Yakı deney platformu, sıçanları kısıtlama olmaksızın sabitleyebilir ve sıçanlar, uyanık durumda, sıçanların refahını sağlayarak, operatörlerin güvenliğini koruyarak, terapötik etkinliği sağlayarak ve deneyin verimliliğini artırarak çok akupunktur noktalı yakı geçirebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kronik Böbrek Yetmezliği Olan Sıçanların Tedavisinde Bitkisel-Kek ile Ayrılmış Yakı Kullanımı
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Klinik uygulamada yakı sürecinde, moxa külü düşmesi, cildin haşlanması ve zayıf iyileştirici etki gibi sorunlardan kaçınmak için deneklerin istikrarlı bir ruh hali ve rahat bir duruş içinde olmaları gerekir. Bu tür problemler, sıçan yakı deneyinde de mevcuttur. Klinik uygulamayı simüle etmek için, hayvan deneylerinde deneysel bir aletin, yani deneysel sıçanların anestezi altında sessiz ve rahat bir şekilde yakı tedavisi almasını sağlayabilen sabit sıçanlar ve yakı tedavisi senkronizasyonuna sahip bir yakı cihazının tanıtılması gerekir.
Araştırma grubumuz bir sıçan yakısı deney platformu tasarladı. Cihaz, destekleyici bir taban plakasına, çoklu sabit bileşenlere ve bölümlere ayrılmış bileşenlere sahip ahşap bir tahta ile çerçevelendi. Cihaz, sıçanlarda bağlanmadan, anestezi ve haşlanmadan kaçınmadan ve aynı anda sırtta birden fazla akupunktur noktasını açığa çıkarmadan yakı çalışma modunu elde edebilir. Bu işlem, sıçanların ve operatörlerin fiziksel ve zihinsel yaralanmasını önleyebilir, bu da araştırma verimliliğini artırır ve yakı hayvan deneylerinin geliştirilmesini ve araştırılmasını daha da teşvik eder.
Cihaz basit bir yapıya sahiptir, kullanımı ve popüler hale getirilmesi kolaydır, kapsamlı ve yenilikçi bir şekilde tasarlanmıştır, yeniden kullanılabilir ve esas olarak yakıya dayalı sıçan deneyleri için uygundur. Bu makale temel olarak, sıçan yakısı için deneysel platform cihazının yapısını, cihazı kullanan deneysel sıçanlarda bitkisel-kek-ayrılmış-yakıcılığın temel prosedürünü tanıtmakta ve kronik böbrek yetmezliği (CRF) için bir sıçan modelinin oluşturulmasını ve temsili deneysel sonuçları açıklamaktadır.
Giriş
Ateşin uygulanmasıyla yakı ortaya çıktı. Eski doktorlar yanlışlıkla ateş yakan vücudun bazı kısımlarının rahatsızlık belirtilerini hafifletebileceğini buldular. Uzun süreli uygulamalardan sonra, "Artemisiae Argyi Folium" yavaş yavaş ana yakı malzemesi1 olarak seçildi. Yakı, geleneksel Çin tıbbının önemli bileşenlerinden biridir ve geleneksel Çin tıbbı kaynatma ve akupunktur noktası akupunkturu ile yan yana getirildiğinde, bu üç ana geleneksel Çin tıbbı tedavisi birçok hastalıkta yaygın olarak kullanılmaktadır.
Çinli doktorlar, Huangdi Neijing (Sarı İmparator'un İç Klasiği) dönemi kadar erken bir dönemde hastalıkları tedavi etmek için sıklıkla yakı kullandılar. Artemisiae Argyi Folium, kanamayı durdurmak, soğuk algınlığını gidermek ve ağrıyı hafifletmek için meridyenleri ısıtma işlevine sahip bir tür Çin bitkisel tıbbıdır. Geleneksel Çin tıbbının dış tedavisinde yaygın olarak kullanılır ve geleneksel Çin tıbbı kaynatma tedavisinde de kullanılabilir. Yakı, yakı ateşinin hafif ısısını ve hastalıkların tedavi etmek için ilaçların etkisini yakmak ve kullanmak için vücut yüzeyindeki akupunktur noktalarına moxa veya diğer ilaçların yerleştirildiği bir türdış terapidir 2 3.
Yaygın tedavi yöntemlerinden biri olan yakı, klinik uygulamada yaygın olarak kullanılmaktadır. Yakı tedavisindeki sürekli genişleme ile birlikte, giderek artan sayıda çalışma, yakı mekanizmasını araştırmış ve birçok hayvan deneyi gerçekleştirmiştir 4,5.
Yakı yöntemi, doğrudan yakı ve dolaylı yakı olarak sınıflandırılabilir. Vücudun cildine yakı yerleştirme yöntemine doğrudan yakı denir. Dolaylı yakı, moxa konisinin yüzeyini ve akupunktur noktalarını ilaçlar veya diğer malzemelerle ayırır. Yakı, irritabl bağırsak sendromu6, kronik yorgunluk sendromu7 ve diz osteoartriti8 gibi çeşitli hastalıkları tedavi edebilir.
