Buradaki protokol, slayt yapımı, boyama ve yorumlama olmak üzere üç adımdan oluşan hızlı ve standartlaştırılmış bir mikrobiyolojik hızlı yerinde değerlendirme (M-ROSE) iş akışını göstermektedir. Bu protokol hekimlerin hızlı klinik kararlar almasına yardımcı olacaktır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Pulmoner Enfeksiyon Hastalıklarında Mikrobiyolojik Hızlı Yerinde Değerlendirme
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Açıklanamayan akciğer enfeksiyonu ile başvuran hastalarda ampirik anti-enfektif tedavinin hızlı bir şekilde başlatılması çok önemlidir. Klinik pratikte görüntüleme elde edilmesi nispeten basit olmasına rağmen, özgüllüğünün olmaması genellikle hastalığın altta yatan etiyolojisini doğru bir şekilde tanımlamak için balgam kültürü, bronkoalveoler-lavaj sıvı kültürü veya genetik dizileme gibi ek zaman alıcı testler gerektirir. Ayrıca, ampirik anti-enfektif tedavinin sınırlı etkinliği, antibiyotik kötüye kullanımına katkıda bulunabilir. Hızlı yerinde değerlendirme (ROSE) slaytlarında mikrobiyal arka planın yorumlanmasındaki son gelişmeler, klinisyenlerin bronkoskopi yoluyla (örneğin, alveoler lavaj, mukozal fırçalama, doku klempi) derhal numune almalarını sağlayarak, temel mikrobiyal arka plan bilgilerini sağlayan yatak başı boyamayı ve yorumlamayı kolaylaştırmıştır. Sonuç olarak, bu, hedefe yönelik anti-enfeksiyon tedavisi ve kişiselleştirilmiş ilaç tedavisi planları geliştirmek için bir temel oluşturur. Hangi patojenlerin gerçek zamanlı olarak enfeksiyonlara neden olduğunu daha iyi anlayarak, doktorlar antibiyotik direncine katkıda bulunan gereksiz geniş spektrumlu antibiyotiklerden kaçınabilirler. Solunum tıbbı departmanlarında veya yoğun bakım ünitelerinde hızlı ve standartlaştırılmış bir M-ROSE iş akışı oluşturmak, doktorlara hastalar için doğru tedavi stratejileri formüle etmede büyük ölçüde yardımcı olacaktır ve bu da önemli klinik çıkarımlara sahiptir.
Giriş
Hızlı yerinde değerlendirme tekniği (ROSE), akciğer hastalığı prosedürleri alanında kullanılan oldukça verimli bir yöntemdir. Anında sitolojik analizi kolaylaştırarak gerçek zamanlı örnekleme ve tanısal müdahaleye olanak tanır1. Bu yenilikçi yaklaşım, doku örneğinin bir kısmının, bütünlüğünü koruyarak bir lam üzerine basılmasını içerir. ROSE'un en önemli avantajlarından biri, özel mikroskopi teknikleri aracılığıyla klinik bilgilerin hızlı bir şekilde yorumlanmasını kolaylaştırma kapasitesinde yatmaktadır. Bu, hücre morfolojisinin analizini, sınıflandırılmasını, nicelleştirilmesini, bileşen oranlarının belirlenmesini, düzenlemenin değerlendirilmesini, korelasyon analizini, arka planın değerlendirilmesini ve yabancı cisimlerin tanımlanmasını kapsar. ROSE, tüm bu verileri hastanın klinik bilgileriyle entegre ederek, örnekleme yeterliliğini değerlendirmede ve gerçek zamanlı girişimsel prosedür ve tekniklere rehberlik etmede çok önemli bir rol oynamaktadır2.
