Yöntem makalesi

Tibet Tıbbında Bileşenlerin Tanımlanması için Moleküler Ağ ile Birleştirilmiş 2D-HPLC-MS Teknolojisi Aconitum sarkacı

DOI:

10.3791/66239

⸱

8 Aralık 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Ethnic Medicine Academic Heritage Innovation Research Center, Meishan Hospital, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2State Key Laboratory of Southwestern Chinese Medicine Resources, Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Key Laboratory of Chemical Biology & Traditional Chinese Medicine Research, Ministry of Education, 4Key Laboratory of Phytochemical R&D of Hunan Province, Hunan Normal University

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Tibet şifalı bitkisi Aconitum sarkacı Busch'un (APB) karmaşık kimyasal bileşimini çözmek için moleküler ağ ile birlikte iki boyutlu yüksek performanslı sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi (2D-HPLC-MS) teknolojisini kullanmaktadır. Makale, bitkisel ilaçların karmaşık kimyasal bileşenlerinin sistematik olarak araştırılması ve tanımlanması için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada, Tibet şifalı bitkisi APB'nin karmaşık kimyasal bileşimini çözmek için moleküler ağ ile birlikte 2D-HPLC-MS teknolojisini kullanan kapsamlı bir yaklaşım kullanılmıştır. 2D-HPLC'nin uygulanmasıyla, karmaşık karışımların gelişmiş bir şekilde ayrılması sağlandı ve bu da sonraki analizler için tek tek bileşiklerin izolasyonunu sağladı. Moleküler ağ yaklaşımı, bu bileşikler arasındaki yapısal ilişkilerin aydınlatılmasına daha fazla yardımcı oldu ve potansiyel biyoaktif moleküllerin belirlenmesine katkıda bulundu. Bu entegre strateji, tesis içinde bulunan çok çeşitli kimyasal bileşenleri verimli bir şekilde tanımladı. Bulgular, diğerlerinin yanı sıra alkaloidler de dahil olmak üzere APB içinde çeşitli kimyasal bileşenler ortaya çıkardı. Bu araştırma, yalnızca bu geleneksel Tibet tıbbının fitokimyasal profilinin anlaşılmasını ilerletmekle kalmıyor, aynı zamanda potansiyel terapötik özellikleri hakkında değerli bilgiler sağlıyor. 2D-HPLC-MS ve moleküler ağın entegrasyonu, bitkisel ilaçlardaki karmaşık kimyasal bileşimleri sistematik olarak araştırmak ve tanımlamak için güçlü bir araç olduğunu kanıtlıyor ve doğal ürün keşfi alanında daha fazla araştırma ve geliştirmenin önünü açıyor.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tibet tıbbı, Tibet tıbbi uygulamalarının ilkelerine bağlı kalarak geleneksel Çin tıbbının ayrılmaz bir parçasıdır ve hastalıkların önlenmesi ve tedavisi için kullanılır1. Bununla birlikte, Tibet bitkisel tıbbı, içerikte önemli dalgalanmalarla karakterize edilen karmaşık bitki kimyasal bileşenleri içerir. Temel biyoaktif elementlerin sınırlı anlaşılması, Tibet tıbbının modernizasyonunda bir darboğaz haline gelmiştir2. Kromatografinin güçlü ayırma gücünü kütle spektrometresinin (MS) yüksek hassasiyeti ile birleştiren sıvı kromatografisi-kütle spektrometresi (LC-MS) uygulaması, doğal tıp analizinde yaygın olarak kullanılmaktadır3. Bununla birlikte, tek bir ayırma mekanizmasının sınırlandırılması nedeniyle, oldukça benzer yapılara sahip bileşenler, tek boyutlu sıvı kromatografisi ayırmada koelüte olma eğilimindedir. Sonraki kütle spektrometrik analizinde, yüksek bolluklu bileşenlerin neden olduğu iyon baskılanması nedeniyle düşük bolluklu ko-elüte bileşenlerin tespit edilmesi zordur4.

