Antidiarreal İlaçların ve Bitki Ekstraktlarının Drosophila melanogaster Üzerine Etkisinin Değerlendirilmesi

Sindirim sistemi olarak da adlandırılan gastrointestinal (GI) sistem, besinlerin sindiriminden ve emiliminden ve sindirilmemiş ürünlerin atılımından sorumludur¹. Gastrointestinal sistem, rahatsızlığa, ağrıya ve günlük yaşamda aksamalara neden olabilecek bir dizi rahatsızlığa karşı savunmasızdır. Gastrointestinal bozukluklar arasında karın ağrısı ve rahatsızlığı, şişkinlik, mide ekşimesi, hazımsızlık veya hazımsızlık, bulantı, kusma, ishal ve kabızlık^{bulunur 2}. İshal, GI bozukluğunun en sık görülen semptomudur³ ve 24 saatlik bir süre boyunca en az üç gevşek ve sulu dışkı ile bir hastalık olarak tanımlanır⁴. İshal, bakteriler, virüsler, parazitler, mantarlar dahil olmak üzere çok çeşitli patojenlerden kaynaklanır ve ayrıca ilaçlardan da kaynaklanabilir ^5,6. Dünya çapında ishal, 5 yaşın altındaki çocuklar arasında ikinci önde gelen ölüm nedeni olmaya devam etmektedir⁷. İshal kendi kendine düzelebilse de, birkaç günden fazla sürerse altta yatan daha ciddi bir duruma da işaret edebilir.

Bağırsak sistemini incelemek için araştırmacılar fareler, sıçanlar ve domuzlar gibi hayvan modellerine yöneliyorlar ^8,9. Bununla birlikte, bu hayvanların kullanımı, özel tesisler ve etik hususlar gerektirdiğinden pahalı ve zaman alıcı olabilir. Son çalışmalar, D. melanogaster'in GI yolunu incelemek ve rejeneratif homeostazın sürdürülmesi, immün yaşlanma gelişimi, epitel bariyer fonksiyonunun kaybı ve metabolik homeostazdaki düşüş gibi bazı mekanizmaları araştırmak için bir model olarak kullanılabileceğini göstermiştir^10,11. Meyve sineği olarak bilinen D. melanogaster, insanlarla yüksek derecede genetik homolojiyi paylaşır; İnsan hastalığı genlerinin yaklaşık% 75'inin sinek^12'de işlevsel bir homologa sahip olduğuna inanılmaktadır. Ayrıca bir ön bağırsak, bir orta bağırsak ve bir arka bağırsaktan oluşan basit bir sindirim sistemine sahiptirler¹³. D. melanogaster'in laboratuvarda kültürlenmesi kolaydır ve farklı şekillerde genetik olarak değiştirilebilir¹⁴. Bu nedenle, in vivo test için D. melanogaster kullanmak, araştırmacıların karmaşık biyolojik süreçleri kontrollü bir ortamda incelemelerine olanak tanıyan güçlü bir araçtır.

