Bu protokol, fare ortotopik karaciğer transplantasyonunda manşet tekniği kullanılarak damar rekonstrüksiyonu için teknik bilgi sağlar.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Fare Ortotopik Karaciğer Transplantasyonunda Cuff Tekniği ile Vasküler Rekonstrüksiyon
Bu makalede
Özet
Özet
Fare ortotopik karaciğer transplantasyonu, karaciğer iskemisi ve reperfüzyon hasarının altında yatan mekanizmaları araştırmak için etkili bir metodolojidir. Bununla birlikte, teknik zorluklar, bu değerli deneysel modelin kullanılmasının ve bu becerilerin gelecek nesillere aktarılmasının önünde bir engel teşkil etmektedir. Bu prosedürün en zorlu yönü, portal ven (PV), infrahepatik inferior vena kava (IHIVC) ve suprahepatik inferior vena kava dahil olmak üzere vasküler rekonstrüksiyondur. Sütürler yerine plastik manşetlerin kullanılması, daha düzgün PV ve IHIVC rekonstrüksiyonuna izin verir. Greft damarının ucuna intravenöz bir kateterden yapılmış bir manşet takılarak ve manşetin alıcı damara yerleştirilmesiyle damarlar yeniden yapılandırılır. En önemli iki husus, geminin iç lümenini düzgün bir şekilde görselleştirmek ve aşırı güç kullanımından kaçınmaktır. Amacımız, alıcı cerrahisinde manşet tekniği kullanılarak yapılan vasküler rekonstrüksiyonlara teknik bir bakış sağlamaktır. Manşet tekniği için bu teknik ipuçlarının, mikro cerrahların vasküler rekonstrüksiyonu kolaylaştırmasına ve araştırmalarını ilerletmesine yardımcı olması bekleniyor.
Giriş
Fare ortotopik karaciğer nakli (MOLT) ilk olarak 1991 yılında bildirilen etkili bir deneysel yöntemdir1. Genetik olarak modifiye edilmiş fareler ve çeşitli araştırma reaktifleri kullanan bu deneysel model, sıcak ve soğuk iskemi ve reperfüzyon yaralanmalarının araştırılmasında çok önemli bir rol oynamıştır. Bununla birlikte, modelin yüksek teknik karmaşıklığı, karaciğer nakli için temel tıbbın geliştirilmesini engellemiştir2. MOLT üç ana adımı içerir: (1) karaciğerin donör fareden alınması, (2) arka masa cerrahisi ve (3) karaciğerin alıcıya implantasyonu. Bu alıcı prosedürler arasında vasküler anastomoz en büyük zorluğu o....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Deney protokolü, Kyoto Üniversitesi Hayvan Deneyleri Komitesi tarafından onaylandı. Çalışmada, ticari bir kaynaktan elde edilen, 10 haftadan büyük ve 25 g ile 30 g arasında ağırlığa sahip C57BL / 6 fareleri kullanıldı (bkz. Tüm hayvanlar% 2.5 izofluran ile uyuşturuldu (kurumsal olarak onaylanmış protokoller izlenerek), belirli patojen içermeyen koşullar altında tutuldu ve tüm deneysel prosedürler Kyoto Üniversitesi'nin Hayvan Deneyleri Yönetmeliğine uygun olarak yürütüldü. Çalışma için kullanılan uygun araçlar Malzeme Tablosunda listelenmiştir ve Şekil 1 ve Şekil 2'de gösteri....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
PV rekonstrüksiyonu, portal venin klempini açtıktan sonra kıvrımlılık olmadığında ve karaciğer düzgün bir şekilde perfüze edildiğinde başarılıdır. Anhepatik süre 20 dakikanın altında olmalıdır, çünkü 25 dakikayı aşan anhepatik zamanlar fare ölüm riskini artırır. Greftten kan yetersizliği yoksa IHIVC rekonstrüksiyonu başarılı kabul edilir.
Greftin organ koruma solüsyonu kullanılarak 1 saat soğuk sıcaklıklarda saklanması, reperfüzyondan 6 saat sonra yaklaşık 2.000 U/L'lik bir serum alanin aminot.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Vasküler rekonstrüksiyonu öğrenmek, başarılı MOLT'a ulaşmanın en zorlu yönüdür. Manşetin kalitesi, farelerin küçük boyutu göz önüne alındığında, rekonstrüksiyonun zorluğunu önemli ölçüde etkiler5. Bu makale, manşet hazırlığı, takılması ve rekonstrüksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar.
Manşet hazırlığı ve bağlantı 2,5 ile ilgili önceki raporlardan büyük farklılıklar olmasa da, bazı küçük noktalar dikkate al.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Hiçbir yazarın açıklanacak herhangi bir çıkar çatışması yoktur.
Teşekkürler
Bu çalışma, 2022 JST temel araştırması (Japon Organ Nakli Derneği) tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 16 G intravenöz kateter | TERUMO | SR-FF2032 | IHIVC manşet |
| 20 G intravenöz kateter | TERUMO | SR-FF1651 | PV manşet |
| 8-0 örgü ipek | Natsume Seisakusho | CR9-80B2 | 8-0 ipek |
| Belzer UW Soğuk Hava Deposu Solüsyonu | Astellas | Organ koruma sıvısı | |
| Bulldog kelepçesi | B BRAUN | FB329R | Bulldog kelepçesi |
| C57BL / 6 fare | Oriental Bio Service | ||
| İzofluran inhalasyon solüsyonu | Viatris | Anesthesic | |
| Mikro Körelmiş Uçlar 0,1 mm x 0,06 mm | FST | 11253-20 | Düz mikroforseps |
| Kilitli Mikro Serrefine Kelepçe Aplikatörü | FST | 18056-14 | Damar klipsi aplikatörü |
| Mikro Serrefines | FST | 18055-4 | Gemi klipsi |
| No.11 Yedek Bıçaklar | FEATHER Emniyetli Tıraş Bıçağı | 11 | Bıçaklı |
| Oftalmik makas, yuvarlak saplı | B BRAUN | FD103R Mikromakas | |
| Plastik dikdörtgen şekilli kap | Daiso | 10 cm uzunluğunda, 15 cm genişliğinde ve 6 cm yüksekliğinde | |
| SuperGrip İpuçları | F.S.T | 00649-11 | Kavisli mikrokuvvet |
| SZX7 | Olympus | SZX7 | Mikroskop |
| Mengenesi | Niigataseiki | 00505351 | Pean forsepslerini masaya sabitlemek için mekanik bir alet |
Kaynaklar
- Qian, S. G., Fung, J. J., Demetris, A. V., Ildstad, S. T., Starzl, T. E. Orthotopic liver transplantation in the mouse. Transplantation. 52 (3), 562-564 (1991).
- Yokota, S., et al. Orthotopic mouse liver transplantation to study liver biology and allograft tolerance. Na....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