İki boyutlu yüksek performanslı sıvı kromatografisi anlamına gelen 2D-HPLC, bir çift sütun kullanarak farklı ayırma mekanizmalarını uyumlu bir şekilde birleştiren yeni bir kromatografik yöntemi temsil eder. Bu, normal faz kromatografisinin ters fazlı sıvı kromatografisi ile füzyonunu veya değişimini ve ters fazlı sıvı kromatografisi5 ile hidrofilik etkileşim sıvı kromatografisini içerir. Bu tamamlayıcı kromatografik özelliklerin birleştirilmesiyle, karmaşık numune matrislerinin6 neden olduğu zorlukların etkin bir şekilde ele alındığı gelişmiş ayırma kabiliyeti elde edilir. Ayrıca, iki boyutlu kromatografiyi MS ile birleştirerek, 2D-HPLC'nin güçlü ayırma yeteneği ve MS'in yüksek hassasiyetli algılama yeteneği tamamen entegre edilebilir ve karmaşık ilaç sistemlerinin ve bunların temel bileşenlerinin incelenmesi için destek sağlar 7,8,9.

Tibet tıbbı genellikle, aktif bileşenlerin tipik olarak karmaşık bileşimlerde ve minimum konsantrasyonlarda bulunduğu çok yönlü bir dizi bileşen ve işlevsellik içerir. Sağlam bir ayırma sistemi olarak 2D-LC'yi ve son derece hassas bir dedektör olarak MS'i entegre ederek, karmaşık numunelerin ayırma ve tanımlama açısından ortaya çıkardığı zorluklar daha etkili bir şekilde ele alınabilir 10,11,12. Bu birleşme, Tibet tıbbının kimyasal bileşiminin araştırılmasına önemli ölçüde katkıda bulunur.

Geleneksel LC-MS veya 2D-LC-MS olup olmadığına bakılmaksızın, çok miktarda bilgi elde edilebilir. Bununla birlikte, bu büyük miktarda bilgiden karmaşık sistem bileşenlerinin yapısal bilgilerini çıkarmak her zaman önemli bir zorluk olmuştur. Bu nedenle, araştırmacılar MS verilerini taramak ve madenciliği yapmak için çeşitli yöntemler geliştirdiler. Global Natural Products Social Molecular Networking (GNPS), 2D-LC-MS kütle spektrometresi verilerinin yüklenebildiği bir MS/MS veri organizasyonu ve görselleştirme platformudur13. Her spektrum bir vektör olarak kabul edilir ve kosinüs benzerliği kullanılarak diğer tüm spektrumlarla karşılaştırılır. İki spektrum arasındaki benzerlik bir eşiği aştığında, bir moleküler ağa (MN) bağlanırlar. Bu, bilinen bileşiklerin hızlı bir şekilde tanımlanması ve çeşitli bilinmeyen doğal ürünlerin belirlenmesi için kullanılabilir14.

