Açıklanan tüm prosedürler Drexel Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. Yenidoğan domuz yavrusu, ABD'nin Pennsylvania eyaletinde bulunan Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı (USDA) onaylı bir çiftlikten satın alındı.
1. Stereo görüntüleme sistemi kurulumu
- 100 kare/sn'ye (FPS) kadar çekim yapabilen bir stereo görüntüleme kamera sistemini bir yardımcı standa bağlayın. Bu çalışmada kullanılan stereo görüntüleme kamera sistemi, 63 mm'lik bir taban çizgisi ile ayrılmış, yatay olarak hizalanmış iki kameraya (sol ve sağ kameralar olarak adlandırılır) sahip pasif bir stereo kameradır (Şekil 1).

Resim 1: Stereo görüntüleme kamera sistemi. (A) 63 mm'lik bir taban çizgisi ile ayrılmış iki kameralı (sol ve sağ kameralar) paralel stereo görüntüleme kamera sistemi. (B) Stereo görüntüleme kamera sistemi ve stand kurulumunun şeması. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Stereo görüntüleme sistemi DLT Kalibrasyonu, 3D kontrol hacmini sayısallaştırıyor
- Üç şeffaf akrilik pleksiglas kare levha (12 inç x 12 inç x 0,125 inç) elde edin. Her sayfaya bir ızgara yerleştirin ve en az 10 nokta çizin, böylece x, y ve z koordinat düzlemlerinde 3B kontrol hacmine en az 30 nokta dağıtılsın. Kaydedilecek olanın maksimum yüksekliğini yakalamak için üç sayfayı farklı yüksekliklerde istifleyerek 3D kontrol hacmini oluşturun (Şekil 2A).
- Ayak pedallı bir sayısallaştırıcı kullanarak 3D kontrol ses seviyesindeki tüm noktaları sayısallaştırın. 3D kontrol küpünde orijini (0, 0, 0) belirleyerek, pozitif x ve y yönlerini tanımlayarak, sayısallaştırılmış (x, y, z) koordinatları (mm cinsinden) kaydetmek için bir belge açarak x, y ve z koordinatlarını (mm cinsinden) elde edin (Şekil 2B) her noktanın ve (x, y, z) koordinatları (mm cinsinden) bir *.csv dosyası olarak kaydedin.
NOT: (x, y, z) koordinatları, 3D kontrol küpünde ayarlanan başlangıç noktasına göredir.
- Stereo görüntüleme kamera sisteminin sırasıyla sol ve sağ kameralarını kalibre etmek için bu sayısallaştırılmış (x, y, z) koordinatları (mm cinsinden) kullanın.

Şekil 2: Ayak pedallı üç boyutlu kontrol ses seviyesi ve sayısallaştırıcı. (A) 3D kontrol hacminin şeması. (B) Mm cinsinden (x, y, z) koordinatları elde etmek için 3D kontrol sesini sayısallaştırmak için kullanılan ayak pedallı sayısallaştırıcı bileşenleri. Kısaltma: 3D = üç boyutlu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
3. Stereo görüntüleme kamera sistemi kalibrasyonu-doğrudan doğrusal dönüşüm katsayılarının üretilmesi
- Stereo görüntüleme kamera sistemini bir yardımcı program standına takın (Şekil 3A).
- Stereo görüntüleme kamera sistemini 6D kontrol ses seviyesinin 3 cm üzerine yerleştirin (Şekil 3A).
- Stereo görüntüleme kamera sistemini bir USB Type-C kablosuyla bir dizüstü bilgisayara bağlayın.
- Görüntüleme yazılımını açın (Malzeme Tablosuna bakın).
- 3D kontrol ses düzeyini görüntüleyin. Çıktı görüntüsü (Ek Şekil S1) hem sol hem de sağ kamera görünümlerini içerir (Şekil 3B).
- Çıktı görüntüsünü sırasıyla sol ve sağ görüntüler olmak üzere iki görüntüye ayırmak için özel MATLAB kodunu (Ek Dosya 1) çalıştırın (sırasıyla Şekil 3C, Ek Şekiller S2 ve Ek Şekiller S3).
- DLTcal5.m GUI22'yi (Ek Dosya 2) başlatmak için Çalıştır'a tıklayın.
- Sayısallaştırılmış (x, y, z) koordinatları (mm cinsinden) olan *.csv dosyasını seçmek için DLTcal5 kontrolleri penceresinde başlat'a tıklayın (Şekil 4A ve Ek Dosya 3).
- Stereo görüntüleme kamera sisteminin ilk görünümünden 3D kontrol ses seviyesinin ilgili görüntüsünü seçin (Ek Şekil S2). Bu stereo görüntüleme kamera sistemi için, sol kamera görüntüsü ilk kamera görüntüsüne karşılık gelir (Şekil 4B).