Dünya Sağlık Örgütü'ne (WHO) göre, gelişmekte olan ülkelerde yaşayan insanların yaklaşık %80'i temel sağlık ihtiyaçları için geleneksel tıbbı kullanmaktadır¹⁵. Şifalı bitkilerin yüksek kullanımı, kolay bulunabilmeleri, ucuz olmaları ve az yan etkiye sahip olmaları ile açıklanabilir¹⁶. Bitkisel tedavide kullanılan ana bitki kısımları arasında yapraklar, ağaç kabuğu, kökler, tohumlar¹⁷ bulunurken, ana hazırlama yöntemleri infüzyon, kaynatma ve maserasyondur¹⁸. Bu bitkisel ilaçlar, insan vücudu üzerinde terapötik etkileri olan alkaloidler, terpenoidler, flavonoidler, steroidler, tanenler ve^{karbonhidratlar 19} gibi fitokimyasal maddeler içerir. İnsanlar ishal, karın ağrısı ve dizanteri gibi GI bozukluklarını tedavi etmek için çeşitli şifalı bitkiler kullanırlar²⁰. Örneğin, Psidium guajava, dünyada ishali tedavi etmek için en yaygın kullanılan bitkilerden biridir. Çeşitli farmakolojik ve klinik testler güvenliğini zaten göstermiştir, bu da onu^21,22'yi incelemek için iyi bir ishal önleyici aday yapar. Bununla birlikte, bitkisel ilaçların başlıca sınırlamaları, etkinlik ve güvenlik değerlendirmesinin eksikliğinin yanı sıra, kullanılan bitki özlerinin bileşimi hakkında kesin ve eksiksiz bilgi eksikliğidir²³. Bitkisel ilaçların etkinliğini ve güvenliğini doğrulamak için, deneysel ve klinik doğrulamayı içeren sistematik bir yaklaşım gereklidir ve yaklaşım, in vivo ve in vitro çalışmalardan elde edilen yeterli veri ile desteklenmelidir.

İshal tedavisinde geleneksel ilaçları etkinlikleri açısından değerlendirmek için, fare ve sıçanların kullanımı son yıllarda baskın olmuştur^24,25. Daha önce bahsedilen temel avantajlar, yani sinekler ve memeliler arasında kullanım kolaylığı, uygun fiyatlı, tekrarlanabilir, korunmuş emici ve sindirim fonksiyonları nedeniyle, bitkilerin ishal önleyici aktivitesini değerlendirmek için bir model olarak D. melanogaster'i kullanmayı öneriyoruz. D. melanogaster'deki ishal fenotipi, artan dışkı birikintileri, daha büyük tortu boyutları, daha açık bir renklenme (daha az konsantre) ve daha yüksek dışkı materyali²⁶ dahil olmak üzere çeşitli özelliklerle karakterize edilebilir. Bu fenotip, çeşitli parametreler kullanılarak ölçülebilir: dışkı birikintilerinin sayısı, toplam birikinti alanı, ortalama hafiflik ve toplam entegre optik yoğunluk (IOD). Toplam IOD, tortunun toplam boya içeriği olarak tanımlanır, yani atılan toplam dışkı materyali²⁷ anlamına gelir. Daha önce, D. melanogaster 27,28'in dışkı birikintilerini analiz etmek için bir test geliştirilmiştir. Bu tahlilde, dışkı birikintilerinin sayısını, boyutunu ve hafifliğini kontrol etmeyi ve böylece meyve sineklerinin bağırsak fizyolojisini izlemeyi sağlayan bir dışkı analiz aracı olarak nihai gübre okuyucusu (T.U.R.D.) kullanılmıştır. Ancak bu yöntem sineklerde ishal fenotipini değerlendirmek için hiçbir zaman uygulanmamıştır. İyon Taşıma Peptit (ITP) geni, susuzluk ve atılımın önemli bir endokrin düzenleyicisidir ve su homeostazını D. melanogaster'de beslenme ile birleştirir. Yakın zamanda yapılan bir çalışmada, gastrointestinal sistem boyunca gıda geçiş hızının ve dışkılama olaylarının sıklığının ITP aşırı ekspresyonu ile azaldığı ve ITP yıkımı ile arttığı gösterilmiştir. İkinci fenotip, bu çalışmanın yazarları tarafından ishal olarak tanımlanmıştır²⁹.

Bu protokolde, bir ishal önleyici ajanın (yani guava yaprağı ekstresi) D . melanogaster'in gastrointestinal sistemi üzerindeki etkisini değerlendirmek için dışkı birikinti testinin değiştirilmiş bir versiyonu kullanılır. Bu yöntemin genel amacı: 1) ilaçların ve bitki ekstraktlarının antidiarreal etkisini değerlendirmek için kolay ve güvenilir bir yöntem sağlamak ve 2) biyoaktivite güdümlü bir yaklaşım uygulayarak bitki ekstraktlarında ishal önleyici etkiden sorumlu biyoaktif bileşiklerin keşfine izin vermektir.