ROSE teknolojisinin bir yan kuruluşu olan M-ROSE teknolojisi, iyi huylu ve kötü huylu hücreleri ayırt etmek yerine öncelikle hedef lezyonların mikrobiyolojik arka planını elde etmeye odaklanır 3,4. Bir yandan M-ROSE, Aspergillus, Cryptococcus, Pneumocystis ve Candida5 gibi patojenlerin mikroskobik olarak tanımlanmasını sağlar. Öte yandan, solunum örneği kalitesinin değerlendirilmesinde, bulaşıcı hastalıkların bulaşıcı olmayan hastalıklardan ayırt edilmesinde, enfeksiyonun kontaminasyondan ayırt edilmesinde ve ayrıca enfeksiyon şiddetinin ve prognozunun değerlendirilmesinde önemli yol gösterici etkilere sahiptir 6,7. Örneğin, bir solunum örneği içinde, sızan enflamatuar hücrelerin yanı sıra aynı morfolojiyi sergileyen bakterilerin bir arada bulunması bir enfeksiyonu gösterir; Tersine, epitel hücrelerinin eşlik ettiği çok sayıda morfolojik olarak farklı bakterinin varlığı kontaminasyonu düşündürür. Klinik bilgileri kapsamlı bir şekilde analiz etme ve sonuçları tahmin etme kapasitesi, M-ROSE'u pulmoner hastalık prosedürlerinde paha biçilmez bir araç haline getirmektedir.
Sonuç olarak, ROSE, akciğer hastalıklarının teşhisinin etkinliğini ve hassasiyetini önemli ölçüde artıran çok önemli bir sitolojik taşıyıcı olarak hizmet eder. Çok yönlü yetenekleri, gerçek zamanlı örnekleme ve tanısal müdahale teknikleri aracılığıyla zamanında müdahale sağlayarak ve doğru teşhisi kolaylaştırarak hasta sonuçlarının iyileştirilmesine katkıda bulunur. Bununla birlikte, bu gelişmelerin nitelikli numunelerin elde edilmesine dayandığına dikkat etmek önemlidir. Burada, slayt hazırlama, boyama teknikleri ve yorumlama yönergelerini kapsayan standartlaştırılmış bir M-ROSE protokolü sunuyoruz. Bu protokol, klinisyenlerin doğru değerlendirme ve tedavi planları oluşturmaları için paha biçilmez bir referans görevi görürken, hedef numunelerin daha sonra ele alınmasına ilişkin karar vermeyi kolaylaştırır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Klinik araştırma, Chongqing Geleneksel Çin Tıbbı Hastanesi Onay Komitesi tarafından onaylanmıştır (No. 2022-ky-31). Tipik olguda Pneumocystis pnömonisi tanısı konulan bir hasta yer aldı ve hastadan bilgilendirilmiş onam alındı.
1. ROSE için ekipman ve malzeme gereksinimleri
- Ekipman: Bu protokolde kullanılan ekipman için Malzeme Tablosu dosyasına bakın.
NOT: Özel bir sitolojik mikroskop ve grafik görüntüleme sistemi kullanmak zorunludur (Şekil 1A). - Malzeme hazırlama (Malzeme Tablosuna bakınız).
- Steril hücre kültürü slaytları (güçlü hücre yapışması ile), emici kağıt, pudrasız lateks eldivenler, tek kullanımlık 2,5-5 mL şırınga iğneleri hazırlayın ve Diff Quik (DQ) boyama solüsyonlarının tamamını kolay kullanım için kapalı kapaklı cam boyama kavanozlarına yerleştirin (Şekil 1).
2. M-ROSE iş akışı
- Sitolojik slaytların hazırlanması
NOT: Slaytları hazırlamanın birçok yolu vardır ve aşağıda yaygın olarak kullanılan birkaç hazırlama yöntemi verilmiştir.- Slaytları yuvarlayın
NOT: Bu işlem sırasında doku numunesi kaybının minimum düzeyde olduğundan emin olun.- 2.5-5 mL kapasiteli tek kullanımlık bir şırınga iğnesi kullanarak doku parçacıklarını çıkarın (Şekil 2A).
- Steril sitoloji lamı üzerine, yaklaşık 1 cm çapında ve orta kalınlıkta dairesel bir alanı, lekeli ucun (güçlü hücre bağlanması sergileyen uç) iç kısımdan dış üçte bir kısmına yayın.
- Fırça slaytları
NOT: Bu yöntem, geleneksel hücre fırçaları, kirlilik önleyici hücre fırçaları veya ultra ince hücre fırçaları kullanılarak elde edilen numunelerin yanı sıra balgam ve viskoz vücut sıvıları gibi yarı sıvı numunelere uygulanabilir.- Fırça kafasını uzatın ve orta kalınlıkta yaklaşık 2 cm x 1 cm'lik dikdörtgen bir alan elde etmek için steril sitolojik cam slaytın (slayt güçlü hücre yapışma özelliklerine sahiptir) distal üçte birlik kısmına uygulayın.
