Bu protokol, alerjik rinitin sıçan modelini değerlendirmek için çok renkli bir immünofloresan tekniğini açıklar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Allerjik Rinit Sıçanlarının Nazal Mukoza Dokusu Kesitlerinde Çok Renkli İmmünoassay ile İmmünofloresan Etiketleme
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Allerjik rinit (AR), dünya nüfusunun yaklaşık %10-20'sini etkileyen, primer olarak spesifik immünoglobulin E (IgE) aracılık eden, burun mukozasının kronik, enfeksiyöz olmayan inflamatuar bir hastalığıdır. İmmünofloresan (IF) boyama, hastalığa özgü protein ekspresyonunu tespit etmek için uzun süredir standart bir teknik olsa da, geleneksel IF teknikleri, aynı numunedeki üç veya daha fazla proteinin ekspresyon seviyelerini tespit etme yeteneklerinde sınırlıdır. Sonuç olarak, son yıllarda, hücrelerde veya dokularda birden fazla hedefin aynı anda etiketlenmesine izin veren çok renkli IF teknikleri geliştirilmiştir.
Bu protokol, bir AR sıçan modeli oluşturma, nazal mukozal örneklerin alınması ve çok renkli immünofloresan için teknik prosedürler için kapsamlı bir genel bakış sağlar. AR grubundaki tüm sıçanlar hapşırma, burun akıntısı ve burun kaşıntısı gibi tipik semptomlar sergiledi ve davranışsal gözlemler ≥5 puan aldı. Hematoksilen ve eozin (H&E) boyama, AR grubunda artmış inflamatuar hücre sayısı ve bozulmuş nazal mukozal bütünlük ortaya çıkardı. Çok renkli immünofloresan (mIF), RORγt ve TICAM-1 ekspresyonunun arttığını gösterirken, AR sıçanlarının burun mukoza dokusunda Foxp3 ekspresyonu azaldı.
Giriş
Allerjik rinit (AR), primer olarak spesifik immünoglobulin E (IgE)1,2'nin aracılık ettiği burun mukozasının kronik, enfeksiyöz olmayan inflamatuar bir hastalığıdır. Hapşırma, burun akıntısı, burun tıkanıklığı ve burun kaşıntısı gibi semptomlarla karakterizedir. Sanayileşme ve kentleşme ile birlikte, AR prevalansı giderek artmakta ve dünya nüfusunun yaklaşık %10-20'sini etkilemektedir1. İmmünofloresan (IF) tekniği, bir antikor-antijen bağlanma reaksiyonu kullanan bir floresan boyama yöntemidir. Biyolojik dokularda veya hücrelerde spesifik proteinlerin dağılımını ve ekspresyon seviyelerin....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Deneysel protokol ve prosedürler, Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi İdari ve Hayvan Araştırma Komitesi'nden onay almıştır (Kayıt numarası: 2022DL-010). 180-200 g ağırlığındaki sekiz haftalık erkek Sprague Dawley (SD) sıçanları ticari olarak elde edildi (Malzeme Tablosuna bakınız) ve kontrollü sıcaklık (23 ± 2 °C) ve bağıl nem (%55 ± %10) ile doğal bir aydınlık/karanlık döngüsü altında barındırıldı. On iki sıçan rastgele iki gruba ayrıldı: kontrol grubu ve AR grubu. Tüm sıçanlar bu koşullara alıştırıldı ve denemeden önce bir hafta boyunca yiyecek ve suya ücretsiz erişim sağlandı.
1. AR'nin sıçan modelinin kurul....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Altı SD sıçan, OVA intraperitoneal enjeksiyon ve nazal zorlama yoluyla AR modeline başarılı bir şekilde indüklendi. AR, AR grubundaki tüm sıçanlarda indüklendi ve grubun% 100'ünü oluşturdu. AR grubundaki tüm sıçanlar hapşırma, burun akıntısı ve burun kaşıntısı gibi tipik semptomlar sergiledi. Tüm davranışsal gözlemler ≥5 puan aldı (Tablo 2).