1. Bitki ekstraktının hazırlanması

1. Yetişkin bir ağaçtan³⁰ Psidium guajava L. yaprağı toplayın ve şu şekilde işleyin: yaprakları 6 gün boyunca 40 °C'de bir fırında kurutun, ardından 6 gün boyunca havada kurutun, ardından 40 °C'de 4 gün boyunca fırında tekrar kurutun ve son olarak kuru yaprakları bir öğütme değirmeninde veya bir kahve değirmeninde öğüterek yaprak tozu hazırlayın.
2. 100 g kurutulmuş tozu 1 L% 96 etanol içinde 24 saat boyunca bir çalkalayıcı kullanarak sürekli karıştırarak yumuşatın. Bitki kalıntısını bir kez daha aynı işleme tabi tutun ve elde edilen süzüntüleri 40 °C'de düşük basınç (175 mbar) altında vakumlu bir döner buharlaştırıcı kullanarak kuruyana kadar buharlaştırın.
3. İstenilen konsantrasyonu elde etmek için bitki ekstraktını etanol içinde çözün. Bir dizi konsantrasyonu test ederek optimal konsantrasyonu (burada açıklanan protokolü kullanarak) belirleyin.
   1. Bitki özleri için 100 μg/mL, 1 mg/mL, 10 mg/mL, 100 mg/mL konsantrasyon aralığını test edin ve sineklerin hayatta kalma oranını etkilemeyenleri kullanın. Saf bileşikler için aşağıdaki konsantrasyon aralığını test edin: 0.05, 0.5, 5 ve 50 mM¹².

2. Gıda ortamının hazırlanması

1. 100 mL damıtılmış su ölçün ve 4 g şeker ve 0.8 g agar ile behere dökün (Malzeme Tablosuna bakınız). 100 °C'ye ısıtın (karıştırırken) ve 10 dakika bekleyin.
2. Sıcaklığı 80 °C'ye düşürün, karıştırırken 7,4 g un ve 2,8 g maya ekleyin. En az 20 dakika ısıtın, yine de karıştırın ve 80 °C civarında olması gereken sıcaklığı kontrol edin.
3. Moldex-propiyonik asit çözeltisini ekleyin (1 mL moldex ve 0.3 g propiyonik asit iyice karıştırın). Sıcaklığın yaklaşık 50 °C'ye düşmesini bekleyin, bitki özü çözeltisini (1 mg/mL) ve 0,5 g bromofenol mavisi tozunu ekleyin.
   NOT: Test edilecek diğer konsantrasyonlar hakkında daha fazla ayrıntı için lütfen bölüm 1.3.1'e bakın.
4. Yiyeceği Petri kaplarına dökün ve Petri kabı dolduğunda durun (Şekil 1A). Petri kaplarını oda sıcaklığına (yaklaşık 3 saat) soğumaya bırakın, ardından kapağı kapatın ve buzdolabında 4 °C'de saklayın.
   NOT: Suyun buharlaşmasını önlemek için Petri kapları buzdolabında 2 haftadan fazla saklanmamalıdır.

Şekil 1: Dışkı depozitasyon testi için deneysel sürecin gösterilmesi. (A) Gıda ortamıyla dolu Petri kaplarını gösteren resim. Petri kabında yeterli yiyecek bulunduğundan emin olun, böylece hiçbir boşluk sinekleri hapsetmez ve hareket etmelerini engeller. Bununla birlikte, yüzeyin eşit şekilde kaplanabilmesi için Petri kabını yiyecekle aşırı yüklemeyin. (B) Protokolde açıklandığı gibi spatulanın görüntüsü. (C) Protokolde açıklandığı gibi dışkı depozit testinin görüntüsü. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