- Sprey slaytları
- Delme iğnesini, sağlam hücre yapışması ile steril bir sitoloji slaytının lekeli ucunun üçte birine yerleştirin.
- Delici iğnenin ucuna hava basıncı uygulayın ve yaklaşık 1 cm çapında orta kalınlıkta dairesel bir alan oluşturacak şekilde iç taraftan dışa doğru sokun.
- Slaytları yuvarlayın
- Sitolojik slayt boyama
NOT: Dünya Sağlık Örgütü (WHO), ROSE sitolojik slaytının Diff'in5 boyası kullanılarak hızlı bir şekilde boyanmasını önermektedir. Diferansiyel boyası tekrar kullanılabilir ancak birçok kez tekrarlanamaz. Tortu varsa, kullanımdan sonra süzülmelidir. Çok derin boyama, tercihen artık boyanmayan metanol veya alkol ile uygun şekilde renkten arındırılabilir. Boyama çok derin veya çok sığ ise, boyama süresi veya çalışma sıvısı konsantrasyonu ayarlanmalıdır; pH değerinin boyama üzerinde belirli bir etkisi vardır ve lam temiz olmalı ve asit ve alkali kirliliğinden arındırılmış olmalıdır. Hem Diff A çözeltisi hem de Diff B çözeltisi uçucudur ve kullanımdan sonra mühürlenmeli ve saklanmalıdır.- Slaytı 10-30 saniye boyunca Diff A çözeltisine batırın (Şekil 2B), ardından fazla Diff A çözeltisini çıkarmak için PBS boya banyosunda durulayın ve kalan tamponu nazikçe sallayın (Şekil 2C).
- Ardından, slaytı 20-40 saniye boyunca Diff B çözeltisine daldırın (Şekil 2E).
- Son olarak, su boyama tankındaki sürgüyü temizleyin (Şekil 2F), sürgünün kalan sıvısını emici kağıtla kurulayın ve silin (Şekil 2D) ve boyamayı bitirin.
NOT: M-ROSE, patojenik mikroorganizmaların doğrudan görüntülenmesini sağlar ve solunum örneği kalitesinin değerlendirilmesini kolaylaştırır, enfeksiyon şiddeti ve prognozunun değerlendirilmesi için yol gösterici öneme sahip olan enfeksiyon ve kontaminasyonun yanı sıra enfeksiyon ve enfeksiyon arasında ayrım yapılmasını sağlar. Tartışma bölümü, herhangi bir deneysel prosedür içermediği için bu yönü kapsayacaktır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Tipik bir vakada, 63 yaşında bir erkek öksürük, ateş ve göğüs ağrısı ile hastaneye başvurdu. Hastaya daha önce proteinüri ve ödem ile karakterize nefrotik sendrom teşhisi kondu ve uzun süre prednizon ve takrolimus ile tedavi gördü. İlk laboratuvar bulgularında beyaz kan hücresi sayısı 10.49 x 109/L, nötrofil sayısı 8.87 x 109/L, tam kan C-reaktif protein ve (1-3)-β-D-glukan konsantrasyonları 155.81 mg/L ve 249.7 pg/mL olarak bulunmuştur. Göğüs bilgisayarlı tomografi (BT) taramasında yaygın, bilatera...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Girişimsel pulmonoloji, modern solunum yolu hastalıklarının değerli bir dalıdır; Özellikle, akciğer hastalıklarının tanısında yaygın olarak kullanılmaktadır 8,9. Son yıllarda, pulmoner malign tümörlerin prevalansının artması, alt solunum yollarında ilaca dirençli patojen enfeksiyonlarının daha fazla ortaya çıkması ve şaşırtıcı ve kritik solunum yolu hastalıklarının tanısı için talepte bulunulması nedeniyle tanısal girişimsel pulmonoloji gelişmektedir 10,11,12
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması bildirmemiştir.
