<ol><li> Videoda gösterildiği gibi bir akış odası oluşturun. Parafilm mühür sıkı olduğundan emin olun ve yıkanmış lamelleri kullanabilirsiniz. </li><li> 5-10 &#39;odasında inkübe aktin bağlayıcı ajan. </li><li> Engelleyici bir protein ile cam lamel non-spesifik bağlayıcı siteleri engellemek. </li><li> Odanın içinde tampon polimerize G-aktin akan polimerize aktin. </li><li> Solukluk fazla tampon akan unpolymerized aktin. </li></ol>

zaman atlamalı mikroskopi sökme aktin İzlenmesi

Zaman atlamalı Mikroskopi Sökme Aktin İzlenmesi

Pekala, bugün size bir akış odasının nasıl yapıldığını göstermek, dik mikroskopta görüntüleme için bir füzyon odası. Daha sonra film kullanarak iki alan yaratıyorum. Ben de para filmi çekip küçük şeritler halinde kesiyorum.Bir sonraki adımda, bu temel olarak duvarlar için kanalları oluşturacak ve onları eğik bir hava ile kurutacağım. Kapak fişini paranın üstüne koydum, Ve işte bitti. Daha sonra parametreyi eritmek ve temelde bir conta oluşturmak için bir ısı bloğunda ısıtıyorum.İşte bu nedir, buradaki kapak camı ve sonra kapak camının üstünde tam burada gördüğünüz gibi iki kat phim var. Ve bunun üzerine, yine, bir, 22'ye iki mil metrelik bir kapak kayması. Bu tam burada, mührü düşürmek için param'a bastırdım.Tamam, sıvı burada bir yönde giriyor ve ben onu bu yönde bir filtre kağıdı ile emebilirim. Ve size bunu nasıl yapacağınızı birazdan göstereceğim. Yapmayı sevdiğim şey, onu nemlendirilmiş bir odaya koymak, ki bu çok basit.İki tür yükseltilmiş şerit alın ve altına bir kağıt filtresi koyun. Ve ben olduğu gibi gürültülü tutmak için, akış haznesinin kapağını, kapak kızağını üzerine koydum. Şimdi, hazneye bir çözüm sunmanın yolu, pipet ucunu haznenin girişine koymanız ve basitçe ayırmanızdır.Şimdi yaptığım şey, kapağı kapalı olarak odayı 10 dakika inkübe etmek. Sıvıyı diğer taraftan emmek için genellikle yaptığım şey, onu kullanmak, bir filtre kağıdı almak ve bu şekilde ince şeritler halinde kesmektir. Ve bu ince şeritlerden birini alıyorum ve aynı anda solüsyonu girişe uygularken filtre kağıdını çıkışa koyuyorum ki değişimi, solüsyonu emmek için.Böylece sıvının çözeltiden aktığını göreceksiniz. Ve sonra orta kapanış için beş dakika bekliyorum. Şimdi yapmaya hazır olduğum şey, aslında aktini ve aktini, aslında polimerize etmem gerekiyor, akış odasının içinde polimerize ediyorum ve bu daha önceki prosedürlerin aynısı.Yani bu şekilde ve şimdi hareket polimerize olduğu için, büyük miktarda sadece tampon kullanarak tüm fazla polimerize edilmemiş eylemi yıkıyorum. Yani burada yaklaşık yüz mikrolitreye sahibim ve bu birkaç reaksiyon odası hacmi değerinde bir tampon. Sadece, bilirsiniz, filtre kağıdı doygun hale geldiğinde, yönü değiştirmem gerekiyor. Tamam?Ve bu yüzden bununla görüntüleme yapmaya hazırım. Yani ona bağlı aktin ile perfüzyon odası. Şimdi slaytı alıyorum, mikroskobun altına monte ediyorum ve bir yağ objektifi ile görüntülediğim için, kapağın üst yüzeyine biraz daldırma yağı süreceğim, çimen dokunuşu, yani çözelti veya protein veya içerideki herhangi bir şeyi değerlendireceğim.Yani yaptığım şey, zaman atlamalı görüntüleme yaparken aslında çözüm tarafını değiştirebilmek. Gibi.

Zaman atlamalı Mikroskopi Sökme Aktin İzlenmesi

Bu makalede

Protokol

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

İlgili makaleler