3. Sineklerin hazırlanması

1. CO₂ tanklarını, iğneli CO₂ üfleme tabancasını, sinekliği, boya fırçasını ve mikroskobu hazırlayın. Sinek istasyonu, hem sinek pedine hem de üfleme tabancasına CO₂ sağlar. Sinek pedi sinekleri ayırmak için kullanılırken, CO₂ üfleme tabancası şişelerde, şişelerde ve Petri kaplarında sinekleri uyuşturmak için kullanılır.
2. Pupa (en az 10) içeren şişeleri seçerek sineklerin yaşını standartlaştırın ve aşağıdaki yöntemi kullanarak yetişkin sinekleri tüpten atın. Şişeleri birer birer ters çevirin ve iğneyi pamuk tapası ile şişenin yan duvarı arasına sokun. Yetişkin sinekleri, tüm sinekler pamuk tıkacı üzerinde uyuyana kadar CO₂ üfleme tabancasıyla uyuşturun (onları uyuşturmak için birkaç saniye gerekir ve anestezik etki, üfleme tabancasını bıraktıktan sonra birkaç saniye sürecektir). Şişeyi% 70 etanol içeren bir cam şişenin üzerinde açın ve sinekleri içine bırakın. Şişeyi pamuk tapa ile kapatın ve 25 °C'de% 60 nem ile bir inkübatörde saklayın. İnkübatörün ışık döngüsünü 12 saat aydınlığa/12 saat karanlığa ayarlayın.
3. Kuluçkadan sonra (en fazla 8 saat), mikroskop altında bakire dişiler ve erkekler olarak ayırın ve sırt üstü çevirerek ve cinsel organlarına bakarak sinek pedi.
   1. Kadın cinsel organı, kırmızımsı renkli erkek cinsel organlarına kıyasla soluktur. Erkekler ayrıca ön bacaklarında seks tarağı adı verilen koyu renkli kılların varlığıyla da tanımlanabilir. Sinekleri iki taze tüpe bölün (biri erkekler ve diğeri dişiler için) ve 25 °C'de 6-8 gün inkübe edin.
      NOT: 25 °C'de dişiler yumurtadan çıktıktan sonra yaklaşık 8 saat bakire kalır.

4. Dışkı birikinti testi

1. Petri kapları arasında karışıklığı önlemek için Petri kaplarını ilgili suş, cinsiyet ve ilaçla etiketleyin. Petri kaplarını üst üste koyun.
2. Boyalı yiyecekleri içeren Petri kaplarını alın ve fazla sıvıyı emmek için kurutma kağıdına ters çevirin. Bir spatula kullanarak (Şekil 1B), yiyeceği 12 eşit parçaya bölün ve ardından spatulayı kullanarak bir dilimi boş bir Petri kabına koyun.
   NOT: Çoğaltma sayısına bağlı olarak, kesilecek dilim sayısı Petri kabı başına 20'ye kadar artırılabilir. Her dilim aynı boyutta olmalıdır.
3. Tüm sinekler pamuk tıkacı üzerinde uyuyana kadar sinekleri CO₂ ile uyuşturun. Her Petri kabına altı sağlıklı sinek aktarın (Şekil 1C) ve kapağı hemen kapatın, ardından inkübatöre yerleştirin (25°C, ` nem, 12 saat aydınlık/12 saat karanlık).
4. Deney sırasında sineklerin Petri kabından kaçmamasını sağlamak için, Petri kabının üst ve alt kapaklarını bir bantla tutturun. Her test grubu için altı kopya Petri kabı hazırlayın (en azından).
5. Sineklerin 24 saat boyunca geri dönmesine izin verdikten sonra, onları uyuşturmak için CO₂ kullanın, sinekleri% 70 etanol ile dolu bir kaba aktarın ve kalan yiyecekleri atın.
6. Petri kaplarını saklayın ve 5. adıma geçin.