- İlk kamera görünümü görüntüsü (yani sol kamera görünümü) açılır.
- Sol kamera görünümünden 2B piksel koordinatlarını elde etmek için Bölüm 2'de noktaların sayısallaştırılma sırasına göre noktaları seçin (Şekil 4B).
- DLTcal5 Kontrolleri penceresinde geçerli noktayı ayarlayın ve yüklenen ilk kamera görünümünde (yani sol kamera görünümü) görüntüsünde karşılık gelen geçerli noktaya tıklayın.
- Yüklenen ilk kamera görünümündeki tüm noktaları seçtikten sonra, sol kamera görünümü için 11 DLT katsayısını oluşturmak için hesaplama katsayılarına tıklayın (Şekil 4B).
- DLTcal5 kontrolleri penceresinde bir kamera ekle'ye tıklayın ve doğru kamera görünümü (yani ikinci kamera görünümü) için 11 DLT katsayısını oluşturmak için 3.7.2-3.7.6 adımlarını tekrarlayın (Şekil 4B, C ve Ek Şekil S3).
- Çıktı dosyalarının kaydedileceği klasörü seçmek için DLTcal5 kontrolleri penceresinde verileri kaydet'e tıklayın (Şekil 4D).
- Çıktı dosyaları, stereo görüntüleme kamera sisteminin sol ve sağ kamera görünümleri için 2D (x, y) piksel koordinatlarını (Ek Dosya 4) ve karşılık gelen 11 DLT katsayısını içerir (Şekil 4D ve Ek Dosya 5).
- Stereo görüntüleme kamera sistemi kalibre edilmiştir.

Şekil 3: Doğrudan doğrusal dönüşüm kalibrasyonu için bir stereo görüntüleme kamera sistemi kullanarak üç boyutlu kontrol hacminin bir görüntüsünü elde etmek için şematik. (A) Stereo görüntüleme kamera sistemini bir standa takın ve ardından bir USB Type-C kablosuyla bir dizüstü bilgisayara bağlayın. 3D kontrol sesini stereo görüntüleme kamera sisteminin 6 cm altına yerleştirin. (B) Görüntüleme yazılımını kullanarak 3D kontrol ses düzeyinin bir görüntüsünü alın. Çıktı görüntüsü, sol ve sağ kameralardan gelen birleşik bir görüntüdür. (C) Özel bir MATLAB kodu kullanılarak, birleştirilmiş çıktı görüntüsü, 3D kontrol hacminin ayrı sol ve sağ görüntülerine ayrılır. Kısaltma: 3D = üç boyutlu. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: Bir stereo kamera görüntüleme sisteminin sol ve sağ kamera görüntüleri için doğrudan doğrusal dönüşüm katsayıları oluşturmak için şematik. (A) DLTcal5.m22'yi çalıştırın, kontroller penceresinde başlat'a tıklayın ve 3D kontrol hacminin sayısallaştırılmış (x, y, z) koordinatlarını (mm cinsinden) içeren *.csv dosyasını seçin. (B) Sol kameranın kalibrasyon görüntüsünü seçin. Ardından, görüntüdeki noktaları sayısallaştırıldıkları sırayla seçin. Ardından, sol kamera görünümü için DLT katsayılarını oluşturmak üzere hesaplama katsayıları'na tıklayın. Ardından, doğru kamera görünümü için adımları tekrarlamak üzere Kamera ekle'yi tıklayın. (C) Sağ kamera görüntüsünün kalibrasyon görüntüsünü seçin. Ardından, görüntüdeki noktaları sayısallaştırıldıkları sırayla seçin. Ardından, doğru kamera görünümü için DLT katsayılarını oluşturmak üzere katsayıları hesapla'ya tıklayın. (D) Sol ve sağ kamera görünümleri için DLT katsayılarının kaydedileceği dizini seçmek için Verileri Kaydet'e tıklayın. Çıktı dosyasının adını girin ve Tamam'a tıklayın, DLT katsayıları bir *.csv dosyası olarak kaydedilir. Kısaltma: 3D = üç boyutlu ve DLT = doğrudan doğrusal dönüşüm. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
4. Veri toplama
- Anestezi uygulanmış yenidoğan Yorkshire domuz yavrusunu (3-5 günlük), aksiller bölgeyi açığa çıkarmak için abdüksiyonda üst ekstremiteler olacak şekilde sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Deri ve fasya boyunca trakeanın üzerinden sternumun üst üçte birlik kısmına kadar orta hat insizyonu yapın.
- Brakiyal pleksus sinirlerini ortaya çıkarmak için künt diseksiyon kullanın.
- Test öncesinde, sırasında ve sonrasında susuz kalmalarını sağlamak için açıkta kalan brakiyal pleksus sinirine tuzlu su çözeltisi sıkın.