Teşekkürler
Mali destek için Chongqing Bilimsel Araştırma kurumunun performans teşvik ve rehberlik projesini (jxyn-2021-1-15 ve jxyn-2021-2-6) takdir ediyoruz.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Sitolojik mikroskop | Olympus Corporation | CX43 | |
| Diff Quik (DQ) boyama çözümleri | Besso Biotechnology Co. LTD | G1541 | |
| Tek kullanımlık 2.5-5 mL şırınga | iğneleri Shandong Zhu İlaç Grubu | 20183150304 | |
| Pudrasız lateks eldiven | Henan Yadu Industrial Co., LTD | 20182140728 | |
| Steril hücre kültür slaytları | Jinan Preret sanayi ve ticaret A.Ş., LTD | 7101 |
Kaynaklar
- Zhang, S., et al. Diagnostic value of endoscopic ultrasound-guided fine needle aspiration with rapid on-site evaluation performed by endoscopists in solid pancreatic lesions: A prospective, randomized controlled trial. J Gastroenterol Hepatol. 37 (10), 1975-1982 (2022).
- Bruno, P., et al. Efficacy and cost effectiveness of rapid on site examination (ROSE) in management of patients with mediastinal lymphadenopathies. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 17 (11), 1517-1522 (2013).
- Li, T., et al. Microbiology rapid on-site evaluation: a better method for Mucoid Pseudomonas Aeruginosa diagnosis in bronchiectasic patients. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 26 (5), 1738-1742 (2022).
- Tao, Y., et al. Application of microbiological rapid on-site evaluation in respiratory intensive care units: a retrospective study. Ann Transl Med. 10 (1), 7(2022).
- Yan, P., et al. The value of microbiology rapid on-site evaluation of sepsis caused by pulmonary infection. Eur Rev Med Pharmacol Sci. 27 (12), 5862-5868 (2023).
- Muri, R., Trippel, M., Borner, U., Weidner, S., Trepp, R. The impact of rapid on-site evaluation on the quality and diagnostic value of thyroid nodule fine-needle aspirations. Thyroid. 32 (6), 667-674 (2022).
- Wang, Z., Shi, Y. Application of rapid on-site evaluation in contemporary pediatric interventional respiratory diseases. Chinese Journal of Practical Pediatrics. 12, 470-475 (2019).
- Shah, P. L., Herth, F. J. F. Progress in interventional pulmonology. Respiration. 95 (5), 287-288 (2018).
- Hsia, D., Musani, A. I. Interventional pulmonology. Med Clin North Am. 95 (6), 1095-1114 (2011).
- Moore, A. J., Mercer, R. M., Musani, A. I. Advances in interventional pulmonology. Clin Chest Med. 39 (1), 271-280 (2018).
- Majid, A., Fernandez-Bussy, S., Folch, E. Interventional pulmonology and solitary pulmonary nodule. Arch Bronconeumol. 54 (10), 497-498 (2018).
- Ali, M. S., Sorathia, L. Palliative care and interventional pulmonology. Clin Chest Med. 39 (1), 57-64 (2018).
- Czarnecka, K., Yasufuku, K. Interventional pulmonology: focus on pulmonary diagnostics. Respirology. 18 (1), 47-60 (2013).
- Schacht, M. J., et al. Endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration: performance of biomedical scientists on rapid on-site evaluation and preliminary diagnosis. Cytopathology. 27 (5), 344-350 (2016).
- Pearson, L., et al. Rapid on-site evaluation of fine-needle aspiration by non-cytopathologists: A systematic review and meta-analysis of diagnostic accuracy studies for adequacy assessment. Acta Cytol. 62 (4), 244-252 (2018).
- Arimura, K., et al. Cryobiopsy with endobronchial ultrasonography using a guide sheath for peripheral pulmonary lesions and DNA analysis by next generation sequencing and rapid on-site evaluation. Respir Investig. 57 (2), 150-156 (2019).
- Gianella, P., et al. Utility of rapid on-site cytologic evaluation during endobronchial ultrasound-guided transbronchial needle aspiration in malignant and nonmalignant disease. Acta Cytol. 62 (5-6), 380-385 (2018).
- Natella, V., Cozzolino, I., Sosa Fernandez, L. V., Vigliar, E. Lymph nodes fine needle cytology in the diagnosis of infectious diseases: clinical settings. Infez Med. 20, 12-15 (2012).
- Baughman, R. P., Spencer, R. E., Kleykamp, B. O., Rashkin, M. C., Douthit, M. M. Ventilator associated pneumonia: quality of nonbronchoscopic bronchoalveolar lavage sample affects diagnostic yield. Eur Respir J. 16 (6), 1152-1157 (2000).
- Petrone, M. C., et al. Does cytotechnician training influence the accuracy of EUS-guided fine-needle aspiration of pancreatic masses. Dig Liver Dis. 44 (4), 311-314 (2012).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