Tibet tıbbının genellikle birden fazla işlevi vardır, ancak karmaşık bileşimi ve önemli konsantrasyon farklılıkları, işlev ve maddi temel arasındaki ilişkiyi etkili bir şekilde açıklamayı zorlaştırır15. Tibet tıbbının derinlemesine incelenmesi, mümkün olduğu kadar çok bileşenin sistematik karakterizasyonunu gerektirir. Bu çalışma çerçevesinde, 2D-HPLC-MS teknolojisi ve MN teknolojisini kullanarak Tibet tıbbının karmaşık kimyasal bileşenlerini sistematik olarak incelemenin stratejisini ve sürecini göstermek için Tibet tıbbında APB'yi araştırma nesnesi olarak kullanmayı amaçlıyoruz. 2D kromatografik sistemin yapımında, APB16'nın karmaşık bileşenlerinin daha etkili bir şekilde ayrılmasını sağlamak için ters fazlı sıvı kromatografisi ve hidrofilik etkileşim sıvı kromatografisini önemli ayırma mekanizmalarıyla birleştirdik. Ek olarak, iki boyut arasındaki çözücü uyumsuzluğunun üstesinden gelmek için, bir kolon içi seyreltme modülasyon modu benimsenmiştir. 2D-LC'nin güçlü ayırma kabiliyeti ile MS'in yüksek hassasiyetli algılama kabiliyeti birleştirilerek, APB'deki karmaşık bileşenlerin spektral bilgileri daha etkili ve kapsamlı bir şekilde elde edilir. Ayrıca, ağ ve büyük spektral bilgilerin MN teknolojisi ile görselleştirilmesi yoluyla, APB'nin bileşenleri sistematik olarak analiz edilir. Bu çalışmada gösterilen strateji ve sürecin, Tibet tıbbı kaynaklarını ilerletmek ve Tibet bitkileri için kalite kontrol standartlarını iyileştirmek için büyük önem taşıyan Tibet tıbbının maddi temeli üzerine araştırmaları teşvik ederek diğer Tibet ilaçlarının incelenmesine uygulanması beklenmektedir17. Genel deneysel süreç Şekil 1'de gösterilmiştir.

Burada sunulan deneyde, Agilent iki boyutlu sıvı kromatografisi (2D-LC) sistemine18 yeni bir kolon içi seyreltme modülatörü tanıtıldı. Bağımsız bir dağıtım pompası eklenerek, analizin akış yolu değiştirildi ve bu da 2D-LC analizinin yüksek bir ortogonalliği ile sonuçlandı. İki boyut arasındaki bağlantı ve geçiş, Şekil 2'de gösterildiği gibi iki adet altı vana ile gerçekleştirilir. Birinci boyutta bir örnek döngüsü doldurulduğunda, ikinci boyutta başka bir örnek döngüsü analiz edilir. Bu, 1D döngünün doldurma süresinin ve 2D'nin çalışma süresinin eşit olduğu anlamına gelir. Bu, ikinci boyutta İkili pompa tarafından üretilen hızlı gradyanı gerektirir. Atık suyun tamamı analiz edildiğinde hiçbir pik kaybı olmaz. Bu, özellikle bilinmeyen numunelerin analizi için yararlıdır. Veri analizi için birleştirilmesi gereken çok sayıda 2D kromatogram ile sonuçlanır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Hazırlık

  1. Numune hazırlama
    1. 3 mL'lik bir mikrosantrifüj tüpünde 0,25 g (kuru ağırlık) APB'yi tartmak için 1/10.000 hassasiyet terazisi kullanın, 2,5 mL metanol ekleyin ve ardından 30 dakika boyunca sonikasyon yapın (güç 240 W, frekans 40 kHz).
    2. 5 dakika boyunca 1,2 x g'da santrifüjleme yapın, süpernatanı toplayın ve 0,22 μm gözenek boyutuna sahip bir membran filtreden süzün.
  2. Deney materyallerinin hazırlanması
    1. İki boyutlu mobil fazı hazırlayın, organik faz B fazı olarak asetonitril kullanın ve sulu faz A olarak %0.1 formik asit ultra saf suyu yapılandırın.
    2. İki fazlı filtrasyon (0.22 μm) gerçekleştirin ve 15 dakika boyunca bir ultrason makinesi (40 kHz) kullanarak sonikasyon yapın. Kabarcıkları çıkarmak için değiştirilen mobil fazı temizleyin. Bu deneyde 1 boyutlu kolon olarak C18 kolonu kullanılmış, 2 boyutlu kolon olarak hidrofilik kolon kullanılmış ve kolon alete monte edilmiştir.
  3. Uygun şönt oranının ayarlanması
    1. 2D-LC cihaz çıkış hattını bir tişört üzerinden kütle girişine ve tişörtün diğer ucunu şönt bir hatta bağlayın. Kütle spektrumuna akış hızının 0.3-0.5 mL/dk olduğundan emin olmak için akış hızını uygun bir değere ayarlayın.
      NOT: 2D-LC'nin ikinci boyutu genellikle 2 mL/dk'nın üzerine ayarlandığından, bu akış hızı MS için çok büyüktür, bu nedenle bir bölme yapmak gerekir.