Bu makale esas olarak bitkisel-kek-ayrılmış-yakı mekanizmasını tartışmaktadır. Bitkisel-kek-ayrılmış-yakı, yakı uygulamak için tıbbi kek üzerine bir moxa konisinin yerleştirildiği dolaylı yakı yöntemine aittir. Mevcut çalışmalar, moxa konisinin yanması, moxa yaprağı katranının kimyasal bileşimi ve akupunktur noktası stimülasyonu tarafından üretilen kızılötesi ve ısınma etkilerinin, ilaçların akupunktur noktalarına penetrasyonunu artırarak hastalığın önlenmesi ve tedavisine9 ulaşabileceğini göstermiştir. Bu nedenle, bitkisel-kek ile ayrılmış yakı esas olarak yakı, ilaçlar ve akupunktur noktaları10 yoluyla "kapsamlı bir etki" üretir.
Önceki çalışmalar, yakının CRF 11,12,13,14,15'i tedavi etmek için etkili bir yöntem olduğunu göstermektedir, ancak altta yatan mekanizma hala tanımlanmamıştır. CRF ile ilgili klinik ve hayvan araştırmaları üzerinde çalışıyoruz. Şu anda, endoplazmik retikulum stresinin sinyal yolağına dayalı bitkisel-kek ile ayrılmış yakı aracılı protein kinaz RNA benzeri endoplazmik retikulum kinaz (PERK) bazlı CRF sıçanları üzerinde bir yakı deneysel çalışması yürütüyoruz. Bu hayvan deneyi aracılığıyla, kronik böbrek hastalığının tedavisinde yakının potansiyel mekanizmasını ön olarak açıklamayı amaçlıyoruz. Bu deneyde, sıçanların bitkisel-kek ile ayrılmış yakılarının tedavisi önemli bir işlemdir.
Önceki deney16'da, fareleri bağlamak ve sabitlemek için yetiştirme kafesinin kapağı kullanıldı. Operatörü korumak için, farelerin bağlanmadan önce uyuşturulması gerekir. Bununla birlikte, Sprague-Dawley (SD) sıçanlarından korkmak ve ürkmek kolaydır. Bağlama işlemi sıçanlarda kolayca huzursuzluğa neden olabilir. Sıçanların kötü postür fiksasyonu, akupunktur noktası konumlandırmasının sapması, deney süresinin artması ve operatör yaralanması gibi sorunlar sıklıkla meydana geldi.
Ek olarak, bağlanma çok sıkıysa, sıçanlarda kolayca solunum güçlüğüne neden olabilir, bu da hayvan refahına elverişli değildir. Bağlanma çok gevşekse, sıçanlar mücadele etmeye ve vücutlarını hareket ettirmeye eğilimlidir, bu da yakı konilerinin düşmesine ve derilerini yakmasına neden olur, bu da deney sonuçlarını etkiler. Literatüre dayanarak, hayvan deneyleri hala16,17,18 bağlamayı içerir ve çoğu deney cihazı yalnızca sabitlenebilir, bu da yakı19 gibi diğer tekniklerin uygulanmasını engeller. Bu nedenle, hayvan refahı ve deneysel spesifikasyonlar ve verimliliği sağlarken, deney cihazında fiksasyon ve yakı entegrasyonunun sağlanması, araştırmacılar için odak alanlarından biri haline gelmiştir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Plan, Yunnan Çin Tıbbı Üniversitesi'nin Hayvan Bakımı Yönergelerini takip ediyor ve Yunnan Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylandı. Deney hayvanı refahı ve etik inceleme numarası R-062021G098'dir.
1. Yakı deneysel platform cihazı (Şekil 1)
NOT: Sıçanların arka ve ön bacakları arasındaki mesafeye ve davranışsal ve fizyolojik özelliklerine dayalı olarak sıçan yakısı deneysel platform cihazını tasarladık ve inşa ettik.
- Yakı cihazının boyutu
- Cihazı, dövülmez tahta malzeme ve ahşap bir tahta kullanarak imal edin; toplam boyut 52 cm U x 23,5 cm G x 64 cm Y ve cihazın alt alanı 1222cm2'dir.
NOT: Yakı işlemi bu yükseklikteki platform üzerinde gerçekleştirilir ve fareler sakin tutulabilir.
- Cihazı, dövülmez tahta malzeme ve ahşap bir tahta kullanarak imal edin; toplam boyut 52 cm U x 23,5 cm G x 64 cm Y ve cihazın alt alanı 1222cm2'dir.
- Yakı cihazının ana çerçevesi
- Tüm cihazın tabanını dövülmez tahta malzeme ile yapın: Taban plakası beyaz bir yüzeye sahip 52 cm U x 23,5 cm W'dir. Tüm cihazı stabilize etmek için alt kısmın cihazın ağırlığının büyük bir bölümünü oluşturduğundan emin olun.
- Cihazın yükseltilmiş platformunu 60 cm yüksekliğinde masif ahşapla yapın.
NOT: Bu, tüm cihazı stabilize eden ve farelerin ayakta durma pozisyonunda yerleştirilmesini destekleyen tüm cihazın ana çerçevesidir. - Yükseltilmiş platformun üzerine, 10 cm U x 6 cm G x 10 cm Y boyutunda beş yerleştirme yuvası yerleştirin. Yerleştirme yuvalarını ayırmak için aralık tahtaları (10 cm U x 1.3 cm G x 10 cm Y) kullanın, bu da farenin ayakta durma pozisyonundaki ön ve arka uzuvları arasındaki mesafeye karşılık gelir.
