Burada, bir orman odun kurdundan entomopatojenik mantarlar elde etmek için bir protokol ve bir Coleopteran model böcek kullanarak entomopatojenik aktivitelerini değerlendirmek için ikame edici bir yol sunuyoruz. Bu yöntem, doğal ormanlardaki odun delici böcek zararlılarından entomopatojenik mantar kaynaklarını keşfetmek için etkili ve kullanışlıdır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Orman Ağaç Kurdundan Entomopatojenik Mantarların İzolasyonu, Davranışsal Tanımlama ve Patojenite Değerlendirmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Orman odun delicileri (FWB) dünya çapında ciddi ağaç hasarına ve ekonomik kayıplara neden olur. FWB ortaya çıkma döneminde entomopatojenik mantarların (EPF) salınması, kimyasal kontrole kabul edilebilir bir alternatif olarak kabul edilir. Bununla birlikte, EPF kaynakları, tarımsal böcek zararlılarının aksine, FWB'ler için önemli ölçüde daha az araştırılmıştır. Bu makale, örnek olarak yabani Monochamus alternatus popülasyonlarını kullanarak FWB'lerden EPF kaynaklarını keşfetmek için bir protokol sunmaktadır. Bu protokolde M ile yemlenen tuzakların atanması. Farklı popülasyonlara alternatif cezbediciler, böceğin ortaya çıkma dönemlerinde doğal enfeksiyon semptomları olan yeterli örneklerin toplanmasını garanti etti. Bütünleşmelerin ince bir şekilde incelenmesi ve seçici bir ortama yerleştirilmesinin ardından, mantar türleri böcek gövdelerinin her bir parçasından izole edildi ve hem moleküler hem de morfolojik özelliklere dayalı olarak tanımlandı.
Birkaç mantar türü, sağlıklı M. alternatus'un spor süspansiyonları ile yeniden enfeksiyonu yoluyla parazitik EPF'ler olarak onaylanmıştır. M. alternatus üzerindeki davranışsal fenotipleri, taramalı elektron mikroskobu kullanılarak gözlemlendi ve ayrıca Coleopteran model böcek Tribolium castaneum üzerindekilerle karşılaştırıldı. Her iki böcek türü üzerinde tutarlı parazitizm fenotipleri sunan EPF'ler için, T üzerindeki aktivitelerinin değerlendirilmesi. castaneum , M. alternatus ile ilgili gelecekteki çalışmalar için ölümcüllük hakkında değerli bilgiler sağlamıştır. Bu protokol, Çin'deki M. alternatus popülasyonları hakkında yeni bildirilen EPF'nin keşfine yardımcı oldu ve bu, diğer FWB'lerden daha fazla EPF kaynağını keşfetmek için etkili bir yaklaşım olarak uygulanabilir.
Giriş
Böcek zararlılarının neden olduğu tahribat, hem orman hem de tarım ekosistemlerinde büyük ekolojik ve ekonomik kayıplara yol açmıştır. Çoğu tarım zararlısı, konukçu bitkilere zarar verirken kendilerini doğal düşmanlara veya yapay kontrol ajanlarına maruz bırakır. Bunun yerine, orman odun delicileri (FWB), konakçı ağaç gövdeleri 1 içinde neredeyse tüm gelişim döngülerini tamamlarve bu da vahşi alanda FWB'den verimli biyokontrol organizmalarını keşfetmek için büyük zorluklar doğurur. Daha da kötüsü, FWB'lerin çok sayıda fitopatojen2 taşıması veya potansiyel vektörleri
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Mantarların M. alternatus'tan izolasyonu (Şekil 1)
- Böcek örneğini toplayın
- Çam testere böcekleri M'yi toplayın. doğal olarak enfekte olmuş çam ormanlarında böcek popülasyonlarının tahmin edilen ortaya çıkma dönemlerinden önce cezbedici maddelerle yemlenmiş ticari tuzaklar kullanan alternatus (Malzeme Tablosuna bakınız).
NOT: Bu çalışmada, böcekler güney Çin'in beş coğrafi bölgesinden (Huzhou / Zhejiang, Liangshan / Sichuan, Xiamen / Fujian, Shaoguan / Guangdong, Yulin / Guangxi) toplanmıştır. Tuzak ayarı ....