- Brakiyal pleksus PN'nin distal ucunu kesin ve mekanik test aparatına kelepçeleyin.
- Stereo görüntüleme kamera sistemini yardımcı standa takın, gerilecek PN'nin 6 cm yukarısına kadar yerleştirin ve ardından stereo görüntüleme kamera sistemini bir USB Type-C kablosuyla bir dizüstü bilgisayara bağlayın (Şekil 5A).
- Yerleştirme ve kenetlenme bölgelerine işaretleyiciler yerleştirmek için mürekkep bazlı bir cilt işaretleyici ve yer değiştirme takibi için sinir uzunluğuna bağlı olarak PN'nin uzunluğu boyunca ek iki ila dört işaretleyici kullanın (Şekil 5B).
- Veri analizi için PN'nin altına düz bir şekilde bir kalibrasyon ızgarası (yani 0,5 cm x 0,5 cm kareli lamine ızgara) ve 1 cm'lik bir cetvel yerleştirin (Şekil 5B).
- Sıkıştırmadan sonra ve germeden hemen önce PN'nin ilk uzunluğunu kaydedin.
- PN'yi 500 mm/dak'lık bir yer değiştirme hızında arızaya veya önceden belirlenmiş bir esnemeye kadar gerin.

Şekil 5: Periferik sinir gerilmesinin veri alımı için temsili şema. (A) Stereo görüntüleme kamera sistemini bir standa takın ve ardından bir USB Type-C kablosuyla bir dizüstü bilgisayara bağlayın. Stereo görüntüleme kamera sistemini periferik sinirin 6 cm yukarısına kadar yerleştirin. (B) Periferik sinir, distal uçtaki mekanik düzeneğe klemplenir. Mürekkep bazlı bir cilt işaretleyici kullanarak, yerleştirme ve sıkıştırma bölgelerine bir işaretleyici ve sinir uzunluğu boyunca iki ila dört işaretleyici daha yerleştirin. Test öncesinde, sırasında ve sonrasında nemli kalması için periferik sinirin üzerine salin püskürtülür. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
5. Veri analizi-işaretleyici yörünge takibi
- Çıkış video dosyasını (Ek Dosya 7) sol ve sağ kamera video dosyaları (sırasıyla Ek Dosya 8 ve Ek Dosya 9) olmak üzere iki video dosyasına ayırmak için özel MATLAB kodunu (Ek Dosya 6) çalıştırın.
- Tık Koşmak başlatmak için DLTdv7.m22 GUI (Ek Dosya 10).
- DLTdv7 denetimleri penceresi açılır ve yeni proje, projeyi yükle ve çık düğmeleri etkinleştirilir (Şekil 6A).
- Yeni bir projeye başlamak için DLTdv7 kontrolleri penceresinde yeni proje'ye tıklayın.
- Bir iletişim kutusu açıldığında, gerilmiş bir periferik sinir üzerindeki yer değiştirme işaretleyici yörüngelerini izlemek için iki video dosyasını (yani sol ve sağ kamera görünümleri) belirtmek için 2'yi seçin (Şekil 6B).
- Sol kamera görünümünden (Ek Dosya 8) video dosyası olan ilk video dosyasını (yani Video 1) seçin ve aç'a tıklayın (Şekil 6C). Ardından, sağ kamera görünümünden (Ek Dosya 9) video dosyası olan ikinci video dosyasını (yani Video 2) seçin ve aç'a tıklayın (Şekil 6C).
- İki video dosyası seçildikten sonra, video dosyalarının DLT aracılığıyla kalibre edilen kamera görünümlerinden alındığını belirtmek için evet'e tıklayın.
- Stereo görüntüleme kamera sistemi için ilgili DLT katsayılarını *.csv dosyasını (Ek Dosya 5) seçin ve aç'a tıklayın (Şekil 6D).
- İlk video kareleri her iki video dosyasından da görüntülenir ve DLTdv7 kontrol penceresinin geri kalanı etkinleştirilir. Yeni proje düğmesi, 3B noktaları yeniden hesapla düğmesiyle değiştirilir ve proje yükle düğmesi, kaydet düğmesiyle değiştirilir (Şekil 6E).
- DLTdv7 kontrolleri penceresinde, kare numarasının 1 olduğundan, geçerli noktanın 1 olarak ayarlandığından, otomatik izleme modunun kapalı olduğundan emin olun ve tüm videoları, DLT görsel geri bildirimini güncelleyin ve 2D parçaları göster kontrol edildi (Şekil 6E).
- İzleme noktalarının PN'nin yer değiştirme işaretleyicileri üzerine, yerleştirme işaretleyicisi 1. noktaya, işaretleyici 1 2. noktaya karşılık gelecek ve kelepçe işaretleyicisi son nokta olacak şekilde yerleştirildiğinden emin olun.