- Yakı cihazının bileşenleri
- Yerleştirme yuvalarının üzerine iki paslanmaz çelik şerit sabitleyin. Her sabit şerit, 15 delikli 40 cm U x 1,4 cm W (her iki taraf aynı genişliğe sahiptir) dik açılı eşit kenarlı bir çelik çubuktur. Sabit şeritteki üç delik, erik sapı vidasını ve hareketli hortumu sabitlemek için kullanılan her bir yuvaya karşılık gelir. Bitişik delikler arasındaki mesafe 7 cm'dir.
- 304 paslanmaz çelikten yapılmış ısı yalıtım ağının her iki ucuna ayarlanabilir erik çiçeği kolu vidasını yerleştirin ve sabit ısı yalıtım ağına ve sabit şeride bağlayın.
- Her yerleştirme yuvasının üst ucunu, galvanizli bir levha çerçeve ile çevrili kaldırılabilir bir ısı yalıtım ağı ile bağlayın. Bu çerçeveyi her iki ucundaki erik çiçeği sap vidasına bağlayın. Külün düşmesini ve fareleri haşlamasını önlemek ve yakıyı kolaylaştırmak için fareleri sabitlemek için ısı yalıtım ağının ortasına 304 paslanmaz çelik dairesel örgü malzemesi yerleştirin.
- Paslanmaz çelik hareketli hortumun (34 cm uzunluğunda) alt ucunu paslanmaz çelik sabit bir şeritle ve üst ucunu boru kelepçesi bağlantı plakasıyla sabitleyin.
NOT: Hareketli hortum, süspansiyon yakı işlemi sırasında moxa çubuğunun konumunu ayarlamak için uygundur. - Paslanmaz çelik hareketli hortumu ve moxa klipsi bağlamak için alüminyum alaşımdan yapılmış boru kelepçesini kullanın.
- Paslanmaz çelik moxa klipsini boru kelepçesi bağlantı plakasına bağlayın ve yakı için 8-10 moxa şeridini aynı anda sabitleyin.
NOT: Hareketli hortum, tüp kelepçesi bağlantı plakası ve moxa klipsi, sıçanlarda süspansiyon yakı işlemi için kullanılabilir.
2. Kronik böbrek yetmezliği için bir sıçan modeli oluşturun
- 24 spesifik patojen içermeyen (SPF) SD erkek sıçan (3-4 haftalık, 180-200 g ağırlığında) 1 hafta boyunca iklimlendirin. Besleme sıcaklığını 18-24 °C'de tutun; % 40-70 bağıl nem; ve 12 saat aydınlık ve 12 saat karanlık döngüsü. Her kafeste altı hayvanı barındırın ve suya ve ortak yemlere ücretsiz erişim sağlayın.
- CRF'nin sıçan modelini oluşturun. Rastgele sayı tablosuna göre ve bu protokolü izleyerek, kontrol grubu olarak altı sıçan ve model grubu olarak kalan 18 sıçan seçin. Kontrol grubuna (n = 6) damıtılmış su (10 mL ∙kg-1 gün-1) ve normal yem ve model grubuna (n = 18) adenin süspansiyonu (150 mg kg-1 gün-1) ve yüksek proteinli yem ile 21 gün boyunca muamele edin.
- Vücut ağırlığını, zihinsel durumu ve diyeti günlük olarak gözlemleyin ve kaydedin. 21 günün bitiminden sonra, orbital kan örneklemesinden önce tüm hayvanların 12 saat aç kaldığından emin olun.
- Yörünge kan örneklerini toplayın.
- Sıçanları izofluran ile kısa bir süre uyuşturun. Baskın olmayan el ile sıçanın sırtını tutun, sıçanın başını ve yüzünü başparmak ve işaret parmağı arasında simetrik olarak tutun, sıçanın kantusunun bir tarafını tamamen açığa çıkarın ve bu pozisyonu koruyun.
- Baskın el ile, 3 cm uzunluğundaki erime noktası kılcal damarlarını başparmak ve işaret parmağı arasında tutun ve kılcal damarı yavaşça bükün, kan tüpten yavaşça akana kadar sıçanın iç kantus venöz pleksusuna 45 ° C'de girin.
- 0.5 mL kan alma antikoagülan tüplerinde 150-200 μL kan örneği toplayın, kılcal damarları yavaşça dışarı çekin ve yörüngeye pamukla bastırın.
- Antikoagülan tüpü hızlı ve iyice çalkalayın. Otomatik bir biyokimyasal analizör kullanarak plazma serum kreatinin (Scr) ve kan üre azotunu (BUN) ölçün.
