geliştirme Merkezi'nden alınan bir hibe ile desteklenmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 0.15 sığır serum albümin fraksiyonu V | Fuji Film Wako Chemical Inc., Miyazaki, Japonya | 9048-46-8 | |
| % 1 GlutaMAX | Thermo Fisher Scientific | 35050061 | |
| 10 cm plastik tabak ve nbsp; | Corning Inc., NY, Amerika Birleşik Devletleri | 430167 | |
| 253G1 | RKEN Biyokaynak Araştırma Merkezi | HPS0002 | |
| 2-merkaptoetanol | Thermo Fisher Scientific | 21985023 | |
| Aktinin fare | Abcam | ab9465 | |
| Aktivin A | Nacali Tesque | 18585-81 | |
| Adenin | Thermo Fisher Scientific | A14906.30 | |
| Albümin ve nbsp; tavşan | Dako | A0001 | |
| All-trans retinoik asit | Fuji Film Wako Chemical Inc. | 186-01114 | |
| Otomatik kültür sistemi | Panasonic | ||
| B-27 takviyesi | Thermo Fisher Scientific | 17504044 | |
| bFGF | Fuji Film Wako Chemical Inc. | 062-06661 | |
| BMP4 | Thermo Fisher Scientific | PHC9531 | |
| Sığır serum albümini | Merck | 810037 | |
| CHIR-99021 | MCE, NJ, Amerika Birleşik Devletleri #HY-10182 | 252917-06-9 | |
| Tanımlanmış Keratinosit-SFM | Thermo Fisher Scientific | 10744019 | İnsan keratinosit ortamı |
| Deksametazon | Merck | 266785 | |
| Dihexa | TRC, Ontario, Kanada | 13071-60-8 | rac-1,2-Diheksadesilgliserol |
| Tek kullanımlık hemositometre | CountessTM Hücre Sayma Odası Slaytları, Thermo Fisher Scientific | C10228 | |
| Dorsomorfin | Thermo Fisher Scientific | 1219168-18-9 | |
| Dulbecco' s modifiye Eagle medium/F12 | Fuji Film Wako Kimya A.Ş. | ||
| EGF | Fuji Film Wako Kimya A.Ş. & nbsp; | 053-07751 | |
| Temel 8 | Thermo Fisher Scientific | A1517001 | İnsan pluripotent kök hücre ortamı |
| Fetal sığır serumu | Biowest, FL, Amerika Birleşik Devletleri | S140T | |
| FGF-temel | Nacalai Tesque A.Ş. | 19155-07 | |
| Forskolin | Termo Balıkçı Bilimsel | J63292. | |
| Glutamin | Thermo Fisher Scientific | 25030081 | Glutamin takviyesi |
| Keçi IgG(H+L) AlexaFluo546 | Thermo Scientific | A11056 | |
| HNF-4A keçi | Santacruz | 6556 | |
| Hidrokortizon | Thermo Fisher Scientific | A16292.06 | |
| Hidrokortizon 21-hemisüksinat | Merck | H2882 | |
| iMatrix511 İpek | Nippi Inc., Tokyo, Japonya | 892 021 | Hücre kültürü matrisi |
| İnsülin-transferrin-selenyum | Thermo Fisher Scientific | 41400045 | |
| Keratin 1 / nbsp; fare | Santacruz | 376224 | |
| Keratin 10 ve tavşan | BioLegend | 19054 | |
| KMUR001 | Kansai Tıp Üniversitesi | Hasta kaynaklı iPSC'ler | |
| Nakavt serum replasmanı | Thermo Fisher Scientific | 10828010 | |
| L-askorbik asit 2-fosfat | A8960, Merck | A8960 | |
| Leibovitz' s L-15 orta | Fuji Film Wako Kimya A.Ş. | 128-06075 | |
| Matrigel | Corning A.Ş. | ||
| Fare IgG(H+L) AlexaFluo488 | Thermo Scientific | A21202 | |
| N-2 takviyesi | Thermo Fisher Scientific | 17502048 | |
| Nestin fare | Santacruz | 23927 | |
| Nörobazal ortam | Thermo Fisher Scientific | 21103049 | |
| Nörofilament ve tavşan | Chemicon | AB1987 | |
| Neutristem | Sartrius AG, Gö ttingen, Almanya | 05-100-1A | hücre kültürü ortamı |
| Ekim 3/4 fare | BD | 611202 | |
| PBS(-) | Nacalai Tesque Inc., Kyoto, Japonya | 14249-24 | |
| Tavşan IgG(H+L) AlexaFluo488 | Thermo Scientific | A21206 | |
| Tavşan IgG(H+L) AlexaFluo546 | Thermo Scientific | A10040 | |
| Rekombinant insan albümini | A0237, Merck, Darmstadt, Almanya | A9731 | |
| Rho kinaz inhibitörü, Y-27632 | Sellec Inc., Tokyo, Japonya | 129830-38-2 | |
| RIKEN 2F | RKEN Biyokaynak Araştırma Merkezi | HPS0014 | farklılaşmamış hiPSC'ler |
| RPMI 1640 | Thermo Fisher Scientific #11875 | 12633020 | |
