Burada, sıçan femoral diyafiz dokusunda kutu boşluğu defekti oluşturmak için bir protokol sunuyoruz. Bu model, biyomekanik stres altında biyomalzeme performansını değerlendirebilir ve intramembranöz osteogenez ile ilgili kemik rejenerasyon mekanizmalarını keşfedebilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Sıçan Femora'nın Kortikal Kemiğinde Bir Kutu Boşluğu Defekti Modeli Oluşturma
Bu makalede
Özet
Özet
Ciddi kemik kusurları veya karmaşık kırıklar, kaynamama veya yetersiz kemik iyileşmesi gibi ciddi komplikasyonlara neden olabilir. Hücrelerin, yapı iskelelerinin ve sitokinlerin uygulanmasını içeren doku mühendisliği, kemik rejenerasyonu için umut verici bir çözüm olarak kabul edilir. Sonuç olarak, kemik kusurlarını simüle eden çeşitli hayvan modelleri, kemik iyileşmesi için doku mühendisliğinin terapötik potansiyelini keşfetmede çok önemli bir rol oynamaktadır. Bu çalışmada, sıçanların orta uyluk kemiğinde, kemik iyileşmesini teşvik etmede biyomalzemelerin işlevini değerlendirmek için ideal bir model olarak hizmet edebilecek kutu şeklinde bir kortikal kemik defekti modeli oluşturduk. Bu kutu şeklindeki kortikal kemik defekti, oral düşük hızlı bir el aleti kullanılarak delindi ve bir torna iğnesi ile şekillendirildi. Kutu boşluklu kortikal kemik defektinin başarılı bir şekilde kurulduğunu doğrulamak için ameliyat sonrası mikro-BT analizi hemen yapıldı. Sıçanların ameliyat edilen tarafındaki femurlar daha sonra ameliyattan sonra birden fazla zaman noktasında (0 gün, 2 hafta, 4 hafta ve 6 hafta) toplandı. Her örneğin defekt alanının iyileşme süreci mikro-BT, hematoksilen ve eozin (H&E) boyaması ve Masson trikrom boyaması kullanılarak değerlendirildi. Bu sonuçlar, intramembranöz ossifikasyon ile tutarlı bir iyileşme paterni gösterdi ve iyileşme esasen 6 hafta boyunca tamamlandı. Bu hayvan modelinin iyileşme sürecinin sınıflandırılması, kemik dokusu defektinin iyileşmesi sırasında intramembranöz ossifikasyonu hedefleyen yeni biyomateryallerin ve ilaçların araştırılması için etkili bir in vivo yöntem sağlar.
Giriş
Kırık ve kusurlu kemik sıklıkla travma, tümörler, iltihaplanma ve konjenital malformasyonlardan kaynaklanır 1,2. Genç sağlıklı bireylerde kemik dokusu tipik olarak güçlü rejeneratif yetenekleresahip olsa da 3, kritik bir boyutu aşan kusurlar veya sistemik hastalıklara (örneğin diyabet, osteoporoz ve enfeksiyonlar) bağlı iyileşme engelleri yine de kemik süreksizliği veya iyileşme bozukluğu gibi komplikasyonlara yol açabilir4. Bu klinik zorluğun üstesinden gelmek için, kemik grefti veya biyomateryaller, ciddi şekilde kusurlu kemiği değiştirmek veya büyük kemik segm....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışmadaki tüm hayvan prosedürleri, Sichuan Üniversitesi Batı Çin Stomatoloji Okulu Etik Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı (WCHSIRB-D-2021-597). Bu çalışma için Sprague-Dawley cinsi sıçanlar (erkek, vücut ağırlığı 300 g) kullanıldı.
1. Ameliyat öncesi hazırlık
- Enstrüman hazırlığı
- Bu çalışmada kullanılan cerrahi aletler için Şekil 1A'ya bakın: elektrikli tıraş makinesi, doku makası, oftalmik makas, oftalmik forseps, tek kullanımlık neşter, periosteal ayırıcı, oral düşük hızlı el aleti, oral prob, tek kullanımlık irrigasyon vaku, iğne tutucu, 3.0 sütür.