NOT: Scr ve BUN'daki artış, CRF modelinin başarılı bir şekilde kurulduğunu göstermektedir. - Sıçanları dört gruba ayırın: A: altı kontrol sıçanı, tedavi yok; 18 model sıçan grup B'ye ayrıldı: (model grubu: ilaç veya yakı yok), C: (losartan potasyum grubu: 2.33 mg-1∙kg-1∙gün-1 gavaj iğnesi 12 G ile uygulandı) ve D: (bitkisel-kek-ayrılmış-yakı grubu: bilateral Shenshu [B23] ve bilateral Pishu'ya [B20] uygulanan bitkisel-kek-ayrılmış-yakı).
3. Tedavi aşaması
NOT: Grup A ve B'ye herhangi bir tedavi verilmezken, grup C ve D 24 gün boyunca günde bir kez tedavi edilecek ve 12 günlük tedaviden sonra iki gün izin verilecektir.
- Tedavi öncesi hazırlıklar
- 300 gr kurutulmuş Radix astragali, 300 gr kurutulmuş Radix Codonopsis, 200 gr kurutulmuş Radix Rehmanniae Praeparata, 100 gr kavrulmuş Shorthorned Epimedium Herb ve 100 g Cornus officinalis hazırlayın. Bu tozları karıştırın.
- 500 g Artemisiae Argyi Folium'u geleneksel Çin tıbbı kırıcısına (34.000 devir/dk hız) 5 dakika boyunca koyun, öğütülmüş tozu bir tabağa aktarın ve ardından 600 gözenekli bir elek ile eleyin. İki eleme turundan sonra, kaba moxa'yı ortadan kaldırın ve ince moxa'yı kullanım için bir torbaya aktarın (Şekil 2).
- 0,5 cm çapında ve 0,5 cm yüksekliğinde küçük bir moxa konisi yapmak için ince moxa'yı kalıba doldurarak moxa konisini hazırlayın. Alternatif olarak, moxa konileri oluşturmak için moxa'yı her iki elin başparmakları ve işaret parmakları arasında malaksat edin (Şekil 3A).
- 5 mL'lik bir şırıngayı 0,5 cm kalınlığında dört dairesel plastik halka halinde keserek ve dört halkayı aynı yatay düzleme yapıştırarak (kenar uzunluğu 26 mm olan kare bir düzlemin köşelerinde, Şekil 3D) bitkisel kek kalıbını hazırlayın.
- Toz ve suyu 1:1 oranında karıştırarak ve karışımı bitkisel kek kalıbına doldurarak ilaç kekleri yapın (Şekil 3E). İlaç kekini kalıba bırakın ve kuru bir yerde saklayın.
- Akupunktur noktalarının işaretlenmesi
- Akupunktur noktalarını aşağıdaki gibi bulun: Shenshu (B23), ikinci bel omurun her iki tarafı, her iki tarafta bir akupunktur noktası; Pishu (B20), her iki tarafta 11. torakal omurun interkostal, her iki tarafta bir akupunktur noktası (Şekil 4).
NOT: Akupunktur noktalarının yeri için Deney Hayvanları için Akupunktur El Kitabınabakın 20. - Sıçanın kafasını nazikçe örtmek için baskın olmayan elinize kalın bir lastik eldiven giyin, baskın el ile sıçanın sırtındaki akupunktur noktalarını bulun ve ardından akupunktur noktalarını bir renk işaretleyici ile işaretleyin.
- Akupunktur noktalarını aşağıdaki gibi bulun: Shenshu (B23), ikinci bel omurun her iki tarafı, her iki tarafta bir akupunktur noktası; Pishu (B20), her iki tarafta 11. torakal omurun interkostal, her iki tarafta bir akupunktur noktası (Şekil 4).
- Farelerin yerleştirilmesi
- Kalın lastik eldiven giyin. Sıçanın sırtındaki ve boynundaki cildi hafifçe sıkıştırmak için baskın elin başparmağını ve diğer dört parmağını kullanın. Farenin kuyruğunu nazikçe sıkıştırmak için baskın olmayan elin başparmağını ve işaret parmağını kullanın.
- Fareyi kaldırın, farenin başını özel yakı platformunun yerleştirme yuvasına hizalayın ve fareyi yavaşça ileri doğru hareket ettirin. Sıçanın ön pençesinin yerleştirme yuvasının kenarına yakın olduğundan ve sıçanın yuvaya tırmandığından emin olun.
NOT: Başlamadan önce tüm yakı platformunu dezenfekte edin. Fareyi yakalamadan önce, farenin arkasına hafifçe dokunun veya sakinleştirmek için onunla konuşun. Yalıtım ağının yüksekliğini düşük bir konumdan (kullanılmadığında) en yükseğe ayarlayın, bu da farelerin girmesi için uygundur.
- Sıçan fiksasyonu
- Her iki elinizin baş ve işaret parmaklarını ısı yalıtım ağının her iki ucundaki erik çiçeği vidasının vidasına yerleştirin. Isı yalıtım ağını farenin arkasına yakın, ancak sıkıştırmaya neden olmayacak şekilde uygun konuma indirmek için erik çiçeği vidasını sökün ve ardından vidaları sıkın.
- Moxa külahı ve ilaçlı kekin yerleştirilmesi.
- İlaç kekini içeren hazırlanan kalıbı, sıçanların üzerindeki akupunktur noktalarının işaretlerine göre hem Pishu (B20) hem de Shenshu'nun (B23) akupunktur noktalarına karşılık gelen ısı yalıtım filesi üzerine yerleştirin. Her biri bir ilaç pastasına karşılık gelen dört akupunktur noktası vardır.