| SB431542 | Thermo Fisher Scientific | 301836-41-9 | |
| Sodyum L-askorbat | Merck | A4034-100G | |
| SSEA-4 ve nbsp; fare | Millipore MAB4304 | ||
| StemFit AK02N ve nbsp; | Ajinomoto, Tokyo, Japonya | AK02 | hücre kültürü ortamı |
| TnT tavşan | Abcam | ab92546 | |
| TRA 1-81 fare | Millipore | MAB4381 | |
| Triiyodotironin | Thermo Fisher Scientific | H34068.06 | |
| TripLETM ekspres enzim | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Amerika Birleşik Devletleri | 12604013 | |
| Tripan mavisi çözeltisi | Nacalai Tesque, Kyoto, Japonya | 20577-34 | |
| Triptoz fosfat suyu | Merck | T8782-500G | |
| Wnt-C59 | Bio-techne, NB, Birleşik Krallık | 5148 | |
β  Tublin fare | Promega | G712A |
Kaynaklar
- Okita, K., et al. A more efficient method to generate integration-free human iPS cells. Nature Methods. 8 (5), 409-412 (2011).
- Tanaka, T., et al. In vitro pharmacologic testing using human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes. Biochemical and Biophysical Research Communications. 385 (4), 497-502 (2009).
- Egashira, T., et al. Disease characterization using LQTS-specific induced pluripotent stem cells. Cardiovascular Research. 95 (4), 419-429 (2012).
- Sasamata, M., et al. Establishment of a robust platform for induced pluripotent stem cell research using Maholo LabDroid. SLAS technology. 26 (5), 441-453 (2021).
- Tristan, C. A., et al. Robotic high-throughput biomanufacturing and functional differentiation of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 16 (12), 3076-3092 (2021).
- Konagaya, S., Ando, T., Yamauchi, T., Suemori, H., Iwata, H. Long-term maintenance of human induced pluripotent stem cells by automated cell culture system. Scientific Reports. 5, 16647(2015).
- McClymont, D. W., Freemont, P. S. With all due respect to Maholo, lab automation isn't anthropomorphic. Nature Biotechnology. 35 (4), 312-314 (2017).
- Gonzalez, F., Zalewski, J. Teaching joint-level robot programming with a new robotics software tool. Robotics. 6 (4), 41(2017).
- Bando, K., Yamashita, H., Tsumori, M., Minoura, H., Okumura, K., Hattori, F. Compact automated culture system for human induced pluripotent stem cell maintenance and differentiation. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 1074990(2022).
- Tohyama, S., et al. Glutamine oxidation is indispensable for survival of human pluripotent stem cells. Cell Metabolism. 23 (4), 663-674 (2016).
- Yamashita, H., Fukuda, K., Hattori, F. Hepatocyte-like cells derived from human pluripotent stem cells can be enriched by a combination of mitochondrial content and activated leukocyte cell adhesion molecule. JMA journal. 2 (2), 174-183 (2019).
- Shimojo, D., et al. Rapid, efficient and simple motor neuron differentiation from human pluripotent stem cells. Molecular Brain. 8 (1), 79(2015).
- Nishimoto, R., Kodama, C., Yamashita, H., Hattori, F. Human induced pluripotent stem cell-derived keratinocyte-like cells for research on Protease-Activated Receptor 2 in nonhistaminergic cascades of atopic dermatitis. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 384 (2), 248-253 (2023).
- International Stem Cell Initiative. Screening ethnically diverse human embryonic stem cells identifies a chromosome 20 minimal amplicon conferring growth advantage. Nature Biotechnology. 29 (12), 1132-1144 (2011).
- Keller, A., et al. Genetic and epigenetic factors which modulate differentiation propensity in human pluripotent stem cells. Human Reproduction Update. 24 (2), 162-175 (2018).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