5. Petri kaplarının miktarının belirlenmesi

1. Bilgisayarda bir klasör ayarlayın ve deney suşunun adını, sineklerin cinsiyetini ve kullanılan ilaçların türünü ekleyerek yeniden adlandırın. Bu klasör içinde Original, Cut ve Analysis adlı alt klasörler oluşturun.
2. İnç başına 6.400 piksel (ppi) optik çözünürlüğe sahip yüksek çözünürlüklü bir tarayıcı kullanarak Petri kaplarını tarayın. Her Petri kabının üst ve alt kapaklarını, tarayıcı alanının ortasına ayrı ayrı yerleştirerek tarayın.
3. Bilgisayarda yüklü olan uygulamayı açın. Bilgisayar ekranında tüm genel ayarların bulunduğu bir karşılama penceresi açılacaktır (Şekil 2A).
   NOT: Gelişmiş ayarları değiştirmeyin. Bu adım, yalnızca Malzeme Tablosunda önerilenle aynı tarayıcıya sahip kullanıcılar için geçerlidir. Başka bir yazılım kullanıyorsanız lütfen yönergelere bakın.
   1. Uygulamadaki Petri kabını sıra numarası, üst veya alt kapak, cinsiyet ve kullanılan yiyecek türünü ekleyerek adlandırın. Adım 5.1'de orijinal alt klasör kümesini seçin.
   2. Petri kabını önizleyin. Pencerenin altındaki Önizleme'ye tıklayın, tarayıcının ön tarama yapması için birkaç saniye bekleyin, ardından bilgisayar ekranında bir pencere belirir. Petri kabını çevrelemek için ekranda görüntülenen kareyi hareket ettirin.
   3. Bilgisayar ekranındaki pencerenin sağ alt kısmındaki Tara'ya tıklayın, tarama otomatik olarak seçilen klasöre bir görüntü olarak kaydedilir.
4. Görüntüyü bir uygulama (örneğin, açık kaynaklı Fiji uygulaması) kullanarak kırpın, böylece hiçbir artefakt ve yiyecek kalıntısı tortu olarak kabul edilmez.
   NOT: Aşağıdaki adımlar yalnızca Fiji uygulamasına sahip kullanıcılar için geçerlidir. Başka bir yazılım kullanıyorsanız lütfen yönergelere bakın.
   1. Fiji uygulamasını açın, ekranda bir araç çubuğu görünene kadar birkaç saniye bekleyin.
   2. Kırpılacak görüntüyü araç çubuğuna sürükleyin. Araç çubuğundaki 3. simge Çokgen seçimlerini seçin, pasta grafiğin etrafında bir açı işaretlemek için ekrana tıklayarak fotoğrafın istenmeyen kısmını (renkli pasta grafiği) kırpın (Şekil 2B-1,2).
      NOT: Bir görüntüdeki kırpma bölgesini tanımlarken, seçilen karelerin uçtan uca sorunsuz bir şekilde bağlanması zorunludur.
   3. Çubuğun sol üst köşesindeki Düzenle'ye ve ardından Dışarıda Doldur/Temizle'ye tıklayın (Şekil 2B-3).
   4. Fotoğrafı kaydetmek için çubuğun sol üst köşesindeki Dosya'ya , ardından Farklı Kaydet'e ve son olarak Tiff'e tıklayın. Adım 5.1'de ayarlanan Cut alt klasörünü seçin.
      NOT: Kırpılan görüntüyü kaydederken, dosya adında özel karakterler (ör. !, &, $, #, _,-,...) veya çok fazla karakter bulunmadığından emin olun.