- Moxa külahını ilaçlı kekin üzerine düzgün ve istikrarlı bir şekilde yerleştirin.
- Yakı
- Moxa konisini çakmakla yakın ve moxa konisi yanana ve kalan ısı doğal olarak dağılana kadar (ıslak ilaçlı kek kuruyana) yakı yapmaya başlayın.
- Yanmış moxa külahını aynı akupunktur noktasında yeni bir moxa külahı ve ilaçlı kek ile değiştirin ve moxa konisi yanana ve ilaçlı kek kuruyana kadar yakı işlemine devam edin. Bunu her akupunktur noktasında toplam 5 kez tekrarlayın.
NOT: Kaldırılabilir ısı yalıtım ağını yeni bir moxa konisi ve ilaçlı kek ile değiştirmeden önce temizleyin ve dezenfekte edin. - Her akupunktur noktasında beş moxa konisi yaktıktan sonra moxa konilerini ve ilaçlı kekleri su içeren bir atık tankında söndürün.
NOT: Her akupunktur noktası beş koni yakı alır; Her Moxa konisi yandıktan sonra değiştirilebilir.
- Fareyi kafese geri döndürmek
- Boş yetiştirme kafesini farenin önüne, yakı platformunun yerleştirme yuvasının alt ucuna yakın bir yere koyun ve hareketsiz kalın. Farenin kalçasını hafifçe vurun, böylece fare yerleştirme yuvasından besleme kafesine hareket edebilir. Sıçan girdikten sonra kafesi yere koyun. Farenin arkasındaki kürkü kavramak için baskın elinizi kullanın, fareyi sıkıca tutun ve daha fazla gözlem için yere koyun.
- Sıçanların nefes darlığı olup olmadığını, ruh halinin stabil olup olmadığını ve cilt yüzeyinin haşlanıp haşlanmadığını gözlemleyin. Herhangi bir anormallik yoksa, kafese geri koyun. Haşlanmışsa, haşlama merhemini hemen cilt yüzeyine uygulayın ve tek bir kafese yerleştirin.
4. Örnekleme aşaması
- 24 günlük tedaviden sonra, fareleri örneklemeden önce 12 saat oruç tutmaya hazırlayın.
- İzofluranı gaz anestezi makinesine dökün ve sıçanları% 2-3 izofluran ile uyuşturun. 2-3 dakika sonra, reflekslerin olmadığından emin olun (herhangi bir refleksi olmadığını kontrol etmek için kuyruğu cerrahi cımbızla sıkıştırın) ve kalp atışının devam ettiğinden ve% 1-1.5 izofluran ile idame anestezisine geçin.
- İğneyi yarı abdominal aort içine sokarak abdominal aorttan 5 mL kan toplayın. Kanın 2 saat bekletilmesine izin verin, 2490 × g'da 4 ° C'de 10 dakika santrifüjleyin ve daha fazla analiz için serum süpernatantını 1.5 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.
- Sıçanları uzun süre derin anestezi altında uygulayın ve idame anestezisi altında abdominal aorttan kan alın. Ayrıca, sıçanları servikal çıkık ile ötenazi yapın.
- Bilateral renal fasyayı ve yağı cerrahi makas ve cımbızla sıyırarak ve %0.9 normal salin ile durulayarak her iki böbrekten doku toplayın. Sol ve sağ böbrekleri tartın ve ağırlığı ve morfolojiyi kaydedin.
- Sol böbreği altı parçaya bölüp ıslatma, fiksasyon ve koruma için% 4 paraformaldehit içeren 50 mL'lik bir santrifüj tüpüne koyarak böbrek dokusunu koruyun. Sağ böbreği uzunlamasına yönde bir bıçak ve enine yönde iki bıçak kullanarak altı parçaya kesin. Bu parçaları altı adet 2 mL'lik Kriyotüpe yerleştirin ve hemen sıvı nitrojenin içine koyun; saklamak için -80 °C'lik bir dondurucuya aktarın.
5. Algılama aşaması
- Protein ekstraksiyonu, jel elektroforezi, membran transferi, blokaj, primer antikor inkübasyonu, sekonder antikor, kemilüminesans, gelişim, fiksasyon ve film taraması için uygun boyutta doğru böbrek dokusunu kullanın.
- Bandın gri değerini analiz etmek ve her bir proteinin içeriğini hesaplamak için bir jel görüntü veri analiz sistemi (örneğin, Image-Pro Plus 6.0) kullanın.
- Sol böbrek dokularını dehidrasyona, temizlemeye, parafine gömme, kesit almaya (4 μm kalınlıkta), hematoksilen-eozin ile boyamaya ve Masson'un trikrom boyasına maruz bırakın ve200x büyütmede ışık mikroskobu altında böbrek dokusundaki patolojik değişiklikleri 21 gözlemleyin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Böbrek morfolojisi
Şekil 5'ten de görüleceği gibi, diğer gruplarla karşılaştırıldığında, D grubundaki (bitkisel-kek-ayrılmış-yakı grubu) böbreklerin büyüklüğü, rengi ve dokusu normal grubakine daha yakındı. Modelin böbrek morfolojisi ve losartan potasyum grupları farklı derecelerde beyaz fibrozis gösterdi.
