Bu çalışma, pıhtı eritme, hücre boyama ve rutin kan muayenesi yoluyla serebral kan pıhtılarının hücre bileşen analizi için hızlı ve etkili bir yöntemi tanımlamaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Serebral Kan Pıhtılarının Hücre Bileşenlerini Analiz Etmek İçin Kapsamlı Bir Yaklaşım
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Serebral arter veya damardaki bir kan pıhtısı olan serebral tromboz, en yaygın serebral enfarktüs türüdür. Serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerinin incelenmesi tanı, tedavi ve prognoz için önemlidir. Bununla birlikte, pıhtıların hücre bileşenlerini incelemeye yönelik mevcut yaklaşımlar, esas olarak, hücreler pıhtılara sıkıca sarıldığı için hücre bileşenlerinin kapsamlı çalışması için uygun olmayan in situ boyamaya dayanmaktadır. Önceki çalışmalar, çapraz bağlı fibrini doğrudan parçalayarak hücre bileşenlerini serbest bırakabilen bir fibrinolitik enzimi (sFE) Sipunculus nudus'tan başarıyla izole etmiştir. Bu çalışma, serebral trombüsün hücre bileşenlerini incelemek için sFE'ye dayalı kapsamlı bir yöntem oluşturmuştur. Bu protokol pıhtı eritme, hücre salma, hücre boyama ve rutin kan incelemesini içerir. Bu yönteme göre, hücre bileşenleri nicel ve nitel olarak incelenebilir. Bu yöntemi kullanan deneylerin temsili sonuçları gösterilmektedir.
Giriş
Serebrovasküler hastalık, insan sağlığını tehdit edebilen üç ana hastalıktan biridir ve bunların arasında iskemik serebrovasküler hastalık% 80'den fazlasını oluşturur. Serebral tromboz ve serebral ven trombozu, günümüzde en çok endişe duyulan iskemik serebrovasküler hastalıklardırve esas olarak serebral kan pıhtılarının neden olduğu 1,2. Tedavi uygun şekilde yapılmazsa, yüksek sakatlık ve mortalite oranlarına ve taburculuk sonrası yüksek nüks oranına sahip olacaktır3.
Son zamanlarda, giderek artan sayıda çalışma, serebral kan pıhtılarının hücre bileşenlerinin....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Araştırma, Huaqiao Üniversitesi Tıbbi Etik Komitesi'nin kurumsal yönergelerine uygun olarak gerçekleştirildi. Serebral kan pıhtıları cerrahi olarak çıkarıldı ve Fujian Tıp Üniversitesi'ne bağlı Quanzhou Birinci Hastanesi'nde hastalardan bilgilendirilmiş onam alınarak toplandı.
1. Kan pıhtısı ön tedavisi
- Pıhtıları temiz bir tabağa koyun, cımbızla 5 mL fizyolojik salin ekleyin, tabağı hafifçe sallayın ve salini bir pipetle çıkarın.
NOT: Durulamayı üç kez tekrarlayın. - Pıhtıları bir makasla daha küçük parçalar halinde (5 mm x 5 mm x 5 mm'den küçük) kesin. 5 mL fizyolojik salin ekleyin, tabağı hafifçe çalk....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bozunma sürecinin ilk aşamasında, kan pıhtılarının kırmızı kompakt bir yapıya sahip olduğu ve çalışma çözeltisinin renksiz olduğu bulundu. 30 dakika inkübasyondan sonra, çalışma çözeltisi açık kırmızıya döndü, bu da çapraz kan hücrelerinin çalışma çözeltisine salındığını gösterdi. Kuluçka süresi 5 saate uzatıldığında çoğu pıhtı çözüldü ve çalışma çözeltisi açık kırmızı oldu. Aksine, 10 saatlik inkübasyondan sonra bile fizyolojik salin grubunda (NC) önemli bir değişiklik olmadı (Şekil 1). Bu .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
sFE, fibrini doğrudan ve etkili bir şekilde parçalayabilen fibrinolitik bir ajandır12,16. Burada, serebral kan pıhtılarının çapraz bağlı fibrinini parçalamak, pıhtıların içindeki kapalı hücreleri serbest bırakmak ve pıhtıların hücre bileşenlerini kalitatif ve kantitatif olarak analiz etmek için sFE kullanıldı. Mikroskopi verileri ve rutin kan muayenesi, kapalı hücrelerin kan pıhtılarından salındığını gösterdi. Ayrıca, salınan hücrelerin hücre tipleri ve yapıları .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların ifşa edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu araştırma, Xiamen Şehri Bilim ve Teknoloji Bürosu (3502Z20227197) ve Fujian Eyaleti Bilim ve Teknoloji Bürosu (No. 2019J01070, No.2021Y0027) tarafından finanse edilmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Aglütinasyon Reaksiyon Plakası | ROTEST | RTB-4003 | |
| Otomatik Hematoloji Analiz Cihazı | SYSMEX | XNB2 | |
| Otomatik Dikey Basınçlı Buhar Sterilizatörü | SANYO | MLS-3750 | |
| Santrifüj Tüpü (1.5 mL) | Biosharp | BS-15-M Temiz | |
| tezgah | AIRTECH | BLB-1600 | |
| Sabit Sıcaklık İnkübatörü | JINGHONG | JHS-400 | |
| Kültür Kabı (100 mm) | NEST | 704001 | |
| DHG Serisi Isıtma ve Kurutma Fırını | SENXIN | DGG-9140AD | |
| Elektronik Analitik Terazi | DENVER | TP-213 | |
| Filtre Membranı (0.22 & mikro; m) | Millex GP | SLGP033NK | |
| Mikro Soğutmalı Santrifüj & nbsp; | Cence | H1650-W | |
| Mikroskop Slaytları | CITOGLAS | 01-30253-50 | |
| Mili-Q Referans | Millipore | Z00QSV0CN | |
| Normal Salin | CISEN | H37022337 | |
| Optik Mikroskop | Nikon | ECLIPSE E100 | |
| Parafilm | Bemis | PM-996 | |
| Fosfat Tamponlu Salin | Beyotime | C0221A | |
| Pipet Ucu (1 mL ) | Axygene | T-1000XT-C | |
| Pipet Ucu (200 & mikro; L) | Axygene | T-200XT-C | |
| Pipetleyici (1 mL) | Thermo Fisher Scientific | ZY18723 | |
| ; L) | Thermo Fisher Scientific | ZY20280 | |
| Neşter | MARTOR | 23111 | |
| Küçük Boyutlu Vorteks Osilatörü | Kylin-Bell | VORTEX KB3 | |
| Cımbız | Hipstik | HKQS-180 | |
| Wright Boyama Solüsyonu | Beyotime | C0135-500ml |
Kaynaklar
- Park, D. W., et al. Edoxaban versus dual antiplatelet therapy for leaflet thrombosis and cerebral thromboembolism after TAVR: The ADAPT-TAVR Randomized clinical trial. Circulation. 146 (6), 466-479 (2022).
- Devasagayam, S., Wyatt, B., Leyden, J., Kleinig, T.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