Şekil 2: Dışkı depozit testinden elde edilen verileri analiz etme sürecindeki temel adımlar. (A) Tarama uygulamasının ayar bilgilerini gösteren ekran görüntüsü. (B) Fiji uygulaması kullanılarak kırpılan görüntüler. Hiçbir eser ve yiyecek kalıntısının tortu olarak kabul edilmediğinden emin olun. (C) Excel_merge-v4 uygulamasını açarken nasıl göründüğünü gösteren ekran görüntüsü. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

6. Dışkı birikintilerinin tanımlanması, gübre açık kaynaklı yazılımın nihai okuyucusunu kullanarak

NOT: Gübre yazılımının nihai okuyucusunun tanıtımı ve kullanımı Ek Dosya 1'de bulunabilir.

1. İlk olarak, T.U.R.D. yazılımını açın (Ek Şekil 1). Yeni bir deneme oluşturun ve belgeye bir ad verin, ardından bunu adım 5.1'de ayarlanan Analiz alt klasörüne kaydedin.
2. Plakalar'a ve ardından Plaka ekle'ye tıklayın. İşlenecek Petri kabını seçin. Seçilen plakaların adlarını ve yeni parametreleri içeren yeni bir pencere açılır. Blok boyutunu, ofseti, minimum boyutu ve maksimum boyutu ayarlayın (Ek Şekil 2).
3. Tespit edilen dışkı birikintilerinin doğru olanlar olduğunu doğrulamak için Plakalar'a tıklayın, ardından Seçilen Plakaları İncele'ye, ardından Grafikler'e ve Açıklamalı görüntüleri görüntüleyin (Ek Şekil 3). Yakınlaştırın ve sayılara bakın. Analize dahil edilmemesi gereken yalnızca birkaç mevduat varsa, hariç tutulacak mevduatların seçimini kaldırın (Ek Şekil 4).
4. İşlenecek her yeni görüntü için 6.3 adımından itibaren yeniden başlatın.
5. T.U.R.D. yazılımı ile plakaları analiz ettikten sonra Hayır'a tıklayarak sinek sayısını değiştirin . Sinekler (Ek Şekil 5).
6. Plakalar > Grupları düzenle > Ekle'ye tıklayarak grup adını değiştirin ve ardından Grup sütununda grup adını seçin.
7. Açıklayıcı İstatistikleri Analiz Et'>e tıklayarak farklı çoğaltma verilerini ayrı ayrı dışa aktarın > Grubu Seçin (Ek Şekil 6). Tüm e-tablo dosyalarını (.csv) aynı klasörde tutun.
8. Tüm dosyaları (adım 6.7'de elde edilen) benzersiz bir elektronik tabloda toplamak için, Excel_merge-v4 (Ek Kodlama Dosyası 1) uygulamasını açın, aşağıdaki cümle görünene kadar bekleyin Klasörün yolunu seçin (.csv dosyalarla):, ve ardından yukarıdaki klasör adresini yapıştırın. Örneğin, yol C:\Experiment\Fecal deposit test\ olabilir ve ardından klavyede iki kez Enter tuşuna basılabilir (Şekil 2C). Bundan sonra, aynı klasörde yeni bir elektronik tablo dosyası oluşturulur. Yeni e-tablo dosyası, dışa aktarılan tüm dosyaları farklı sayfalarda içerir.
9. Önceki elektronik tablo dosyasında, tüm çoğaltmaların her parametresinin ortalamasını toplamak için başka bir sayfa ekleyin (verileri işlemek için DÜŞEYARA işlevini kullanın). Ek Tablo 1'de bir örnek verilmiştir.
10. P değerini analiz edin.

Burada sunulan çalışma, D. melanogaster'de ishal ölçümünün dışkı birikintisi testi kullanılarak elde edilebileceğini göstermektedir. Fenotipler (ishal olsun ya da olmasın) arasındaki önemli farklılıklar, dışkı birikintilerinin sayısı, toplam birikinti alanı, ortalama tortu alanı, ortalama hafiflik ve toplam entegre optik yoğunluk (IOD) dahil olmak üzere çeşitli parametreler analiz edilerek belirlenebilir.