Böbrek ağırlığı
Şekil 6 , grup A'nın sol böbrek ağırlığının grup B'den ön...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Klinik olarak, akupunktur ve yakı tedavisi, hastaların sakin ve rahat olmalarını, aşırı öfke ve açlıktan kaçınmalarını ve 'barışı' vurgulamalarını gerektirir. Bununla birlikte, akupunktur ve yakı deneylerinin mevcut uygulaması, yalnızca deneyin orijinal amacına aykırı olmakla kalmayıp aynı zamanda klinik uygulamaya da uymayan hayvanları bağlama öncülüne dayanmaktadır. Hayvanları bağlamak, korkutmak ve öfkelendirmek, deney hayvanlarında adrenalin ve diğer hormonları hızla artıracak ve deney sonuçlarını etkileyecektir
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler. Sıçan yakısı deneysel platform cihazının patent numarası ZL202320880924.X'tir.
Teşekkürler
Doçent Huang ve Bayan Cui'ye bu makaleye gösterdikleri sıkı rehberlik ve destek için teşekkür ederiz. Çalışma aşağıdakiler tarafından desteklenmiştir: 1. Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC), 82160938, "TGF-β1'in aracılık ettiği ERK ve Smad sinyal yollarının etkileşimli etkisinden kek ile ayrılmış yakı ile renal interstisyel fibroz üzerine mekanizma araştırmasının araştırılması"; 2. Yunnan Eyaleti Sağlık Komisyonu "2020 Üst Düzey TCM Rezerv Yetenekleri" Kuluçka Projesi (Yunwei TCM Geliştirme [2021] No.1); 3. Yunnan İl Bilim ve Teknoloji Departmanı-Çin Tıbbının Uygulamalı Temel Araştırma Ortak Özel Fonları (No.2019FF002-022, No.202101AZ70001-286, No.202301AZ070001-030); 4. Yunnan Eyaleti İnovasyon Ekibi: Akupunktur ve Tuina ile serebromatiyi Önleme ve Tedavi Etme (2023).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0,5 mL heparin lityum biyokimyasal tüp | Shijiazhuang Kangweishi Tıbbi Cihazlar A.Ş., LTD | 220518 | Kan alma |
| % 0.9 normal salin | Kunming Nanjiang Pharmaceutical Co., Ltd | / | Durulama |
| 1.5 mL Eppendorf tüpü | Pekin Lanjieke Biyoteknoloji A.Ş., LTD | 12100024 | Alt Paket |
| 2 mL kriyoprezervasyon tüpü | Barok Biyoteknoloji A.Ş., LTD | 88-0151 | Paketlenmiş böbrek |
| 4 & derece; C buzdolabı | Haier Group Co. LTD | BCD-236WDGL | Mağaza |
| 5 mL şırınga | Sichuan Yeni yüzyıl Tıbbi polimer ürünleri Co, LTD | 20211115 | Gavage |
| 50 mL santrifüj tüpü | Beijing Langeke Biotechnology Co., LTD | CT-002-50A | Paketlenmiş böbrek |
| 12 G gavaj iğnesi | Pekin Zhongke Hengtian Technology Co., Ltd. | 12 # 55mm | Gavaj |
| 96 oyuklu plakalar | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | 11510 | Protein konsantrasyonunun belirlenmesi |
| -80 &°; C dondurucu | Thermo Fisher Scientific | 991 | Mağaza |
| Adenine | Beijing Boaotuo Technology Co., LTD | A0607 | Kalıplama ilacı |
| BCA geliştiricisi | Biyuntian Biological Engineering Co., LTD | P0010 | Protein konsantrasyonunun belirlenmesi |
| BCL-2 protein antikor reaktifi | Abcam Shanghai Trading Co., LTD | ab196495 | Western Blot |
| Caspase-3 proteini antikor reaktifi | Abcam Şangay Ticaret A.Ş., LTD | ab184787 | Western Blot |
| Kemilüminesans görüntüleme sistemi | Şangay Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD | 100240073 | Protein bantlama görüntüleme |
| Çin tıbbı tozu | Yunnan Çin Tıbbı Üniversitesi'nin İkinci Bağlı Hastanesi | / | Cure |
| Doğrudan Yüklemeli Renk Boyalı İşaretleyici | Pekin Kangrunchengye Biyoteknoloji A.Ş., LTD (GenStar) | M221 | Western Blot |
| Tek kullanımlık kan alma iğnesi | Liuyang Şanlı Tıp bilimi ve teknoloji geliştirme A.Ş., LTD | YZB / Ülke 0411-2010 | Kan örneklemesi |
| Tek kullanımlık insan venöz kan örneği toplama kabı | Liuyang Şanlı Tıp bilimi ve teknoloji geliştirme A.Ş., LTD | 20210901 | Kan örneklemesi |
| DK-30 Otomatik kar buz makinesi | Henan Brothers enstrüman ekipmanları Co, LTD | SHDX0023 | Buz yapma |
| ECL ışıldayan alt tabaka kiti | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | BL520B | Pozlanmış filmdeki gizli görüntüleri görünür görüntülere dönüştürün |
