Makale, gastropod Crepidula fornicata'nın larva kültürü için yöntemleri küçük hacimli laboratuvar ölçekli bir sistemde ve sahada konuşlandırılabilen bir ortam-deniz suyu mezokozm sisteminde sunmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Terlik Limpeti (Crepidula fornicata) Larvalarının Laboratuvar ve Saha Kültürü
Bu makalede
Özet
Özet
Calyptraeid gastropod yumuşakçası, Crepidula fornicata, larva gelişim biyolojisi, fizyolojisi ve ekolojisi çalışmaları için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu türün kuluçkadaki veliger larvaları, erginler tarafından doğal olarak salındıktan sonra bir elek üzerine sifonlanarak toplanmış, 200/L yoğunlukta kültüre dağıtılmış ve 1 x 105 hücre/mL'de Isochrysis galbana (suş T-ISO) ile beslenmiştir. Ortam havasına veya tanımlanmış atmosferik gaz karışımlarına dengeleme için tasarlanmış havalandırmalı 800 mL kültürlerde yetiştirilen kardeş larvalar için kabuk büyümesi ve metamorfoz için yeterlilik kazanılması belgelenmiştir. Bu laboratuvar kültürü koşullarının aksine; Üreme yetişkinlerinden oluşan bir tarla popülasyonunda bulunan 15 L'lik akışlı bir ortam deniz suyu mezokozmunda yetiştirilen larvalar için de büyüme ve yeterlilik verileri toplanmıştır. Laboratuvar kültürlerinde metamorfik yeterliliğin büyüme oranları ve zamanlaması, daha önce yayınlanmış çalışmalarda bildirilenlere benzerdi. Mezokozm tarlasında yetiştirilen larvalar, herhangi bir laboratuvar çalışması için bildirilenden çok daha hızlı büyüdü ve daha erken metamorfoza uğradı. Birlikte, bu yöntemler, laboratuvarda önceden belirlenmiş kontrollü koşullar altında ve tarlada doğal olarak oluşan koşullar altında larva gelişimini araştırmak için uygundur.
Giriş
Terlik limpeti, Crepidula fornicata (Gastropoda: Calyptraeidae), gelişimsel bir model olarak faydası ve istilacı bir tür olarak yaygın etkileri nedeniyle güncel ve tarihsel araştırma literatüründe iyi temsil edilmektedir. Deneysel embriyolojinin klasik çağındaspiral gelişimin temel bir örneği olarak hizmet etti 1 ve lophotrochozoan erken gelişim 2,3 mekanizmalarını incelemek için modern görüntüleme ve genomik araçların uygulanmasıyla yeniden bir ilgi doğuşu yaşadı. Yaşam tarihinin diğer ucunda, diğer araştırmalar, bu ekosistem mühendisinin yetişkin popülasyonlarının, doğu Kuzey....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. C. fornicata'nın larva kültürlerinin kurulması ve sürdürülmesi için rutin manevralar
NOT: Bu yöntem, kuluçkalık veliger larvalarını yeni salmış yetişkin C. fornicata içeren bir galon (3,8 L) kavanoz deniz suyu ile başlar. Yetişkinler sahada toplanabilir veya Malzeme Tablosunda verilen bir tedarikçiden temin edilebilir. Yetişkinler, çiftleşme yığınlarında yaşayan ve yığının dibinde sapsız kuluçka dişileri olan protandrous hermafroditlerdir. Yetişkin yığınlarını parçalamayın. Üremenin mevsimselliği ve yetişkinlerin mevsim dışı yumurtlama için şartlandırılma yöntemleri daha önce tanımlanmışt....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Larva büyümesi ve metamorfoz için yeterlilik kazanımı, her biri 160 larva içeren, tek bir yumurta kütlesinden yumurtadan çıkan ve 1 x 105 hücre / mL yoğunlukta Isochrysis galbana ile beslenen bir kardeş larva grubundan türetilen 800 mL ventilasyonlu kültürün 4 eşzamanlı kopyasında ölçülmüştür. PH 7.9-8.0, sıcaklık 20-21 °C ve tuzluluk 30-31 ppt idi. Büyüme ve metamorfoz, Buzzards Bay, MA, ABD'de laboratuvar kültürleriyle benzer pH, sıcaklık ve tuzluluk koşulları altında konuşlandırılan 600 larva içere.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
C. fornicata larvalarının kültüre alınması diğer planktotrofik deniz larvalarına kıyasla nispeten daha kolay olmasına rağmen, iyi kültür uygulamalarının temellerine dikkat etmek hala önemlidir17,19. Sağlıklı larvalar yumurtadan çıktıktan hemen sonra beslenmeye başlamalıdır. Bu, yumurtadan çıktıktan sonraki gün, transillüminasyonlu bir diseksiyon mikroskobu kullanarak, alg hücreleriyle dolu bağırsaklarını gözlemleyerek kolayca doğrulanabilir. Sağlıklı lar.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Bildirilecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Düşük hacimli ventilasyonlu kültür sisteminin ilk gelişimi, kısmen Ulusal Bilim Vakfı (CRI-OA-1416690'dan Dickinson College'a) tarafından desteklenmiştir. Dr. Lauren Mullineaux, bu sistem için sunulan verilerin toplandığı Woods Hole Oşinografi Enstitüsü'nde laboratuvar olanakları sağladı (Şekil 4).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Kova, Polietilen, 7 galon | ABD Plastik | 16916 | mesocosm |
| Crepidula fornicata | Deniz Biyolojisi Laboratuvarı, Deniz Kaynakları Merkezi | 760 | yetişkin anaç |
| Hotmelt yapıştırıcı, Infinity Supertac 500 | Hotmelt.com | INFINITY IM-SUPERTAC-500-12-1LB | polietilen yapıştırmak için iyi |
| Kavanoz, cam, 32 oz, polipropilen kapaklı | 800 mL ventilasyonlu kültürler için | Uline | S-19316P-W |
| Nitex mesh, 236 & m | Dinamik Aqua Tedarik Ltd. | Mezokozm için | NTX236-136 |
| Somun, altıgen, naylon, 10-32 iplik | dikenlerini sabitlemek için | Home Depot | 1004554441 |
| Perçinler, naylon, panjur, 15/64" çap, 5/32"-5/16" kavrama aralığı, 8'lik paket | NAPA otomobil parçaları | BK 6652844 | Mezokozm Boru dikeni başına 4 paket gerekir |
| /8" x 10-32 diş | US Plastic | 65593 | Kültür kavanozu |
| başına 2 adet gereklidirBoru, polietilen, 2,08 mm OD | Fisher Scientific | 14-170-11G | kültür kavanozu içindeki gaz akışını havalandırmak için |
| Boru, Tygon, 1/8 "x3/16" x1/32 " | US Plastic | 57810 | kültürleri havalandırmak için dikenlere uyar |
Kaynaklar
- Conklin, E. G. The embryology of Crepidula: a contribution to the cell lineage and early development of some marine gastropods. Gasteropods. , (1897).
- Henry, J. J., Collin, R., Perry, K. J. The slipper snail, Crepidula: an emerging lophotrochozoan mod....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
