Burada, ex vivo beyin dilimlerinde tutulan dorsal lateral genikülat çekirdekten röle nöronlarında nöronal içsel uyarılabilirliğin uzun vadeli plastisitesini indüklemek için bir protokol açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Dorsal lateral genikülat çekirdeğin nöronlarında içsel nöronal uyarılabilirliğin uzun süreli plastisitesinin indüklenmesi
Bu makalede
Özet
Özet
Dorsal lateral genikülat çekirdek (dLGN), retinadan kortikal alanlara giden görsel bilgi için temel bir röle görevi görmek üzere uzun süredir kabul edilmektedir, ancak son bulgular, dLGN ana hücrelerinin fonksiyonel plastisitesini büyük ölçüde hafife aldığını göstermektedir. Bununla birlikte, bu değişiklikleri destekleyen hücresel mekanizmalar tam olarak araştırılmamıştır. Burada, genç sıçanların akut beyin dilimlerinden dorsal dLGN röle hücrelerinde içsel nöronal uyarılabilirliğin (LTP-IE) uzun süreli güçlenmesini indüklemek için bir protokol sunuyoruz. İçsel plastisite genellikle sinaptik plastisite ile paralel olarak indüklenir. Bununla birlikte, dLGN nöronlarında, LTP-IE, 10 dakika boyunca 40 Hz'lik bir frekansta ani aktivite ile güvenilir bir şekilde indüklenir. dLGN röle nöronlarındaki LTP-IE, indüksiyon protokolünden sonra 40 dakikaya kadar takip edilebildiği için uzun ömürlüdür. Sonuç olarak, bu çalışmanın sonuçları, dLGN röle hücrelerinde içsel plastisitenin indüksiyonu için ilk kanıtları sağlamakta, böylece aktiviteye bağlı görsel plastisitede talamik nöronların rolüne daha fazla işaret etmektedir.
Giriş
Bu yöntem makalesinin genel amacı, yama kelepçe tekniğinin standart akım-kelepçe modunu kullanarak, in vitro olarak sıçanın görsel talamik nöronlarında nöronal uyarılabilirliğin uzun süreli plastisitesini indüklemek için basit bir yol sağlamaktır1,2. Bu tekniğin geliştirilmesinin arkasındaki mantık, basitliği ve tekrarlanabilirliğidir. Belirli bir zamanlama ile sağlanan postsinaptik aksiyon potansiyelleri ile eşleştirilmiş veya eşleştirilmiş sinaptik girdilerin uyarılması gibi alternatif tekniklere göre avantajı, güvenilirliğidir.
Görsel sistemdeki plastisitenin geleneksel ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneyler Avrupa ve Kurumsal yönergelere (Konsey Direktifi 86/609/EEC ve Fransız Ulusal Araştırma Konseyi) göre yürütülmüş ve yerel sağlık otoritesi (Veterinary Services, Préfecture des Bouches-du-Rhône, Marsilya) tarafından onaylanmıştır.
1. Hayvanlar
- Her iki cinsiyetten (50-90 g ağırlığında) 19-25 günlük Long Evans sıçanlarını kullanarak deneyler yapın.
- Hayvanları, anneleri ve yavrularıyla birlikte geleneksel plastik kafeslerde barındırın. 12 saatlik aydınlık/karanlık döngüsü ve su ve yiyeceğe ad libitum erişim ile sıcaklığı sabit tutun.
2. Sıçan d....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
dLGN nöronları, tüm hücre konfigürasyonunda kaydedilmiş ve LTP-IE, ionotropik glutamat ve GABA reseptör antagonistleri varlığında 10 dk boyunca 40 Hz frekansında aksiyon potansiyeli tetiklemesiyle indüklenmiştir (Şekil 3A). İndüklemeden 20-30 dk sonra, giriş direncinde (Rin) herhangi bir değişiklik olmaksızın (Şekil 3C), aksiyon potansiyeli sayısında üç katlık bir artış gözlemlenmiştir (Şekil 3B). Bu protokol, dLGN nöronl.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada, kaydedilen nöronun 10 dakika boyunca 40 Hz frekansında aksiyon potansiyellerini uyandırmak için uyarılmasıyla akut beyin dilimlerinde canlı tutulan dLGN nöronlarında LTP-IE'nin indüksiyonunu rapor ediyoruz. Bu protokolün herhangi bir nörofizyoloji laboratuvarında uygulanması kolaydır, çünkü minimum sayıda ekipman (dilimleyici, mikroskop, 1 amplifikatör, 1 toplama kartı ve bilgisayar) gerektirir. Ancak, değerli verileri toplamak için birkaç kritik adıma uyulmalıdır. Protokol kapsamındaki ilk kritik adım, beyin dok.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan etmemektedir.
Teşekkürler
INSERM, CNRS (DD'ye), AMU (MR'ye), FRM (DVS20131228768'den DD'ye ve DEQ20180839583'dan DD'ye), NeuroSchool (Fransa 2030" programı A*Midex (Initiative d'Excellence d'Aix-Marseille Université, AMX-19-IET-004) ve ANR finansmanı (ANR-17-EURE-0029'dan AW'ye) ve ANR (LoGiK, ANR-17-CE16-0022'den DD'ye, Plastinex, ANR-21-CE16-013'ten DD'ye) tarafından desteklenir. Mükemmel hayvan bakımı için A Venture & K Milton'a teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Otomatik titreşimli bıçak mikrotomu | Leica | VT-1200S | vibratom / dilimleyici |
| Borosilikat cam tüp | Phymep | B-15086-10 | |
| Kontrol Cihazı Typ V | Luigs & Neumann | Typ V | sıcaklık kontrol cihazı |
| Igor yazılımı | wavemetrics | analiz yazılımı | |
| Kızılötesi video mikroskobu | Olympus | XM-10 Kamera | |
| Kynurenate | Merk/Sigma | K3375 | AMPA/NMDA reseptör engelleyici |
| Düşük gürültülü Veri Toplama Sistemi | Axon - Moleküler cihazlar | Digidata 1440A | analog/dijital arayüz |
| Mikromanipülatörler | Luigs & Neumann | LN Mini25 | |
| Multiclamp 200B | Axon - Moleküler cihazlar | N/A | Yama kelepçesi amplifikatörü |
| Multiclamp 700B | Axon - Moleküler cihazlar | N/A | yama kelepçesi amplifikatörü |
| PC-100 çektirme | Narishige | PC-100 | mikropipet çektirme |
| PClamp10 | Axon - Moleküler cihazlar | N/A | yama kelepçesi kayıt yazılımı |
| Pikrotoksin | AbCam | ab120315 | GABAA reseptörleri bloker |
| Dilim mini oda | Luigs & Neumann | LN Chambre Slice mini I-II | Batık Hazne |
| Dik mikroskop | Olympus | BX51 WI |
Kaynaklar
- Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. J. Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pflugers Arch. 391 (2), 85-100 (1981).
- Sakmann, B., Neher, E.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