Sineklerde ITP geninin yıkılması, artan dışkılama sıklığı ile karakterize bir ishal fenotipini indükleyebilir ve bu da onları ishali incelemek için uygun bir model haline getirir29. Bu deney bağlamında, ITPi suşu (w1118; kızsız-GeneSwitch, UAS-ITPi /(CyO)) standart bir ortamda kullanıldı ve yetiştirildi. Psidium guajava yaprakları ekstresi, bu bitkinin tropikal bölgelerde ishali yönetmek için yaygın kullanımı göz önüne alındığında, ishal önleyici müdahale olarak seçildi. Bir antidiarreal ajan olan Crofelemer, ABD Gıda ve İlaç Dairesi (FDA) tarafından antiretroviral tedavi gören HIV/AIDS'li yetişkin hastalarda enfeksiyöz olmayan ishal için semptomatik rahatlama sağlamak üzere onaylanmıştır31. Crofelemer, Croton lechleri Müll.Arg'ın lateksinden elde edilen bir ekstrakttır. Kök kabuğu32. Loperamide, ishali tedavi etmek için dünya çapında kullanılan sentetik bir ilaçtır33. Hem Crofelemer hem de Loperamide potansiyel pozitif kontroller olarak kullanıldı.

Hipotez, sinekleri P. guajava özü, Crofelemer ve Loperamide ile beslemenin, normal gıda ile beslenenlere kıyasla ishal fenotipini azaltacağı yönündeydi. Bu hipotezi incelemek için, normal gıda ile beslenen sinekler ile P. guajava özü (1 g/100 mL), Crofelemer (1 g/100 mL) ve Loperamid (10 mM) ile beslenen sinekler arasındaki çeşitli parametreler karşılaştırılarak D. melanogaster'de dışkı birikintilerinin ölçümü yapılmıştır. Deney düzeneği için 6-7 günlük bakire dişi veya erkekler kullanıldı. Her Petri kabı altı sinek içeriyordu ve altı kopya gerçekleştirildi. Sinekler 24 saat boyunca yetiştirildi ve daha sonra her grup analiz edildi. Deney grubu arasındaki anlamlı farklılığı karşılaştırmak için öğrenci t-testi kullanıldı. Sonuçlar, dışkı birikintilerinin sayısının (Şekil 3A), toplam birikinti alanının (Şekil 3B) ve toplam Gİİ'nin (Şekil 3C) normal gıda grubunda P. guajava özü (1 g / 100 mL) grubuna kıyasla hem bakire kadınlarda hem de erkeklerde önemli ölçüde daha yüksek değerler sergilediğini göstermektedir. Ne yazık ki, Loperamid her iki cinsiyette de herhangi bir etki göstermedi (ancak D. melanogaster'de antispazmodik bir ajan olarak hareket ettiği zaten gösterildi)34 Crofelemer'in sadece kadınlar üzerinde bir etkisi vardı.