2. 2D-LC işlemi

  1. Instrument 1 Online simgesine çift tıklayın, kimyasal iş istasyonu otomatik olarak 1260 LC ile iletişim kuracak ve iş istasyonuna girecektir.
  2. 2D-LC yöntemi parametre ayarı için, normalde varsayılan olarak girilecek olan istenen arayüzü çağırmak için Görünüm menüsünden Yöntem ve Kontrolü Çalıştır ekranını seçin. Enjektör modülüne tıklayın, Yöntem'e sağ tıklayın, 1D pompanın enjeksiyon hacmini, akış hızını ve mobil faz zaman gradyanını ayarlayın.
  3. Durdurma Zamanı altına örnek çalışma süresini girin. Enstrüman ana menüsüne tıklayın ve açılır menüden 2D-LC Metodu'na tıklayın. 2D-LC modunda Kapsamlı'yı seçin. Modülasyon zamanında 2 dakika, 2D Gradyan Durdurma zamanında 1,9 dakika girin. Akış Ayarlarını 2 mL olarak ayarlayın. 2D Gradyanı düzenleyin ve dalga boylarına ayarlayın. Yöntemi düzenledikten sonra, yeni yöntemi adlandırmak için Yöntem menüsünde Yöntemi Farklı Kaydet'i seçin ve ardından Tamam'ı tıklatın.
    NOT: Harici transfer pompası, akış hızının manuel olarak ayarlanmasını gerektirir.

3. MS işlemi

  1. Vakum pompasının anahtarını AÇIN. Argon silindiri ana valfini ve basınç bölücü valfini açın ve basıncı yaklaşık 0,3 MPa'ya ayarlayın. Nitrojen valfini açın.
  2. Deney koşulları için yeterli vakum sağlamak için en az 8 saat bekleyin. Analizden önce argon ve nitrojenin hava basıncının yeterince yüksek olduğunu kontrol edin.
  3. MS kontrol yazılımını başlatmak için, yazılım panelindeki Isıtma SEI Kaynağına tıklayın ve ısıtıcı sıcaklığı (350 °C), kılıf akış hızı (35 arb), yardımcı hava akış hızı (15 arb), püskürtme voltajı (pozitif modda 3,8 KV, negatif modda -2,5 KV) ve kılcal sıcaklık (275 °C) dahil olmak üzere MS parametrelerini girin. İyon kaynağını etkinleştirmek için Uygula düğmesine tıklayın.
  4. MS yöntemini ayarlamak için, alım süresini, polariteyi, kütle aralığını, aktarım değeri numarasını, aktarım değeri süresini ve daha fazlasını yapılandırmak için değerler girin. MS Çalışma Süresini Ayarlayın (dk): 93.00. ScanEvent Ayrıntılarını Ayarlayın: ITMS + c norm o (100.0-1200.0), CV=0.0v. ITMS + c normu Dep MS/MS, (1)'den en yoğun iyon: Aktivasyon Tipi: CID, Min. Gerekli Sinyal: 500, İzolasyon Genişliği: 2.00, Normalleştirilmiş Coll. Enerji: 35.0, Varsayılan Şarj Durumu: 3, Aktivasyon S: 0.250, Aktivasyon Süresi: 93.000. Veriye bağlı ayarları yapmak için, devre dışı, Nötr kaybı üstte: 3, Ürün üstte: 3 olarak ayrı polarite ayarları kullanın. Ayarları cihaz yöntemi olarak yapılandırmak için Kaydet'e tıklayın.
    NOT: Çalışma süresinin sonu 2D-LC ile tutarlıdır.
  5. Sıra tablosunu açmak için Sıra Ayarı düğmesine tıklayın. Forma numune türünü, dosya adını, yolunu, numune kimliğini, cihaz yöntemini, konumu, enjeksiyon miktarını ve diğer bilgileri girin.
  6. Tıkla İndirim Dizi listesini kaydetmek için düğmesine basın, ardından Analizi Başlat MS alımını ayarlamak ve başlatmak için düğmesine basın. 2D-LC cihazında Kontrolü Çalıştır'a tıklayın ve Çalıştırma Yöntemi'ni seçin. Aynı zamanda, MS cihazı da Çalıştır düğmesine tıklar.
    NOT: Bu deneyde 2D-LC ve MS aynı yazılım tarafından kontrol edilmediğinden, her iki cihazda da ayrı ayrı kurulmaları gerekir.