- 1. noktayı Video 1'deki ekleme işaretçisine yerleştirin (yani, sol kamera view video file) yerleştirilen noktanın ekleme işaretçisinin merkezinde olduğundan emin olun. Yerleştirilen noktayı ekleme işaretçisinin merkezine taşımak için klavye kısayollarını (Tablo 1) kullanın (Şekil 7A).
- DLT görsel geri bildirimi kontrol edildiğinden, Video 1'e bir nokta yerleştirildiğinde, Video 2'de mavi bir epipolar çizgi belirir (yani, sağ kamera view video dosyası) (Şekil 7). Mavi epipolar çizgiyi referans olarak kullanarak Video 1'deki ekleme işaretçisine 2. noktayı yerleştirin. Yerleştirilen noktayı ekleme işaretçisinin merkezine taşımak için klavye kısayollarını (Tablo 1) gerektiği gibi kullanın (Şekil 7A).
- Yörüngelerini izlemek üzere diğer doku işaretleyicilerine nokta eklemek için DLTdv7 kontrolleri penceresinde nokta ekle'ye tıklayın. Hangi noktanın etkin olduğunu öğrenmek için DLTdv7 kontrolleri penceresindeki geçerli noktaya bakın.
- Nokta ekle'yi tıklayın. 2. noktayı Video 1'deki işaretçi 1'e yerleştirin. Video 2'de 2. noktayı 1. işarete yerleştirmek için mavi epipolar çizgiyi ve klavye kısayollarını kullanın. Yerleştirme ve klemp arasındaki sinirin uzunluğu boyunca tüm yer değiştirme belirteçleri için önce Video 1'de ve ardından Video 2'de (yani son nokta) nokta eklemeye ve yerleştirmeye devam edin (Şekil 7B-F).
- Tüm başlangıç noktaları Video 1 ve Video 2'ye (yani sırasıyla sol ve sağ kamera video dosyaları) yerleştirildikten sonra, DLTdv7 kontrolleri penceresinde kare numarasının 1 olduğundan ve geçerli noktanın 1 olarak ayarlandığından emin olun.
- DLTdv7 kontrolleri penceresinde, açılır menüden otomatik izleme modunu otomatik ilerleme olarak ve otomatik izleme tahmincisini açılır menüden genişletilmiş Kalman olarak değiştirin (Şekil 8A).
- Önce Video 1'de yerleştirilen tüm noktaların takibini tamamlayın ve ardından Video 2'de izlemeyi tamamlayın. Arızaya (yani, periferik sinirin büyük yırtılmasından önceki kare) veya önceden belirlenmiş esneme için videonun tamamı elde edilene kadar işaretleyicinin ortasına kare kare sol tıklayarak işaretleyici yörüngesini izleyin.
- Video 1'deki 1. noktayı izlemeye başlayın. İzlemenin işaretçinin merkezinde olduğundan emin olmak için istediğiniz gibi yakınlaştırın ve uzaklaştırın (Tablo 1); videonun hatası veya sonuna kadar kare kare tıklayın (Şekil 8B). Video 1'de 1. noktanın takibini tamamladıktan sonra, 1. kareye dönün ve DLTdv7 kontrolleri penceresindeki açılır menüden geçerli noktayı 2. nokta olarak değiştirin. Önceki izlenen nokta açık maviye dönecek ve yörüngesi sarıya dönecektir. Mevcut nokta yeşil bir elmasa ve pembe bir merkeze sahip olacak.
- Videonun arızalanmasına veya sonuna kadar her nokta için kare kare sol tıklayarak Video 1'deki tüm noktaların izlenmesini tamamlayın (Şekil 8C-G).
- Video 2'de, Video 1'e referans olarak noktaları izlemek için mavi epipolar çizgiyi kullanın (Şekil 9). DLTdv7 kontrolleri penceresinde, kare numarasını 1'e döndürün ve geçerli noktayı 1 olarak ayarlayın ve Video 2'de nokta 1'in yörüngesini izlemeye başlayın.
- Video 2'de kalan noktaları izlemek için aynı adımları (5.2.16-5.2.18) izleyin.
- Video 1 ve Video 2'de izleme tamamlandıktan sonra, izlenen noktaların (x, y, z) koordinatlarını (mm cinsinden) dışa aktarmak için DLTdv7 kontrolleri penceresinde noktaları dışa aktar'a tıklayın.
- Çıktı dosyalarının kaydedileceği dizini seçmek için bir iletişim kutusu açılır. Dizin konumuna tıklayın.
- Çıktı dosyalarının adını ayarlamak için başka bir iletişim kutusu açılır. Çıktı dosyalarının adını ayarlayın (yani, nerve1_101-Jan-2001videoanalyzed_cal09.30_trial1_).
- Başka bir diyalog kutusu açılır. Kaydetme biçimini düz olarak seçin.