Şekil 3: ITPi gerinim analizi. ITPi suşu dört koşul altında analiz edildi: normal gıda ile beslenme, 1 g / 100 mL P. guajava özü, 1 g / 100 mL Crofelemer ve 10 mM Loperamid ile takviye edilmiş gıda. Veriler, hem kadınlarda hem de erkeklerde her bir koşulun ortalama ± SD'si olarak sunulur (bir Petri kabının iki tarafının altı kopyası için). İstatistiksel analiz, iki grubu karşılaştıran bir öğrencinin t-testi kullanılarak yapıldı. p değerleri aşağıdaki gibi gösterilir: *: p < 0.05; **: p < 0.01; : p < 0.001, ****: p < 0.0001. (A) 1 g/100 mL Crofelemer, 10 mM Loperamide, 1 g/100 mL P. guajava özü ile takviye edilmiş gıdalarla beslenen sineklerde ve normal gıda ile beslenen sineklerde ITPi suşunun dışkı birikintilerinin sayısı karşılaştırıldı. Ek olarak, bakire dişiler ve erkekler arasındaki dışkı birikintilerinin sayısındaki fark da analiz edildi. Her iki grupta da normal gıda ile beslenen sineklerde dışkı birikimi sayısı 1 g/100 mL P. guajava ekstresi ile beslenenlere göre anlamlı olarak daha yüksekti. (B) Normal gıda ile beslenen sineklerde ve 1 g/100 mL P. guajava özü, 1 g/100 mL Crofelemer ve 10 mM Loperamid ile takviye edilmiş gıda ile beslenen sineklerde ITPi suşunun toplam dışkı birikintileri alanı karşılaştırıldı. Erkeklerde ve kadınlarda, normal gıda ile beslenen sineklerde toplam dışkı birikintisi alanı, 1 g / 100 mL P. guajava özü ile beslenenlere göre anlamlı olarak daha yüksekti. (C) Normal gıda ile beslenen sinekler ile 1 g / 100 mL P. guajava özü, 1 g / 100 mL Crofelemer ve 10 mM Loperamid ile takviye edilmiş gıda ile beslenen sinekler arasında ITPi suşunun toplam IOD'sindeki fark analiz edildi. Erkeklerde ve kadınlarda, normal gıda ile beslenen sineklerde toplam GİB, 1 g / 100 mL P. guajava özü ile beslenenlere göre anlamlı olarak daha yüksekti. Kısaltmalar: F = Kadın; M = Erkek; Crofe = Crofelemer; Lop = Loperamide; Ne de yemek = Normal yiyecek; P. gua ext = Psidium guajava özü. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

P. guajava özü grubunda gözlenen azalmış atılımın, özütün inhibitör etkisinden kaynaklandığını ve gıda tüketiminin azalmasından kaynaklanmadığını göstermek için, katı gıda tüketiminin doğrudan alım tahmini ve takibi (DİYETLER) yöntemini gerçekleştirdik35. Sonuçlar, sineklerin normalden daha az yiyecek tüketmesine neden olan erkeklerde Loperamid dışında, ilaç verilen gruplar ile ilaç kullanmayanlar arasında gıda tüketiminde önemli bir fark olmadığını göstermiştir (Şekil 4).

Şekil 4: Beslenme deneyi. Beslenme testi, sineklerde katı gıda tüketimini ölçtü. Sinekler dört farklı besiyeri ile beslendi: 1 g/100 mL P. guajava ekstresi, 1 g/100 mL Crofelemer, 10 mM Loperamid ve normal mama. Her grup, beş kopya ile 20 sinekten oluşuyordu. Veriler hem kadınlarda hem de erkeklerde her bir durumun ortalama ± SD olarak sunulmuştur. İstatistiksel analiz, iki grubu karşılaştıran bir öğrencinin t-testi kullanılarak yapıldı. p değerleri aşağıdaki gibi gösterilir: *: p < 0.05; **: p < 0.01; : p < 0.001, ****: p < 0.0001. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Dışkı birikintileri ve beslenme tahlili sonuçları, P. guajava ekstraktının meyve sineklerinde ishali tedavi etmek için güvenilir bir tıbbi bitki olduğunu göstermiştir.

Ek Şekil 1: T.U.R.D. açılan pencere. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil 2: Ayarlanacak ayarların bulunduğu T.UR.D. penceresi. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil 3: Açıklamalı bir görüntüye sahip T.U.R.D. penceresi. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil 4: Halihazırda işlenmiş bir görüntüden tespit edilen her noktayı gösteren T.U.R.D. penceresi. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil 5: İşlenen her görüntüyü gösteren T.U.R.D. penceresi. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Şekil 6: T.U.R.D. her grup için verileri dışa aktarma sürecini gösteren pencere. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Dosya 1: T.U.R.D. yazılımını kullanmak için hızlı kılavuz. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Tablo 1: Analize hazır son elektronik tablo örneği. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Ek Kodlama Dosyası 1: Elektronik tabloları birleştirme uygulaması. Bu Dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.