| elektronik teraziler | Shanghai Ran Hao Electronics Co., LTD | JCS-31002C | Sıçanların vücut ağırlığı ve böbrek ağırlığı ölçüldü |
| Donma mikrotomu | Thermo Fisher Scientific | HM525 NX | Microtome |
| tam otomatik biyokimyasal analizör | Tianjin Micro nano core Technology Co., LTD | PV2112001Z02410305 | Böbrek fonksiyon testi |
| Gaz anestezi sistemi | Zhongshi Technology Co., Ltd | ZS-MV-1 | Anestezi |
| Glisin | Pekin Soleibao Technology Co., Ltd. | Kedi # G8200 | Çalışma tamponu, Batı transfer tamponu |
| HE boyama reaktifi | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | G1120 | Boy -ama |
| Yüksek proteinli yem | Jiangsu Sinerjik Biyoloji Mühendisliği A.Ş., LTD | XT19008 | Besleme |
| Akıllı laboratuvar ultra saf su makinesi | Chongqing huachuag su arıtma mühendisliği co., LTD | 15L | Filtrasyon |
| Dahili referans β-aktin | Jiangsu Qinke Biyolojik Araştırma A.Ş., LTD | AF7018 | Batı Lekesi |
| İzofluran | Jiangsu Zhongmu Beikang Pharmaceutical Co., Ltd | 20220701 | Anestezi |
| sıvı nitrojen | Kunming Botai kuru buz satış A.Ş., LTD/ | Böbrek dokusu dondurma | |
| Losartan potasyum tabletleri | Merck Sharp & Dohme (Çin) Investment Co., LTD | J20180054 | Cure |
| Düşük sıcaklıkta yüksek hızlı doku öğütücü | Wuhan Servicebio technology CO.,LTD | SKZ3F20200191 | Doku taşlama |
| Maason boyama kiti | Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. | G1340 | Boyama Metanol |
| Guangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd | 20220519 | Batı transfer tamponu | |
| Mini-PROTEAN Tetra | Bole Life Tıbbi Ürünler (Şangay) Co., Ltd | 552BR 233193 | Elektroforezi |
| Moxa | Yunnan Çin Tıbbı | Üniversitesi/ | Cure |
| Multiskan Spektrumlu Mikroplaka Spektrofotometresi | TECAN | Kıvılcım | Doku proteininin emilimi ve konsantrasyonu tespit edildi |
| Makas çalıştırma | Zhangjiagang şehri Jinfeng geyik bıçağı kesme fabrikası | 201118 | Cildi kesin |
| Paraformaldehit | Beijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD | BL539A | Sabit doku |
| PERK protein antikor reaktifi | Shanghai Pumai Biotechnology Co., LTD (CST Çin Temsilcisi) | 3192 | Batı Lekesi |
| Pozitif floresan mikroskobu | Carl Zeiss Suzhou Co., Ltd. | 5446000456 | Fotoğraf çek |
| Prefabrike yapıştırıcı | Derun Cheng (Pekin) Biological Co., Ltd (ACE Çin Ajanı) | B230418 | Western Blot |
| ProteinFind Keçi Anti-Tavşan LgG (H + L), HRP Eşlenik | Şangay Dinran elektronik Technology Co, Ltd (TRAN) | HS101 | Western Blot |
| pulverizatör | Hefei Rongzhida küçük ev aletleri Co., LTD | RS-FS1401 | Ezilmiş Çin ilaç |
| PVDF membran | MerckMillipore Corporation | IPVH00010 | Batı Lekesi |
| Soğutmalı santrifüj | Hettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTD | MİKRO 220R | Santrifüj |
| RIPA lizat | Beijing Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio) | R0010 | Litik doku |
| Örnekleme kılcal | Jiangsu Kangjianhua Medical Supplies Co., LTD | 20160157 | İç kantustan kan |
| Haşlanma merhemi (Zilian merhemi) | Yunnan Geleneksel Çin Tıbbı İl Hastanesi | / | Yakıdan kaynaklanan haşlanma tedavisinde kullanılır |
| Yağsız süt tozu | Guangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX) | 1172GR500 | Batı engelleme tamponu |
| cerrahi bıçağı | Şangay Tıbbi Ekipman A.Ş., LTD | JOBO10 | İnsizyon böbrek dokusu |
| cerrahi bıçak sapı | Şangay Tıbbi Cihazlar A.Ş., LTD | J11010 | Montaj bıçağı |
| TS-200 Orbital çalkalayıcı | Haimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd. | TS-8S | Jel fiksasyonu |
| Tween 80 | MedChemExpress | HY-Y1819 | TBST |
| cımbız | Şangay Tıbbi Cihazlar A.Ş., LTD | JD1050 & nbsp; | Moxa'yı al |
| Veteriner ilaçları * Mikro çekirdek böbrek fonksiyon test diski | Tianjin Mikro nano çekirdek Technology Co, LTD | 47031-35.5-0145-0227-62-220750 | Böbrek fonksiyon testi |
Kaynaklar
- Run-Ming, Y. The origin and development of Chinese acupuncture and moxibustion. Ancient Science of Life. 4 (4), 224-228 (1985).