4. Moleküler ağ çalışması

  1. Veri hazırlama: 2D-HPLC-MS ham kütle spektral verilerini dışa aktarın ve ikincil kütle spektral verilerini ProteoWizard'ın Msconvert'i aracılığıyla mzXML veya mzML verilerine dönüştürün. (http://proteowizard.sourceforge.net/).
  2. Veri yüklemek için resmi web sitesinden WinSCP yazılımını indirin ve mzML verilerini FTP protokolü aracılığıyla GNPS tarafından oluşturulan hesaba yükleyin. Kurulum tamamlandıktan sonra WinSCP'yi başlatın.
  3. GNPS FTP sunucusuna bağlanın: WinSCP arayüzünde, Oturum yapılandırma sayfasında, aşağıdaki bağlantı bilgilerini doldurun: Dosya protokolü: FTP'yi seçin. Ana Bilgisayar Adı için: massive.ucsd.edu. girin, bağlantı noktası numarası için: Varsayılan 22'yi koruyun.
  4. Hesap numarasını ve şifreyi girin. Yukarıdaki bilgileri doldurduktan sonra GNPS FTP sunucusuna bağlantı kurmak için Giriş Yap butonuna tıklayınız.
  5. Bir web tarayıcısı açarak ve GNPS web sitesini ziyaret ederek moleküler ağlar oluşturun (https://gnps.ucsd.edu/). Yeni kullanıcıların bir hesaba kaydolması ve ardından oturum açması gerekir.
  6. GNPS web sitesinin ana arayüzünde, üst gezinme çubuğundaki Görevler sekmesine tıklayın ve açılır menüden Yeni Bir Görev Oluştur'u seçin. Görev oluşturma sayfasında, Dosya Ekle düğmesine tıklayın, ardından veri dosyasını seçin ve yükleyin. (örneğin, mzML biçimi).
  7. Görev Parametreleri sekmesinde, MN'yi oluşturan çeşitli parametreleri ayarlayın. Bu parametreler arasında tepe çıkarma algoritması, tepe aşırı hareket değeri, benzerlik hesaplama yöntemi vb. bulunur. Gerektiği gibi uygun parametre ayarlarını yapın. Görevi çalıştırmak için sayfanın alt kısmındaki Analizi Başlat düğmesine tıklayın.
  8. Görev çalıştıktan sonra, oluşturulan görevi görev listesinde bulun ve analiz sonuçlarını görüntülemek için Hizmet Adı'na tıklayın. Web sitesi MN diyagramları, ikameler, simbiyotik ağlar ve diğer ilgili bilgileri sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

APB, MN yöntemi ile birlikte 2D-HPLC-MS teknolojisinin fizibilitesini doğrulamak için bir model organizma olarak kullanıldı. MS ham verilerini, parametreler varsayılan olarak ayarlanmış şekilde MN'ye aktararak bir MN oluşturuldu. MN, eksiksiz bir LC-MS-MS deneyinde tespit edilen tüm moleküler iyonları ve bu moleküler iyonlar arasındaki kimyasal ilişkileri görselleştiren görsel bir hesaplama stratejisidir13.