Modellemenin 21. günündeki H & E boyama sonuçları, kontrol sıçanlarında, burun mukozasının epitel hücrelerinin ve kirpikle.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Allerjik Rinit (AR), çevresel ve genetik faktörlerin bir kombinasyonundan kaynaklanan burun mukozasının enfeksiyöz olmayan inflamatuar bir hastalığıdır. İş verimliliğini etkileyen, yaşam kalitesini düşüren, uykuyu, bilişsel işlevi bozan, sinirlilik ve yorgunluğa neden olan küresel bir sağlık sorunu haline geldi. AR, dünya nüfusunun %10-20'sini¹ etkilemekte ve önemli ekonomik maliyetler taşıyarak AB ülkelerinde yıllık 30-50 milyar avroya varan kayıplara neden olmaktadır18. Ayrıca, birkaç çalışma AR.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, Sichuan Eyaleti Bilim ve Teknoloji Departmanı (2021YJ0175) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Al (OH) < sub > 3 < / sub > | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A7130 | |
| 75 etanol | Anhui Yiren An Co., Ltd | 20210107 | |
| Amonyak | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
| Susuz etanol | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 | |
| Anti-floresan söndürme mühürleyen | SouthernBiotech | 0100-01 | |
| Otomatik boyama makinesi | Termo bilimsel | Varistain Gemini ES | |
| Taşıyıcı slaytlar | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
| Sitrat-fosfat tamponu | Servicebio biyoteknoloji co., Ltd | G1201 | |
| Sitrik asit antijen onarım çözeltisi (PH 6.0) | Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1201 | |
| Lamel | Nantong Mei Wei De Deneysel Ekipman A.Ş. | ||
| Lamel | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | CS01-2450 | |
| CY3-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1223-50UL | |
| DAPI | Sawell Biyoteknoloji Co., Ltd | G1012 | |
| Renk Açıcı Çalkalayıcı | SCILOGEX | S1010E | |
| EDTA kireç çözme çözümü | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | ||
| Elektrikli ısıtma yüksek kurutucu ve nbsp; | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Gömme kutusu markalama makinesi | Thermo scientific | PrintMate AS | |
| Gömme makinesi | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
| Hızlı doku susuzlaştırma makinesi | Termo bilimsel | STP420 ES | |
| Film mühürleyen | Termo bilimsel | Autostainer 360 | |
| FITC-Tyramide | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1222-50UL | |
| Floresan mikroskobu | Güneşli Optik Teknoloji Co.Ltd | CX40 | |
| Foxp3 | Affinity Biosciences Co., Ltd | bs-10211R | |
| Donma masası | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| Keçi Anti-Tavşan IgG H & L (HRP) | Liankebio Co., Ltd | GAR0072 | |
| Keçi serumu | Biosharp | BL210A | |
| H & E boyama kiti | Leagene | DH0020 | |
| Hemostatik forseps | Şangay Tıbbi Cihazlar Co, Ltd | J31010 | |
| Hidroklorik asit | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
| İmmünohistokimyasal kalem | Biosharp | BC004 | |
| Mikrodalga fırın | Midea | M1-L213B | |
| Nötr sakız | Sinopharm Grubu Kimyasal Reaktif Co, Ltd | 10004160 | |
| Ovalbumin | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A804010 | |
| Fırın | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Avuç içi santrifüjü | SCILOGEX | D1008E | |
| Paraformaldehit | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0099-100ml | |
| Patoloji kesiti tarayıcı | 3DHISTECH Kft | Pannoramic SCAN | |
| PBS tampon | Biosharp | G4202 | |
| Pipet ve nbsp; | Ejderha | KE0003087/KA0056573 | |
| Rorγ t | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF3196 | |
| Neşter | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
| Kendinden floresan söndürme maddesi Sudan Black B | Bioengineering Co., Ltd | A602008-0025 | |
| Dilimleyici | Termo bilimsel | HM325 | |
| Dilimleme makinesi | Termo bilimsel | HM325 | |
| Slayt | Nantong Mewtech Yaşam Bilimleri Co, Ltd | PC2-301 | |
| Sprague Dawley sıçanları | Sichuan Geleneksel Çin Tıbbı Akademisi | SYX  2023-0100 | |
| TICAM-1 | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF6289 | |
| Doku makası | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J22120 | |
| Doku serpme fırın tepsisi makinesi | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| TYR-690 floresan boyalar | Şangay Rutron Biyoteknoloji Co., Ltd | RC0086-34RM | |
| Vorteks karıştırıcı | SCILOGEX | SLK-O3000-S | |
| Su banyosu sürgülü kurutucu | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| Balmumu düzeltici | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
| Ksilen | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Kaynaklar
- Brożek, J. L., et al. Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).
- Maurer, M., Zuberbier, T. Und....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