- Zhang, Q. W. Moxibustion Theories of Different Schools. , China Press of Traditional Chinese Medicine. Beijing. (2016).
- Ren, H. W., Cai, D. J. Brief discuss on treating febrile diseases with moxibustion. China's Naturopathy. 29 (02), 1-2 (2021).
- Ouyang, X. L., et al. Moxibustion may delay the aging process of Wistar rats by regulating intestinal microbiota. Biomedicine & Pharmacotherapy = Biomedecine & Pharmacotherapie. 146, 112147(2022).
- Qi, Q., et al. Gut microbiome alterations in colitis rats after moxibustion at bilateral Tianshu acupoints. BMC Gastroenterology. 22 (1), 62(2022).
- Wang, G. Y., Meng, Z., Xu, Q. Y., Dou, L., Cui, X. F. Scar moxibustion Zusanli treatment of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome 20 cases. Modern Chinese Medicine. 33 (03), 79-80 (2013).
- Xue, K. Y., Fu, J., Lan, L., Tang, J. X., Cui, J. Meta-analysis of the efficacy and safety of barrier moxibustion in the treatment of chronic fatigue syndrome. Journal of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine. 44 (03), 53-59 (2022).
- Liu, J. W., Tian, Y., Peng, Y. Y., Ye, Y. Y. Observation on moxibustion sensitivity and curative effect of thermal sensitive moxibustion and knee osteoarthritis. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 41 (10), 1063-1068 (2021).
- Liu, W. A., Chang, X. R., Liu, M., Zhang, G. S. Effects of herbal-cake-separated-moxibustion sized cones at different dosages on blood fat and hemorheology in patients with hyperlipemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 40 (9), 1787-1790 (2013).
- Zuo, Z., Chen, X. M., Jiang, Y. W., Yang, Y. M., Wang, B. Y. Effect of medicinal cake partition moxibustion on serum TGF-β1 and renal function in chronic renal failure rabbits. Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica. 38 (04), 82-84 (2017).
- Huang, P. D., et al. Effect of herbal cake-partitioned moxibustion on renal function and expression of renal connective tissue growth factor, integrin-linked kinase and bone morphogenetic protein-7 in chronic renal failure rabbits. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 44 (8), 577-582 (2019).
- Li, L. R., Huang, X. X., Wei, T. T., Zhang, P. Research progress of TCM external treatment for chronic renal failure. Journal of Guangxi University of Chinese Medicine. 23 (04), 51-54 (2020).
- Zuo, Z., Jiang, Y. W., Guan, Z. X., Chen, X. M. Observations on the therapeutic effect of herbal cake moxibustion on chronic renal failure. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 34 (03), 218-220 (2015).
- Wang, H., Zhang, H. M., Xu, J. M., Fan, R. Y., Lu, J. Effect of moxibustion on renal hemodynamics in patients with chronic kidney disease. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 43 (11), 722-724 (2018).
- Zhang, X. Q., Zhang, X. Y. External treatment of chronic kidney failure. Clinical Journal of Chinese Medicine. 9 (26), 141-143 (2017).
- He, C., Zhang, C. X., Zhou, S. Q., Fan, Y. S. Using old meshy cage cover to make a rat fixating device for acupuncture study. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (4), 348-350 (2021).
- Zhang, H. X., et al. Introduction of a new type of mouse forelimb fixator and two types of batch mice moxibustion device. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 46 (7), 616-619 (2021).
- Chen, W., et al. A batch moxibustion device in the mouse abdominal waist. Journal of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. 45 (04), 110-112 (2022).
- Gao, S. Y., Wu, R. N., Wang, M. M., Zhang, S. J. A device for animal experiment. Clinical Journal of Chinese Medicine. 10 (23), 139-140 (2018).
- Hu, Y. L. Manual of acupuncture for experimental animals (second edition). , China Agriculture Press. Beijing. (2014).
- Liang, Y. L., et al. Reflections on animal experiments with moxibustion. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy. 31 (11), 4379-4381 (2016).
- Madalina, V. N., Jinyang, Z. -B., Malgorzata, W., Liliana, S. Targeting renal fibrosis: Mechanisms and drug delivery systems. Advanced Drug Delivery Reviews. 129, 295-307 (2018).
- Wu, R. N., et al. Design of convenient animal experimental moxibustion therapy device. Shanghai Journal of Acupuncture and Moxibustion. 38 (02), 243-244 (2019).
- Yan, L. G., Zhou, T., Jia, Z. K., Li, J., Wang, C. X. Influence of Panax pseudo-ginseng-partition moxibustion on cartilage damage in rats with traumatic osteoarthritis by regulating AMPK/SIRT1/NF-?B signaling pathway. Hebei Medical Journal. 45 (10), 1450-1454 (2019).
- Xu, Q., et al. Effect of mild moxibustion of 45 °C at "Zusanli" (ST36) of different durations on the inflammatory factors in the abdominal aorta of hyperlipidemia rats. Zhen Ci Yan Jiu = Acupuncture Research. 48 (9), 923-932 (2023).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