MN, MS-MS'ye girdikten sonra bileşik tarafından oluşturulan iki...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu deneyin ana odak noktası, iki boyutlu sıvı faz ayrımı çerçevesinde kısmi bir yöntemin optimizasyonuydu. Bunu başarmak için, yeni bir kolon içi seyreltme modülatörü, iki boyutlu sıvı kromatografisi (2D-LC) sistemine sorunsuz bir şekilde entegre edildi. Bu teknik düzenleme, APB olarak bilinen Tibet tıbbında bulunan kimyasal bileşenlerin profilini çıkarma yetkinliğini önemli ölçüde artırdığı için büyük önem taşıyordu. 2D-HPLC-MS teknolojisinin dahil edilmesi, APB'nin karmaşık bileşiminin kapsamlı bir şekilde incelenmesin...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar rekabet eden hiçbir mali çıkar beyan etmemektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82130113), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (82204765), Sichuan Doğa Bilimleri Vakfı (2022NSFSC1470), Sichuan İli Doktora Sonrası Özel Finansman Projesi (TB2023020) ve Chengdu Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi (BSH2021030) Xinglin Scholars Araştırma Teşvik Programı tarafından finanse edilmiştir. Bu fonlar deney ekipmanı, deney materyali ve yayın ücretleri açısından destek sağlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
AsetonitrilFisher kimyasalF22M81203Mobil faz
Aconitum sarkacı//Bitki ilacı
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC Agilent TechnologiesG2198-90001Sıvı kromatografisi
Tek kullanımlık şırıngalarChengdu Keen deney ekipmanı/1ml
EP tüpüChengdu Keen deney ekipmanı/3ml
Sıvı faz enjeksiyon şişesiChengdu Keen deney ekipmanı/1.5ml
LTQ XL Kütle SpektrometresiThermo FisherLTQ21991Kütle Spektrometresi
Mikro gözenekli membranlar Chengdu Keen deney ekipmanı/0.22μ m
Ultimate XB-C18,5 & mu; m,2,1 x 200 mmWelch00201-31015Ters fazlı kolon
Ultrasonik TemizleyiciGT SonicUGT20DEC048YUltrasonik Temizleyici 240W 40KHz
XAmide,3 & m,100ADalian Mondi TechnologyD2019110601Hidrofilik kolon

