Burada, sıçan masseterinde hacimsel kas kaybı (VML) yaralanmasının cerrahi olarak oluşturulması için bir protokol açıklıyoruz ve kraniyofasiyal kas yaralanmalarının incelenmesi ve bunların yeni hidrojel gibi biyomateryaller kullanılarak tedavisi için tekrarlanabilir ve erişilebilir bir model sağlıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Biyomühendislik Materyallerini İncelemek İçin Masseter Hacimsel Kas Kaybının Kemirgen Modeli
Bu makalede
Özet
Özet
Kraniyofasiyal hacimsel kas kaybı (VML) yaralanmaları, ciddi travma, cerrahi eksizyon, inflamasyon ve konjenital veya diğer edinsel durumların bir sonucu olarak ortaya çıkabilir. Kraniyofasiyal VML'nin tedavisi cerrahi, fonksiyonel kas transferini içerir. Bununla birlikte, bu prosedürler normal işlevi, hissi veya ifadeyi geri yükleyemez ve daha yaygın olarak, bu koşullar tedavi edilmez. Kraniyofasiyal VML'nin hayvan modellerinde iskelet kası rejenerasyonu üzerine çok az araştırma yapılmıştır. Bu el yazması, kraniyofasiyal VML yaralanmasının incelenmesi için bir sıçan modelini ve bu yaralanmaların tedavisinde biyomateryallerin histolojik değerlendirmesi için bir protokolü tanımlamaktadır. Cerrahi VML oluşturulması sırasında sıvı hidrojel ve dondurularak kurutulmuş iskeleler uygulanır ve masseterler, yüksek retansiyon oranları ve ihmal edilebilir komplikasyonlarla 12 haftaya kadar terminal zaman noktalarında eksize edilir. Hematoksilen ve eozin (HE), Masson Trikrom ve immünohistokimyasal analiz, iskelet kası rejenerasyonunun yanı sıra biyouyumluluk ve immünomodülasyon parametrelerini değerlendirmek için kullanılır. Hyaluronik asit bazlı bir hidrojelin çalışmasını gösterirken, bu model VML yaralanmalarında malzemelerin sonraki yinelemelerini değerlendirmek için bir araç sağlar.
Giriş
Şiddetli travma, cerrahi eksizyon, iltihaplanma ve diğer edinilmiş durumlar, endojen iskelet kası onarım mekanizmalarını zorlayan bir dereceye kadar doku kaybına neden olabilir. Birincil rejeneratif süreci destekleyen yerleşik hücrelerin ve yapıların kaybı, patolojik yeniden şekillenme ve doku fibrozu ile sonuçlanabilir, bu da uzun vadeli işlev ve duyu eksikliklerine neden olur ve hacimsel kas kaybı (VML) olarak adlandırılır1,2,3. VML yaralanmalarına inflamatuar yanıt, rejeneratif tıpta birçok teorik hedef sunan makrofajlar, sitokinler ve miy....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışma, Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda belirtilen tavsiyelere uyulması da dahil olmak üzere geçerli tüm düzenlemelere uygun olarak yürütülmüştür. UCSF Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Programı, tüm hayvan prosedürlerini ve ameliyat sonrası bakımı onayladı (IACUC protokolü #AN195944-01).
1. VML cerrahisi
- 12 haftalıkken, 276-300 g ağırlığındaki erkek Sprague-Dawley sıçanlarını, steril bir cerrahi alana transfer edilmeden önce% 1 -% 5 oranında izofloran genel anestezi kullanarak kapalı bir kapta uyuşturun.
- Kemirgenleri, boyun nötr bir po....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Biyomateryaller kullanılarak kraniyofasiyal VML ve doku rejenerasyonunun değerlendirilmesi için sonuçlar hem kantitatif hem de kalitatif sonuçları içerir.
Şekil 2 , daha önce açıklanan modeli kullanarak bir nitel değerlendirme örneğini göstermektedir. Hidrojelimizde de novo kas lifi büyümesinin gözlemlenmesi, kalitatif bir pozitif sonuçtur (Şekil 2A) ve bir biyomateryalin yeterli mimari destek ve büyüme faktörü veya besin ile.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Protokolde, en iyi sonucu elde etmek için özel dikkat gösterilmesi gereken birkaç kritik adım vardır. Adım 1.4, cildin yüzeysel masseter fasyasından ilk insizyonunu ve künt ayrılmasını tanımlar. Künt diseksiyon, çentiklenmeyi ve istemeden fasya boyunca bir pencere oluşturulmasını önlemek için alttaki kas ve fasyadan uzağa bakacak şekilde makasla doğrudan cilt boyunca yapılmalıdır. Submandibular ven veya dış karotis arterin kasıtsız yaralanmasını önlemek için yüzeyel masseterin kaudal yön.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu araştırma, UCSF Yıllık Araştırma Burs Programı ve C-Doctor Disiplinlerarası Translasyonel Proje Programı tarafından desteklenmektedir. Katkılarından dolayı California San Francisco Üniversitesi'ndeki Pomerantz Laboratuvarı ve Kraniyofasiyal Biyoloji Programı üyelerine teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| F1.652 Miyozin ağır zincirli (embriyonik) monoklonal antikor | DSHB | F1.652 | |
| Keçi anti-Fare IgG2b Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor 647 | Invitrogen | A-21242 | |
| Keçi anti-Tavşan IgG (H + L) Yüksek Çapraz Adsorbe Edilmiş İkincil Antikor, Alexa Fluor 488 | İnvitrojen | A-11034 | |
| Integra Standart Biyopsi Punchları, Tek Kullanımlık Standart biyopsi punchları; 5 mm, Çap: 0,19 inç, 0,5 cm | Integra | 12460411 | |
| DAPI'li Montaj Ortamı - Sulu, Fluoroshield | Abcam | ab104139 | |
| Tavşan Anti-Fare IgG H& L (Alexa Fluor 647) önceden emilmiş | Abcam | ab150127 | |
| Sülfametoksazol/Trimetoprim Oral Süspansiyon, Kiraz Aromalı, 473 mL | Med-Vet International | SKU: RXBAC-SUSP |
Kaynaklar
- Gilbert-Honick, J., Grayson, W. Vascularized and innervated skeletal muscle tissue engineering. Adv Healthc Mater. 9 (1), 1900626(2020).
- Aguilar, C. A., et al. Multiscale analysis of a regenerative therapy for treatment of volumetric muscle los....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