- Oral bir pro....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu protokolde, delme işlemi ile 4,5 mm x 1,5 mm boyutlarında bir sıçan femur kutu boşluğu defekt modelini başarıyla kuruyoruz. İyileşme sürecini analiz etmek için, sıçanlarda femoral travmanın iyileşme sürecinde endokondral ossifikasyon, intramembranöz ossifikasyon ve kemik yeniden şekillenmesinin kilit zaman noktaları olan ameliyattan 0 gün, 2 hafta, 4 hafta ve 6 hafta sonra ameliyat edilen taraftaki femur dokusunu topladık2. Ameliyat sonrası 0. günde, mikro-BT bi.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Klinik öncesi hayvan modelleri, kemik iyileşmesini ve biyomalzemelerin kemik rejenerasyonu üzerindeki etkisini incelemek için hayati öneme sahiptir. Bu protokol, klinik kemik rejenerasyonu ile ilişkili intramembranöz kemik oluşum sürecini kopyalayan bir femur kutu boşluğu defekt modelini göstermektedir. Defekt alanı, önceden işaretlenmiş bir oral prob kullanılarak intraoperatif olarak standardize edildi. Mikro-BT ve histopatolojik boyama sonuçları, kalınlaşmış periost ve yeni trabeküler kemik oluşumu ile 6 hafta boyunca .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Tüm orijinal veriler ve görüntüler bu belgeye dahil edilmiştir. Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder
Teşekkürler
Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı 82101000 (HW), U21A20368 (LY) ve 82100982 (FL) tarafından finanse edildi ve Sichuan Bilim ve Teknoloji Programı 2023NSFSC1499 (HW) tarafından desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1,2 mm yavaş hızlı bilyalı matkap | Dreybird Medical Equipment Co., Ltd. | RA3-012 | Kutu boşluğu kusurlarının hazırlanması için |
| 3.0 sütür | Chengdu Shifeng Co., Ltd. | Yok Yaraları | dikmek için |
| %4 paraformaldehit | Biosharp | BL539A | Femoral örnekleri düzeltmek için |
| Pamuk topları | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | 20120047 | Cilt sterilizasyonu ve cerrahi alanın temizliği için |
| Pamuk çubukları | Lakong Medical Devices Co., Ltd. | M6500R | Cilt dezenfeksiyonu için |
| Diş teknisyeni taşlama makinesi | Marathon | N3-140232 | Kutu boşluğu kusurlarının hazırlanması için |
| Tek kullanımlık neşter | Hangzhou Huawei Medical Supplies Co., Ltd. | 20100227 | Cilt kesileri oluşturmak ve kas dokusunu keskin bir şekilde ayırmak için |
| Elektrikli tıraş makinesi | JASE | BM320210 | Cerrahi alandan saç dokusunun çıkarılması |
| Hematoksilen ve Eozin Leke kiti | Biosharp | C1005 | Örneklerin histolojik analizi için |
| Masson' s Trikrom Leke Kiti | Solarbio | G1340 | Örneklerin histolojik analizi için Micro |
| CT | Scanco medical ag | & micro; CT 45 | Femoral örneklerdeki kusurların iyileşmesini analiz etmek için |
| İğne tutucu | Chengdu Shifeng Co., Ltd. | Yok | Sütür tutma iğneleri için |
| Olympus Research Grade Tüm Slayt Tarama Sistemi VS200 | Chengdu Bilgi Teknolojisi A.Ş. | VS200 | HE boyama ve Masson boyama sonuçlarını analiz etmek için |
| Oftalmik forseps | Chengdu Shifeng Co., Ltd. | Yok Cildi | , kas dokusunu sıkıştırmak için |
| Oftalmik makas | Chengdu Shifeng Co., Ltd. | Yok Deri | kesisi yaklaşımı oluşturmak için |
| Oral düşük hızlı el aleti | Maraton | Y221101003 | Kutu boşluğu kusurlarının hazırlanması için |
| Oral prob | Shanghai Sangda Medical Insurance Co., Ltd. | 20000143 | Kusurların çapını ölçmek için |
| Periosteal ayırıcı | Chengdu Shifeng Co., Ltd. | Yok Kas | dokusunun künt ayrılması için |
| Sprague– Dawley sıçanları | Byrness Weil Biotech Ltd | Yok | Femur kemik kutulu kaviter defekt kurulması için |
| Doku makası | Chengdu Shifeng Co., Ltd. | Yok Deri | kesisi yaklaşımı oluşturmak için |
Kaynaklar
- Einhorn, T. A., Gerstenfeld, L. C. Fracture healing: mechanisms and interventions. Nat Rev Rheumatol. 11 (1), 45-54 (2015).
- Claes, L., Recknagel, S., Ignatius, A. Fracture healing under healthy and inflammatory conditions. Nat Rev Rheumatol. 8 (3), 133-143 (2012). <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