- Çam testere böcekleri M'yi toplayın. doğal olarak enfekte olmuş çam ormanlarında böcek popülasyonlarının tahmin edilen ortaya çıkma dönemlerinden önce cezbedici maddelerle yemlenmiş ticari tuzaklar kullanan alternatus (Malzeme Tablosuna bakınız).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
M'den mantar izolatlarının izolasyonu ve tanımlanması. alternatif
Cezbedici tuzakların yardımıyla, çok sayıda (toplamda yaklaşık 500 böcek) M. Alternatus beş coğrafi bölgeden toplanmıştır. Entomopatojenik mantarların neden olduğu tipik enfeksiyon semptomları olan böcek kadavraları toplandı; Daha sonra, her böceğin vücut bütünlükleri, protokol adımı 1.3'te açıklandığı gibi birkaç pozisyona diseke edildi. Sonuç olarak, farklı vücut pozisyonlarından 600'den fazla mant.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
FWB'nin farklı coğrafi popülasyonları, EPF türlerinin yerel iklim faktörlerine uzun vadeli çevresel adaptasyonu ve konakçı böceğin spesifik genotipik popülasyonu nedeniyle doğal entomopatojenik mantarlarla çeşitli etkileşimler geliştirebilir44,45. Örnekleme alanlarının birden fazla böcek oluşum bölgesine genişletilmesi, tarımsal böcek zararlıları46 ile ilgili önceki çalışmalarda açıklandığı gibi, doğal kon.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
Teşekkürler
Bu araştırma, Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (2021YFC2600100) ve Zhejiang Eyaleti Doğa Bilimleri Vakfı (LY21C040001) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1.5 mL, 2 mL santrifüj tüpleri | Biosharp | BS-15-M | |
| 10 & mikro; L pipet uçları | Sangon Biotech | F601216 | |
| 10 & L, 20 ve mikro; L, 100 ve mikro; L, 200 ve mikro; L, 1.000 ve mikro; L pipetler | Rainin | ||
| 1.000 & mikro; L pipet uçları | Sangon Biotech | F630102 | |
| 2 mL kriyojenik şişeler | Corning | 430659 | |
| 20x PBS tamponu | Sangon Biotech | B548117-0500 | |
| 200 & mikro; L pipet uçları | Sangon Biotech | F601227 | |
| 2.000 bp yapıcı | TaKaRar | SD0531 | |
| 50 mL tüpler | Nest | 602052 | |
| %50 glutaraldehit çözeltisi | Sangon Biotech | G916054 | |
| 50x TAE tamponu | Sangon Biotech | B548101 | |
| 6x yükleme tamponu | TaKaRar | SD0503 | |
| Agarose | Sangon Biotech | A610013 | |
| Susuz etanol | Jkchemical | LB10V37 | |
| Biyokimya Yetiştirme Kabini | Shanghaiyiheng | LRH-250F | |
| Kloroform | Juhua | 61553 | |
| Ticari böcek tuzakları | FEIMENGDI | BF-8 | www.yinyouji.com |
| Jel görüntüleyici | Bio-Rad | GelDoc XR + | |
| Gliserol | Sangon Biotech | A600232 | |
| Yüksek hızlı soğutmalı santrifüj | Sigma | D-37520 | |
| Yüksek Basınçlı Buhar Sterilizasyon Kabı | Mettler Toledo | JA5003 | |
| İzopropil alkol | Genel reaktif | G75885B | |
| Nükleik asit boyası | Sangon Biotech | A616696 | |
| Optik Mikroskop, OM | Leica | DM2000 | |
| Parafilm Parafilm | PM996 | ||
| PCR metre | İyileşme Kuvveti | Trident960 | |
| Penisilin G | Marklin | GB15743 | |
| Patates dekstroz agar, PDA | Oxoid | CM0139 | |
| Patates dekstroz suyu, PDB | Solarbio | P9240 | |
| Primer | Sangon Biotech | / | |
| Primers Taq | TaKaRar | RR902A | |
| Hızlı Mantarlar Genomik DNA İzolasyon Kiti | Sangon Biotech | B518229 | |
| Taramalı Elektron Mikroskobu, SEM | Hitachi | S-3400N | |
| Streptomisin | Marklin | S6153 | |
| Tetrasiklin | Marklin | T829835 | |
| Tween-80 | Marklin | T6336 | |
| Vakumlu dondurarak kurutucu | Yamato | DC801 | |
| Vorteks Çalkalayıcı | HLD | WH-861 | |
| ve beta;-Merkaptoetanol | Marklin | M6230 |
Kaynaklar
- Hajek, A. E., Bauer, L. S. Microbial control of wood-boring insects attacking forest and shade trees. Field Manual of Techniques in Invertebrate Pathology. 10, 505-525 (2007).
- Linnakoski, R., Forbes, K. M. Pathogens-t....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