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Luo, H., et al. Correlation between Tibetan and traditional Chinese medicine body constitutions: A cross-sectional study of Tibetan college students in the Tibet Autonomous Region. J Tradl Chinese Med Sci. 5 (3), 215-221 (2018).
  2. Fu, X., et al. Standardized identification of compound structure in Tibetan medicine using ion trap mass spectrometry and multiple-stage fragmentation analysis. J Vis Exp. (193), 65054(2023).
  3. Kumar, P. R., Dinesh, S. R., Rini, R. LCMS-a review and a recent update. J Pharm Pharm Sci. 5, 377-391 (2016).
  4. Yan, P., et al. Strategy for the identification and quantitative analysis of the phytochemicals of traditional Chinese medicine by LC-MS/MS. Acta Pharm Sinica. 55 (7), 1494-1503 (2020).
  5. Iguiniz, M., Heinisch, S. Two-dimensional liquid chromatography in pharmaceutical analysis. Instrumental aspects, trends and applications. J Pharma Biomed Anal. 145, 482-503 (2017).
  6. Ye, C. X., et al. Application progress of 2D-LC in analysis and quality control of traditional Chinese medicine. Chem Reag. 44 (8), 1103-1110 (2022).
  7. Cao, J. L., et al. Online comprehensive two-dimensional hydrophilic interaction chromatography x reversed-phase liquid chromatography coupled with hybrid linear ion trap Orbitrap mass spectrometry for the analysis of phenolic acids in Salvia miltiorrhiza. J Chromatogr A. 1536, 216-227 (2018).
  8. Cao, J. L., et al. Qualitative and quantitative characterization of phenolic and diterpenoid constituents in Danshen (Salvia miltiorrhiza) by comprehensive two-dimensional liquid chromatography coupled with hybrid linear ion trap Orbitrap mass. J Chromatogr. 1427, 79-89 (2016).
  9. Wang, J., Ren, X., Wen, C., Xu, Y., Chen, Y. Separation and characterization of unknown impurities in rutin tablets using trap-free two-dimensional liquid chromatography coupled with ion trap/time-of-flight mass spectrometry. Rapid Commun Mass Spectrom. 34 (10), e8739(2020).
  10. Ma, L. J., Ma, N., Cao, J. L., Wan, J. B. Characterizing the influence of different drying methods on chemical components of Panax notoginseng leaves by heart-cutting two-dimensional liquid chromatography coupled to orbitrap high-resolution mass spectrometry. Food Chem. 369, 130965(2022).
  11. Wong, Y. F., et al. Untargeted profiling of Glycyrrhiza glabra extract with comprehensive two-dimensional liquid chromatography-mass spectrometry using multi-segmented shift gradients in the second dimension: Expanding the metabolic coverage. Electrophoresis. 39 (15), 1993-2000 (2018).
  12. Cao, J. L., et al. Comprehensively qualitative and quantitative analysis of ginsenosides in Panax notoginseng leaves by online two-dimensional liquid chromatography coupled to hybrid linear ion trap Orbitrap mass spectrometry with deeply optimized dilution and modulation system. Anal Chim Acta. 1079, 237-251 (2019).
  13. Nothias, L. F., et al. Feature-based molecular networking in the GNPS analysis environment. Nat methods. 17 (9), 905-908 (2020).
  14. Qin, G. F., et al. MS/MS-based molecular networking: an efficient approach for natural products Dereplication. Molecules. 28 (1), 157(2023).
  15. Qu, B., et al. Combining multidimensional chromatography-mass spectrometry and feature-based molecular networking methods for the systematic characterization of compounds in the supercritical fluid extract of Tripterygium wilfordii Hook F. Analyst. 148 (1), 61-73 (2023).
  16. Li, W., et al. An enhanced analytical strategy integrating offline two-dimensional liquid chromatography with high-resolution accurate mass spectrometry and molecular networking: Comprehensive characterization of HuangLian JieDu Decoction as a case study. J Sep Sci. 45 (14), 2734-2745 (2022).
  17. Dai, Y., et al. Comprehensive profiling of Sanguisorba officinalis using offline two-dimensional mixed-mode liquid chromatography × reversed-phase liquid chromatography, tandem high-resolution mass spectrometry, and molecular network. J Sep Sci. 45 (10), 1727-1736 (2022).
  18. Chen, Y., Montero, L., Luo, J., Li, J., Schmitz, O. J. Application of the new at-column dilution (ACD) modulator for the two-dimensional RP× HILIC analysis of Buddleja davidii. Anal Bioanal Chem. 412 (7), 1483-1495 (2020).
  19. Zhou, Y. P. Pharmacological action and toxicity of Aconite and its main components. Acta Pharm Sinica. (05), 394-400 (1983).
  20. Shao, X., Liu, F. Progress in the role of 14-Benzoylaconine in rheumatoid arthritis. Chinese J Pharmacol Toxicol. 33 (10), 917(2019).
  21. Hao, W. J. Study on the chemical constituents of the alkaloids from the root of Aconitum flavum HandMazz and its anti-tumor activities. , Ningxia Medical University. (2015).
  22. Han, X., Hou, Y. J. Research progress on the pharmacological effects and toxicity of Aconitine. J China Prescrip Drug. 12 (12), 149-150 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Alkaloid Tan mlamaBile ik zolasyonuK tle SpektrometrisiFitokimyasal AnalizDo al r n Ke fiKimyasal Kompozisyon

İlgili makaleler